LINC01123通过miR-449a调控HGF/c-MET通路参与宫颈癌发生发展的分子机制

摘要：目的　探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC01123对宫颈癌（CC）细胞增殖、迁移及侵袭的影响及可能的作用机制。方法　在GEPIA数据库分析CC组织中差异表达的lncRNA;体外培养人CC细胞系SiHa、HeLa、CaSki和人正常子宫颈上皮细胞HcerEpic,实时荧光定量PCR（qPCR）检测细胞中LINC01123、microRNA-449a（miR-449a）的表达水平。取对数生长期的CaSki细胞,分成对照组（NC）组、pcDNA3.1-NC组、LINC01123过表达组、si-NC组、LINC01123沉默组、LINC01123沉默+inhibitor-NC组、LINC01123沉默+miR-449a抑制剂组,转染48 h后,收集各组细胞用qPCR法检测转染效果;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡;划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞中肝细胞生长因子（HGF）/细胞间质上皮转化因子（c-MET）通路相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因验证LINC01123与miR-449a的靶向关系。结果　LINC01123在CC组织和细胞中的表达升高,而miR-449a在人CC细胞中呈低表达（P＜0.05）。与NC组比较,LINC01123沉默组LINC01123表达、细胞增殖活性、迁移和侵袭能力、HGF表达和磷酸化c-MET（p-c-MET）/c-MET比值降低,miR-449a表达、细胞凋亡率升高（P＜0.05）;下调miR-449a的表达可明显减弱LINC01123沉默对CaSki细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用（P＜0.05）。双荧光素酶检测结果显示,miR-449a是LINC01123的靶基因。结论　沉默LINC01123可通过上调miR-449a表达,抑制HGF/c-MET信号通路的激活,从而抑制CC细胞的生长和转移。     

盐酸小檗碱介导LINC01619/miR-27a/FOXO1通路改善糖尿病肾病模型db/db小鼠内质网应激作用研究

目的 研究盐酸小檗碱改善糖尿病肾病模型小鼠肾功能的作用及机制。方法 取8只C57BL/KS-db（db/m）雄性小鼠作为对照组,24只C57BL/KS-db（db/db）雄性小鼠随机分为模型组、盐酸二甲双胍（300 mg·kg^-1）组和盐酸小檗碱（300 mg·kg^-1）组,ig给药,每天给药1次,连续给药8周,对照组和模型组ig相同体积的蒸馏水。称体质量及肾脏质量,计算肾脏指数;采用全自动生化分析仪检测尿液中尿肌酐、24 h尿蛋白,以及血样中血肌酐、尿素氮的水平,计算肌酐清除率;采用苏木素-伊红（HE）染色、糖原过碘酸-雪夫（PAS）染色和马松（Masson）染色检测肾脏组织病理损伤程度;采用酶联免疫吸附剂测定（ELISA）法检测肾脏组织活性氧（ROS）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1 （MCP-1）水平;采用实时荧光定量PCR （qRT-PCR）法检测肾脏组织LINC01619/miR-27a表达水平;采用Western blotting法检测肾脏组织叉头框蛋白O1 （FOXO1）/葡萄糖调节蛋白78（GRP78）/C/EBP同源蛋白（CHOP）蛋白表达情况。结果 与模型组比较,盐酸小檗碱组空腹血糖、体质量、肾脏指数、24 h尿蛋白、血肌酐和血尿素氮显著降低（P<0.01）,尿肌酐和肌酐清除率显著升高（P<0.01）;肾脏组织病理损伤程度明显改善;肾脏组织ROS和MDA水平显著降低（P<0.001）,GSH、GSH-Px、CAT和SOD活性显著升高（P<0.05）;肾脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α和MCP-1水平显著下降（P<0.05）;肾脏组织中LINC01619表达显著升高（P<0.01）,miR-27a表达显著降低（P<0.01）;肾脏组织中FOXO1蛋白表达显著升高（P<0.01）,而GRP78和CHOP蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 盐酸小檗碱可改善db/db小鼠的肾功能,其作用机制可能与调控LINC01619/miR-27a/FOXO1通路,改善内质网应激有关。     

LINC01936在乳腺癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭特性的影响

摘 要：［目的］ 研究LINC01936在乳腺癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。［方法］ 从UCSC XENA数据库中获取LINC01936在1 099例乳腺癌组织和292例非配对癌旁组织及112例配对样本中的表达数据。用LINC01936-pcDNA3.1或pcDNA3.1质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞,获得过表达LINC01936的MCF-7细胞和对照 MCF-7细胞。使用cell counting kit-8(CCK-8) 细胞增殖实验测定LINC01936对MCF-7细胞增殖的影响。采用Transwell实验和细胞划痕实验测定细胞迁移和侵袭能力。通过细胞黏附实验检测黏附能力。荧光Hoechst33342染色法用于评价LINC01936对细胞凋亡的影响。Western blot和免疫荧光法用于检测NF-κB的蛋白水平。［结果］ 生物信息学分析表明,LINC01936在乳腺癌组织中低表达。CCK-8检测显示,LINC01936抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.05）。Transwell实验及细胞划痕实验表明,转染LINC01936过表达质粒后,MCF-7细胞迁移和侵袭能力下降。细胞黏附实验表明,LINC01936减弱乳腺癌细胞的黏附能力（P<0.05）。荧光染色分析表明,LINC01936过表达促进MCF-7细胞的凋亡。Western blot和免疫荧光显示,LINC01936促进NF-κB的表达。［结论］ LINC01936可能通过促进NF-κB的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。     

长链非编码RNA LINC00671对肝细胞肝癌生物学行为的影响及机制

背景与目的：肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是全球常见的肿瘤之一,目前已证实长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）参与HCC的发生、发展。近期有研究发现作为一种功能性的lncRNA,即长基因间非蛋白编码RNA 671（long intergenic non-protein coding RNA 671,LINC00671）可能是新的抑癌分子,但其在HCC中的作用及分子机制尚不清楚。本研究旨在探讨LINC00671在HCC中的作用及可能的分子机制。方法：通过GEPIA、starBase数据库分析LINC00671在HCC及正常肝组织中的表达及预后情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测LINC00671在不同HCC细胞系中的表达差异;再采用RNA荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）实验观察LINC00671亚细胞定位。体外敲低或过表达LINC00671后,利用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）、流式细胞术、细胞划痕及transwell实验分别观察LINC00671对HCC细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。随后通过生物信息学预测LINC00671作为细胞核内lncRNA的下游靶分子,starBase、GEPIA数据库分析LINC00671与靶分子c-myc的相关性并进行RTFQ-PCR及蛋白质印迹法（Western blot）验证。最后,通过甲基化DNA免疫共沉淀PCR（methylated DNA immunoprecipitation-PCR,MeDIP-PCR）观察LINC00671对靶基因启动子甲基化水平的影响。结果：数据库分析结果显示,LINC00671在HCC组织中明显下调且其高表达预示着较好的预后（P <0.05）;LINC00671在不同HCC细胞系中表达下调且存在表达差异;LINC00671主要分布于细胞核内。体外肿瘤细胞行为学实验发现,LINC00671可以明显抑制HCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（P<0.05）,同时其对细胞凋亡具有显著促进作用（P<0.05）。生物信息学分析结果显示,LINC00671在核内与癌基因c-myc启动子区可能存在Hoogsteen配对,数据库结果比对显示,LINC00671与c-myc表达水平呈现显著负相关（P<0.05）;LINC00671可以显著下调c-myc表达（P<0.05）。MeDIP-PCR结果显示,LINC00671可以增加c-myc启动子甲基化水平（P<0.05）。结论：LINC00671可能通过介导c-myc启动子甲基化下调后者表达从而抑制HCC进展。     

非小细胞肺癌组织中长链非编码RNA LINC02163的表达及临床意义

目的 探讨长链非编码RNA(long chain non?coding RNA,lncRNA)LINC02163在非小细胞肺癌(non?small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及临床意义.方法 收集80例NSCLC患者术后癌组织及癌旁组织作为样本,应用qRT?PCR法分别检测组织样本中ln...     

长链非编码RNA LINC01116靶向调控has-miR-4693-3P参与胶质瘤进程

目的 观察脑胶质瘤细胞中长链非编码RNA LINC01116表达变化及shRNA转染对其细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,同时探究LINC01116可能参与的调节方式。方法 取神经胶质瘤细胞系U251、U87MG、A172细胞及正常星形胶质细胞(NHA),采用Real TimePCR法检测LINC01116表达。随后胶质瘤细胞分别加入或不加入sh-RNA转染,CCK-8实验检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。生物信息学预测LINC01116可能的调节方式,并采用双荧光素酶报告基因验证RNALINC01116与has-miR-4693-3P的调控作用。结果 LINC01116在胶质瘤细胞中高表达,其抑制细胞增殖、抑制细胞迁移和胶质瘤侵袭。CCK8实验显示,sh-LINC01116处理的胶质瘤细胞存活率显著低于未转染的(P＜0.05)。细胞划痕实验显示,sh-LINC01116处理的U251细胞迁移能力明显低于对照组(P＜0.01)。Transwell实验显示,sh-LINC01116处理的U251细胞穿膜细胞数明显低于对照组(P＜0.01)。双荧光素酶报告基因结果显示LINC01116k可靶向调控has-miR-4693-3P。结论 胶质瘤多种细胞中LINC01116表达升高,shRNA转染能明显抑制其增殖、侵袭、迁移能力,同时LINC01116可靶向调控has-miR-4693-3P参与胶质瘤的进程。     

LncRNA LINC00987通过靶向miR-375抑制肺癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨IncRNA LINC00987对肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法 以正常肺泡上皮细胞HPAEPIC为对照,qRT-PCR检测肺癌细胞株A549、HCC827和H1299中LINC00987表达量,选择表达差异较大的A549细胞进行后续实验.将A549细胞分为pcDNA-control组、pcDNA-LI...