高灵敏度焦磷酸测序平台的建立及应用研究

焦测序技术是一种基于生物发光法测定焦磷酸盐的测序技术,在进行DNA序列分析时不需要电泳和荧光标记,定量性能好,结果准确,可实现自动化。但其应用过程中存在3个技术瓶颈：一是测序试剂灵敏度低、成本高;二是测定仪器价格昂贵;三是测序模板制备过程繁琐。本课题组针对这些技术瓶颈,提出了一整套解决方案,包括高灵敏度焦测序反应试剂的研制、小型便携式焦测序仪的研制、测序模板的制备方法研究等。建立的高灵敏度微型化焦测序平台在分子诊断的各个领域得到了充分的应用,如细菌病毒转基因成分等的序列测定、单核苷酸多态性测定、拷贝数变异测定、基因突变位点测定、microRNA测定、基因表达量测定和药物基因组学研究,具有测序灵敏度高、仪器体积小、成本低、操作简便快速等优点,应用前景广阔。本文详细介绍了本课题组在提高焦磷酸测序反应灵敏度、简化测序过程、改进测序仪器和拓展焦磷酸测序应用范畴所做的系列创新性工作。     

血清Ⅰ型胶原吡啶交联终肽、骨钙素在肿瘤骨转移中的应用

目的探讨骨胶原吸收指标血清Ⅰ型胶原吡啶交联终肽（ICTP）和骨形成指标血清骨钙素（OC）二者在肿瘤骨转移的应用价值。方法收集我院肿瘤科经病理确诊的肺癌患者血清65例,乳腺癌患者血清36例,通过影像学诊断,将其分为骨未转移组和骨转移组两组。并征集我院健康体检人群41例作为健康对照组,分别定量测定血清ICTP、OC和碱性磷酸酶（ALP）浓度。结果血清ICTP在肺癌和乳腺癌骨转移组[（27．80±11．14）μg／L和（122.33±34．92）μg／L]均显著高于骨未转移组[（8．95±3．81）μg／L和（8．40±4．59）μg／L],差异有统计学意义（P〈0．01）,骨未转移组较健康对照组[（5．16±1．76）μg／L]亦有极显著性差异（P〈0．01）,血清OC值在乳腺癌骨转移组[（69．31±36．17）ng／mL]亦显著高于骨未转移组[（15．54±6．09）ng／mL],差异有统计学意义（P〈0．01）,而肺癌骨未转移组血清OC值较健康对照组以及肺癌骨转移组较肺癌骨未转移组差异均无统计学意义（P〉0．05）。血清ICTP在诊断肺癌和乳腺癌骨转移中是特异性高、敏感度较好的指标,血清OC在诊断肺癌骨转移中单独使用敏感度不够,意义不大,但在诊断乳腺癌骨转移时特异度和敏感度均较好。两者联合诊断乳腺癌骨转移的敏感度为96．3％,特异度为96．7％,联合诊断肺癌骨转移的敏感度为80．3％,特异度为84．2％。结论可根据需要单独或联合应用血清ICTP和OC,作为除影像学外诊断肿瘤骨转移有用的实验室诊断指标。     

A novel,mild, specific and indirect maleimido-based radioiodolabeling method

In an effort to design a mild, non-oxidative and site-specific means of radiolabeling bioactive molecules we have employed maleimido-sulfhydryl chemistry to produce bioactive hormone radioligands. We have prepared two novel radioiodolabeled reagents, 3′-maleimidopropanoyl-3-¹²⁵I-tyramide and its retro analog, N-maleoyl-N′-3-(4-hydroxy-3-¹²⁵I-phenyl)propanoy1 ethylenediamide, by either oxidative radioiodination of the precursors or radiolabeling of the phenolic component prior to its incorporation into the radiolabeling reagents. These reagents were then used to radiolabel analogs of parathyroid hormone (PTH) and parathyroid hormone-related protein (PTHrP) in an efficient way, yielding reaction mixtures which were easily purified. The radioligands obtained are stable upon storage and bind in a reversible manner to a single population of binding sites displaying affinity in the low nanomolar range. The potencies of these analogs are comparable to the non-modified PTH and PTHrP analogs. This study demonstrates the utility of the novel maleimido-based indirect radioiodination approach and highlights some of its advantages over either direct oxidative procedures or acylation using the Bolton-Hunter reagent.     

福莫司汀对培养的HL60细胞DNA的损伤

福莫司汀对培养的ＨＬ６０细胞ＤＮＡ的损伤寿江１，冯杏婉（北京药理毒理研究所，北京１００８５０，中国）１ＮｏｗｉｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＲａｄｉａｔｉｏｎＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８５０，Ｃｈｉ...     

医科院校科研试剂集中采购与供应的实践与思考

目的 探索建立医科院校集中采购与集中供应相结合的科研试剂采购供应管理体系。方法 对当前医科院校科研试剂采购供应管理的现状进行描述性分析,发现集中采购与集中供应在具体实施过程中存在的问题和困难。从采购和供应2个关键环节入手,探讨建立并实践一种“问题驱动”的科研试剂采购供应管理体系。结果 在采购环节,以品牌折扣作为采购对象,解决试剂品种规格多、价格变化快的问题;以试剂消耗量为分档依据确定入选供应商数量,解决市场竞争不充分问题。在供应环节,设立专门机构负责产品质量和服务监督,严格实施产品出入库办理和供应商管理,显著提升试剂供应和售后服务质量、强化试剂财务监管。结论 科研试剂采购供应是科研管理的重要内容,集中采购与供应相结合的试剂管理体系能够有效提升科研试剂管理水平。     

自制红细胞悬液与商品红细胞试剂反定型检测结果分析

血型检测是采供血机构的常规检查项目之一,微量反应板法血型检测技术是血站目前应用最为广泛的一种血型检测技术。用于ABO反定型的红细胞可分为自制红细胞悬液与商品红细胞试剂。自制红细胞悬液成本低,制备容易,但保存期短,人为影响因素较多,易造成血型错判。商品红细胞试剂使用方便,保存期长,但价格较贵。笔者对一种商品红细胞试剂与我站血型室自制红细胞悬液反定型血型检测结果进行了对比分析,现报告如下。     

浅析体外诊断试剂产品说明书的常见问题

本文对体外诊断试剂产品说明书的常见问题进行了分析,并为体外诊断试剂生产企业编写产品说明书提出意见和建议.     

四种分析试剂对生化分析仪测定血清镁结果的影响

摘要 目的 探讨肌酸激酶（CK-MB）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、甘油三酯（TG）四种分析试剂对奥林帕斯AU2700全自动分析仪测定血清镁结果的影响。方法 单测血清镁分别与四个项目检测后再测镁结果做比较；混合血清分别加入生理盐水和四个项目分析试剂1，制成5份标本，每份均重复测定10次；混合血清单测镁10次作为对照，分别测定四个项目3次后，各重复测定混合血清镁10次。结果 凡CK、CK-MB、HDL-C、TG测定后再测镁与单测镁结果比较，差别均有非常显著性意义﹙P＜ 0.01﹚；四种分析试剂1对血清镁测定结果均有明显的正干扰；四种试剂对镁测定结果影响：CK、CK-MB、TG持续到第3管，HDL-C持续到第4管。结论 自动生化分析仪测定CK还是CK-MB、TG后再测定血清镁，中间间隔至少要有三个项目分析试剂，测定HDL-C后再测定血清镁，中间间隔至少要有四个项目分析试剂对镁离子测定无影响的分析项目或启用试剂针特殊的清洗程序，如为高级生化分析仪应将相互有影响的项目置于不同的分析模块，以避免试剂携带污染对测定结果的影响。     

双试剂直接分光光度法测定血清总铁结合力

目的建立一种灵敏度高、选择性好的铬天青B血清总铁结合力的直接测定法。方法在pH4.5的条件下,结合铁从转铁蛋白释放,铬天青B与血清中的铁和过量的铁标准液发生显色反应,再加入碱性缓冲液,在pH7.8的条件下,转铁蛋白从铁和铬天青B复合物中吸引铁与其结合,溶液的吸光度值下降与血清总铁结合力浓度呈正比。对反应条件和方法性能进行系统研究。结果显色络合物的最大吸收波长为630nm,线性可达130.0μmol/L,回收率为98.3%~99.2%,批内变异系数为2.7%,批间变异系数为3.8%,与碳酸镁作吸附剂的手工比色法比较有良好相关性,回归方程为Y=0.994X 0.40,r=0.993。70例健康成人血清总铁结合力含量为51.3~76.3μmol/L。结论该法试剂稳定,具有操作快速、灵敏、简便和结果准确等优点,适宜于血清总铁结合力的手工测定和自动化分析。