大鼠胰岛分离及纯化方案的改进

目的优化大鼠胰岛分离纯化条件,为糖尿病胰岛受损的发病机制研究及胰岛再生的应用提供必要材料。方法胆总管原位灌注胶原酶V消化胰腺并分离胰岛后,比较经典不连续密度梯度Ficoll离心法和Histopaque1077密度离心法纯化胰岛的效果,其间观察胰腺灌注液体积及消化时间不同对大鼠胰岛分离纯化的影响,并对纯化后的胰岛进行数量、纯度和功能的体外检测。结果 Histopaque 1077密度离心法比经典不连续密度梯度Ficoll离心法可得到更多优质的胰岛(P<0.01)。两种方法获得的胰岛在高糖刺激下释放胰岛素的能力差异无统计学意义(P>0.05)。胰腺灌注液之体积及消化时间对胰岛提取有十分重要的影响。结论 Histopaque 1077密度离心法简单易行且效率较高,有望成为纯化大鼠胰岛的首选方法,便于临床和基础研究工作的开展。     

小鼠胚胎胰腺组织分离及内分泌功能鉴定

目的探索小鼠胚胎胰腺组织分离技术,并对其形态学及内分泌功能进行鉴定。方法胚胎期（embryonic,E）11．5～16．5dC57BL／6小鼠胚胎胰腺组织体视显微镜下进行分离。利用常规HE染色、免疫组织化学及免疫荧光实验对分离的E12．5d、E14．5d及E16．5d胚胎胰腺组织进行组织学鉴定;糖刺激实验观察胚胎胰腺组织的内分泌功能。结果〉E12．5d小鼠胚胎胰腺组织可较易完整分离。≤E12．5d小鼠胚胎胰腺组织的形态和颜色均难以与周围组织分辨,需根据其与毗邻脏器的关系仔细辨别。分离的早期胚胎胰腺组织已有胰岛素表达,随着胚胎发育,胚胎胰腺组织胰岛素表达强度逐渐增加。结论小鼠胚胎发育和解剖学知识掌握,可提高胚胎胰腺组织分离技术,保证分离获得完整的胚胎胰腺组织,为胚胎胰腺组织移植研究奠定基础。     

Aging-related changes in the effects of social isolation on social behavior in rats

Aging is generally associated with cognitive dysfunction and alterations in emotional response. Moreover, in social situations, aging decreases social interaction with unfamiliar individuals, suggesting the decline of social cognition/motivation and a high level of anxiety. Although it is known that isolation housing has various effects on subsequent behavior, including social interaction depending on the age at isolation, the effects of isolation on aged subjects have not been examined. In the present study, we investigated the effects of aging and different periods of isolation housing on social interaction in male F344/N rats. Young (3-4 months old) and aged (24-25 months old) rats were either group-housed or socially isolated for 2 or 4 weeks. The rats were tested with age-matched and group-housed unfamiliar males in a social interaction test, and social (e.g. approach/following and sniffing) and non-social behaviors (e.g. self-grooming and ambulation) were recorded. The results indicated that group-housed aged rats showed less approach/following, sniffing, and ambulation than group-housed young rats. Moreover, in young rats, isolation housing gradually increased approach/following and sniffing depending on the isolation period. In contrast, in aged rats, more prolonged isolation (4 weeks) attenuated the 2-week isolation-induced increase of sniffing behavior and had no effect on approach/following. The present study suggests that aging decreases social investigation and induces high emotional response to a novel social environment, and that the behaviors can be differentially affected by social isolation depending on the age at isolation and the period of isolation.     

新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改进

目的：对新生大鼠心肌细胞分离培养方法进行改进,以期获得较高纯度和活力的心肌细胞;方法：采用胶原酶消化法分离大鼠心肌细胞,控制消化时间、消化温度、搅拌速度、离心次数和速度等,结合贴壁分离和Brd U干预纯化心肌细胞,流式细胞仪分析肌钙蛋白Ⅰ（troponin Ⅰ,Tn Ⅰ）表达,荧光探针进行胞浆游离钙离子染色;结果：多数心肌细胞自动收缩,逐渐聚集形成肌管,troponin Ⅰ阳性率达92％,所有心肌细胞钙离子染色阳性,并随细胞收缩呈周期性变化;结论：该方法分离培养的心肌细胞具有较高的纯度和活力。     

以膜片钳技术急性分离新生大鼠尾核神经元

背景：许多离子通道研究需要单个分散的神经元。人工原代培养的神经细胞受环境的影响,自身特性改变较大,而急性分离的神经元却能相对保持完好的生理特性。 目的：建立急性分离尾核神经元的方法,用膜片钳技术研究尾核神经元离子通道及其信号转到机制,利于深入了解尾核的功能。 设计、时间及地点：以细胞为对象的观察实验,于2008-02/12在三峡大学医学院实验中心完成。 材料：新生7~10 d Wistar乳鼠12只,雌雄不限。 方法：取7~10 d的大鼠,采用酶和机械分离法制备分散的单个尾核神经元,利用全细胞膜片钳技术记录电压依赖性钙电流。 主要观察指标：用全细胞膜片钳急性分离大鼠尾核神经元的形态学视察和电生理特性。 结果：用链蛋白酶(Protease)消化及机械分离法,急性分离的新生大鼠尾核神经元,表面光洁,胞膜完整,有较长的突起,形态和生理特性良好。利用急性分离的新生大鼠尾核神经元观察L-钙离子通道电流,所记录的电学参数在正常生理范围内,较好地保存电压依赖性钙离子通道活性。 结论：分离出的神经元形态正常,有较长的轴突;保存了主要的离子通道活性,成功建立了一种适用于膜片钳技术的大鼠尾核神经元急性分离方法。     

麻疹野病毒的分离鉴定及病毒分离的影响因素

目的确定吉林省近年流行的麻疹病毒基因型,分析麻疹野病毒分离的影响因素,为防控措施的制定及做好麻疹病原学检测提供参考依据。方法利用Vero／Slam细胞对114份麻疹咽喉拭子标本进行麻疹病毒分离,用逆转录一聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析方法扩增麻疹病毒核酸并进行基因型鉴定;统计分析不同采样时问、不同咽试子保存液对麻疹病毒分离的影响。结果114份麻疹咽喉拭子标本中分离到麻疹病毒31株,经鉴定均为H1基因型,出疹2d内的标本分离率较高,为38．09％。2％DMEM维持液作为咽拭子保存液的病毒分离成功率为30．69％。0．9％生理盐水作为保存液的病毒分离率为0。结论H1基因型麻疹病毒为吉林省近年流行的主要优势基因型,麻疹病毒的成功分离取决于采样时间、好的标本质量以及正确标本保存液。     

Identification,isolation and characterization of process-related impurities in Rizatriptan benzoate

Three process-related impurities were observed in routine monitoring of the samples by HPLC. These impurities were identified by LC–MS. One of the impurities, Imp-3 [rizatriptan-2,5-dimer] was reported in literature. Other two impurities were isolated by preparative HPLC and characterized by NMR, Mass and IR. Pure impurities obtained by isolation were co-injected with Rizatriptan benzoate sample to confirm the retention times in HPLC. Structure elucidation of these impurities by spectral data has been discussed in detail. These impurities were identified as 4-(5-((1H-1,2,4-triazol-1-yl)methyl)-3-(2-(dimethylamino)ethyl)-1H-indol-1-yl)-4-(5-((1H-1,2,4-triazol-1-yl)methyl)-3-(2-(dimethylamino)ethyl)-1H-indol-2-yl)-N,N-dimethylbutan-1-amine [rizatriptan-1,2-dimer] and [4,4-bis-(5-((1H-1,2,4-triazol-1-yl)methyl)-3-(2-(dimethylamino)-ethyl)-1H-indol-2-yl)-N,N-dimethylbutan-1-amine [rizatriptan-2,2-dimer].     

钙耐受大鼠心肌细胞分离方法研究

目的:探讨钙耐受大鼠心肌细胞的快速、高效分离方法。方法:采用自行改进的Langendorff心脏灌流装置,逆行主动脉恒流灌注获得单个耐钙心肌细胞,KB液温育后以全细胞膜片钳方式记录离子流。结果:分离所得70%存活心肌细胞有80%为钙耐受心肌细胞,可记录到典型的瞬时外向钾电流。结论:根据灌注压力变化掌握消化时间,控制好细胞分离过程的各种因素,能够获得大量具有正常电生理特性的钙耐受心肌细胞。     

安氏隐孢子虫卵囊分离纯化方法研究

目的 建立获取纯净的安氏隐孢子虫卵囊外培养模型。方法研究改进分离纯化安氏隐孢子虫卵囊的方法,采用蒸馏水稀释Sheather’s蔗糖溶液配制不同密度的蔗糖溶液,比较不同稀释比的Sheather’s蔗糖溶液漂浮卵囊的效果,并首次比较了蒸馏水和PBS稀释的Sheather’s蔗糖溶液分离纯化卵囊的活性,将两种方法分离纯化的卵囊37℃水浴1h进行脱囊率比较。结果2：1蔗糖溶液（2体积Sheather’s蔗糖溶液与1体积的蒸馏水）分离奶牛粪样中卵囊效果最好。漂浮三次即可获得大量卵囊,回收率为83．70％,三次漂浮的卵囊总数较Sheather’s蔗糖溶液高57．53％。蔗糖溶液多梯度密度纯化法纯化后的卵囊杂质较少,回收率为47．52％。蒸馏水稀释的蔗糖溶液分离纯化卵囊脱囊率为87．87％,PBS稀释的蔗糖溶液分离纯化卵囊的脱囊率为84．71％,差异无统计学意义P〉0.05）。结论2：1蔗糖溶液适用于分离安氏隐孢子虫卵囊,且用蒸馏水代替PBS稀释Sheather’s蔗糖溶分离纯化隐孢子虫卵囊其活性不受影响。可用于体外培养研究。     

免疫抑制剂SIPI-96-1014的分离和鉴别

在应用酵母突变体模型筛选免疫抑制过程中，筛选出一阳性菌株ＳＩＰＩ－９６－１０１４。经过发酵提取，分离和纯化，从其菌丝体中分离出一个活性化合物ＳＩＰＩ－９６－１０１４。通过对其理化性质等光谱数据的分析，确定其结构与化合物邻羟基乙酰苯胺一致。生物学活性研究表明，其对酵母野生株和突变株具有一定的抑制活性，详细的免疫抑制活性有待于进一步研究。