绿脓假单胞菌多重耐药机制的研究

目的调查我院2003-2005年临床分离多重耐药绿脓假单胞菌的氨基糖苷类修饰酶基因、β内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白oprD2基因存在状况；并研究整合子参与绿脓假单胞菌多重耐药的机制。方法纸片扩散法测定绿脓假单胞菌对14种抗菌药物的药物敏感性，并筛选出14株多重耐药菌株；聚合酶链反应检测氨基糖苷类修饰酶基因、β内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白oprD2基因；聚合酶链反应检测整合子5’保守区的整合酶基因和3’保守区的qacE△1-sulI基因。对整合酶基因的阳性扩增产物的限制性片段长度多态性分析进行整合子分类，整合子可变区扩增并测序。结果14株绿脓假单胞菌对14种抗菌药（哌拉西林等）的耐药率为14．3％-100．0％；氨基糖苷类修饰酶基因ant（2”）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅰ、ant（3”）-Ⅰ和aac（3）-Ⅰ检出率分别为78．6％、57．1％、57．1％、14．3％、7．1％、0；β内酰胺酶编码基因TEM和IMP的检出率分别为92．9％和42．9％，未检出VIM、OXA、PER、GES和SHV基因，1株外膜通道蛋白oprD2基因缺失；整合酶基因及qacE△1-sulI基因检出率分别为85．7％和78．6％，整合子可变区扩增有3种片段：1000、1300和1700，测序证实分别为aadA2、aadA6．odD和dfrⅫ-orfF-aadA2，其中aadA2是首次在绿脓假单胞菌的整合子中检出，aadA6-odD是一种新型的整合子可变区基因盒组合形式。Genbank号分别为DQ091178和DQ091179。结论我院多重耐药绿脓假单胞菌对B内酰胺类抗生素的耐药主要与TEM和IMP型耐药基因有关，对氨基糖苷类抗生素的耐药主要与氨基糖苷类修饰酶基因ant（2”）-Ⅰ、8aC（3）-Ⅱ和aac（6’）-Ⅱ有关；整合子参与了绿脓假单胞菌的耐药和多重耐药。     

阴沟肠杆菌Ⅰ类整合子可变区耐药基因的研究

目的 研究阴沟肠杆菌Ⅰ类整合子可变区基因盒的种类及位置,探讨Ⅰ类整合子携带的耐药基因盒特点,分析耐药基因盒与阴沟肠杆菌耐药性的关系。方法 采用纸片扩散法(K-B法)测定抗生素的敏感性;PCR扩增阴沟肠杆菌Ⅰ类整合子阳性株中的可变区基因盒,并测序分析。结果 可变区一共扩增出15种基因盒,其中耐药基因盒7种：aadA2-dfrA12、aadA2-aadB、aadA2、aadB、dfrA12、aac(6′)-Iica-catB3和blaIMP-4,以aadA2-dfrA12(1913bp)最常见。许多质粒DNA和染色体DNA的PCR扩增产物相同。结论 Ⅰ类整合子可变区携带的耐药基因盒以耐氨基糖昔类和耐甲氧苄氨嘧啶类抗生素基因为主。耐药基因在阴沟肠杆菌中存在水平播散和垂直传播的现象。     

耐碳青霉烯肠杆菌科细菌耐药基因及整合子研究

目的：了解临床分离的耐碳青霉烯肠杆菌科细菌（CRE）耐药性和分布特点及其携带的整合子和碳青霉烯基因情况。方法：收集2021年1月至2021年12月郑州大学第一附属医院郑东院区住院患者临床分离的非重复CRE共659株,使用VITEK 2-Compact全自动微生物鉴定及药敏分析系统进行细菌鉴定及药敏试验,头孢曲松、头孢呋辛和氨苄西林/舒巴坦药敏试验采用纸片扩散法（K-B法）检测,采用聚合酶链式反应（PCR）检测碳青霉烯基因基因及Ⅰ类整合酶基因。结果：659株CRE主要分布在重症监护室（45.22%）、呼吸重症监护室（13.96%）、急诊重症监护室（9.26%）、泌尿外科（7.74%）、呼吸内科（4.10%）,对β–内酰胺类和喹诺酮类抗菌药物耐药率大于90%,blaKPC、blaNDM、blaIMP基因的检出率分别为81.33%、10.93%、0.30%,5株耐碳青霉烯肺炎克雷伯（CRKP）中同时携带blaKPC和blaIMP基因。CRKP、耐碳青霉烯大肠埃希菌（CREC）中Ⅰ类整合酶阳性率分别为90.94%、74.07%。结论：659株CRE中,CRKP分离率较高,耐药基因以blaKPC...     

医院感染革兰阴性杆菌中整合子介导耐药及水平播散机制研究

目的 研究整合子在医院感染革兰阴性杆菌中的分布及其与病原菌耐药的相关性,探讨Ⅰ类整合子与临床耐药播散的关系.方法 运用K-B法检测临床株的耐药表型,纸片扩散法检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),PCR扩增筛选含整合子的临床菌株,接合传递实验、套式PCR、质粒谱分析及DNA测序研究携带耐药基因的Ⅰ类整合子与耐药播散的关系.结果 66.4%的医院感染革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子阳性,未检测出Ⅱ、Ⅲ类整合子;Ⅰ类整合子可变区扩增片段大小从0.7～2.3 kb,编码对氨基糖苷类、磺胺类抗菌药物和氯霉素耐药的基因;整合子阳性组中ESBLs、多药耐药菌均明显高于阴性组;整合子可通过质粒在不同菌属闻水平传播.结论 Ⅰ类整合子在医院感染革兰阴性杆菌中广泛分布,可通过质粒在不同菌属间水平传播,在耐药基因传播中起重要作用,应引起临床足够的重视.     

铜绿假单胞菌连续分离株耐药性与遗传学特征研究

目的了解铜绿假单胞菌（PAE）连续分离株耐药性与遗传学特征。方法采用PCR检测86株PAE连续分离株耐药基因和整合子、转座子。结果86株中oprD2基因缺失47株（55.0%）、β-内酰胺酶基因blaCARB阳性26株（30.2%）、blaVIM阳性12株（14.0%）、blaDHA阳性3株（3.5%）、blaTEM阳性1株（1.1%）;氨基糖苷类修饰酶基因ant（2″）-Ⅰ阳性24株（27.9%）、aac（6′）-Ⅱ阳性21株（24.4%）、aac（6′）-Ⅰb阳性13株（15.1%）、ant（3″）-Ⅰ阳性4株（4.7%）,存在克隆传播现象。结论绍兴连续分离的PAEβ-内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。PAE可导致克隆传播医院感染,并存在暴发性流行。     

临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子与ISCR1研究

目的 了解临床分离多重耐药鲍曼不动杆菌和铜绿假单保菌Ⅰ类整合子与插入序列共同区1(ISCR1)的分布情况.方法 2010年1月至2013年12月共收集我院126株多重耐药鲍曼不动杆菌和89株多重耐药铜绿假单胞菌,采用PCR法扩增Ⅰ类整合酶、Ⅰ类整合子基因盒、ISCR1、ISCR1可变区.Ⅰ类整合基因盒和ISCR1可变区的PCR产物分别用HinfⅠ、RasⅠ进行酶切,相同类型酶切图谱的PCR产物随机挑取一例进行测序,测序结果在GenBank中用BlastN进行核酸序列同源性搜索.结果 在多重耐药鲍曼不动杆菌中,检出79例Ⅰ类整合酶,67例Ⅰ类整合子基因盒阳性,含有6种类型;59例ISCR1阳性,其中9例ISCR1可变区阳性.在89株多重耐药铜绿中,检出41例Ⅰ类整合酶,36例Ⅰ类整合子基因盒阳性,含有10种类型;9例ISCR1阳性,其中4例ISCR1可变区阳性.有8株鲍曼不动杆菌和2株铜绿假单胞菌同时携带Ⅰ类整合子和ISCR1可变区结构.结论 在多重耐药铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中,Ⅰ类整合子和ISCR1分布较广.     

肺炎克雷伯菌连续分离株耐药性及Ⅰ类整合子遗传标记研究

目的 了解肺炎克雷伯菌(KPN)连续分离株整合酶基因存在情况和耐药性.方法 应用双基因聚合酶链反应法对44株KPN连续分离株进行检测.结果 44株KPN菌连续分离株中qacE△1-sul1基因阳性12株(27.3%).结论 在肠杆菌科细菌耐药机制中,Ⅰ类整合子起着非常重要的作用,它的3'-保守端有季胺类化合物(消毒剂)的耐药基因(qacE△1)和磺胺耐药基因(sul1)重叠基因,为Ⅰ类整合子遗传标记,整合子使细菌能够很快获得新的耐药基因以适应环境要求.     

Integron-mediated antibiotic multiresistance in Acinetobacter baumannii clinical isolates from Spain

Objective  To determine whether non-epidemiologically related, antibiotic-resistant isolates of Acinetobacter baumannii from different geographical origins posses common type 1 integrons.
Methods  The epidemiologic relationships between seven A. baumannii strains recovered from different Spanish hospitals were established by pulsed-field gel electrophoresis, the presence of integrons being determined by PCR and DNA sequencing.
Results  Integron analysis showed the presence of four different integrons, containing six different known genes ( aacC1, aacA4 , aadA1 , aadB , oxa21 and oxa37 ) plus an ORF. It was found that the same integron was present in different unrelated strains and that related strains could have different integrons.
Conclusion  These results show the potential risk of integron dissemination among different strains of A. baumannii .     

Class 1 integronase gene and tetracycline resistance genes tetA and tetC in different water environments of Jiangsu Province, China

Class 1 integronase gene (intI1) and tetracycline resistance genes (tetA and tetC) from various environmental sites in Jiangsu Province (China) were detected using qualitative PCR (polymerase chain reaction) and quantified with SYBR Green-based qRT-PCR (quantitative real-time PCR) in this study. Qualitative PCR assays demonstrated that intI1, tetA and tetC occurred in the water environments of Taihu Lake, the Nanjing section of the Yangtze River, a sewage treatment plant (STP) in Nanjing City, and two drinking water treating bioreactors. qRT-PCR results showed that abundance of intI1 in lake water and sediments was lower than the tet genes, for a given sample site and date (P < 0.05). On a volumetric basis, lake sediments contained higher concentrations of the three genes by four to five orders of magnitude than water samples, and lake water and sediments sampled in April contained fewer copies of all the genes than the samples collected in June and August (P < 0.05). The levels of intI1, tetA and tetC in the Yangtze River water increased significantly after the river flowed through Nanjing City (P < 0.05). 94.1% integron, 97.2% tetA and 98.3% tetC were removed by the activated sludge process in the STP, and more than 80% of each gene was removed in both of the two biofilters in terms of relative concentration based on sample volume. However, on the basis of DNA mass, lower removals were obtained for both the activated sludge and biofiltration processes.