52 例病毒性肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒 RNA 和 HCAg-NS3 的测定

应用地高辛标记探针原位杂交法和单克隆抗ＨＣＶ－ＮＳ３－ＨＲＰ建立直接酶标免疫组化法分别测定５２例肝炎患者肝组织ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＡｇ－ＮＳ３。结果抗ＨＣＶ阳性组ＨＣＶＲＮＡ检出率５７．１％（１６／２８），ＨＣＡｇ－ＮＳ３检出率５３．６％（１５／２８）；抗ＨＣＶ阴性组其两项检出率均为１２．５％（３／２４）。肝组织中ＨＣＶＲＮＡ阳性物呈蓝紫色细小颗粒存在于肝细胞核或胞浆内，其在肝小叶中的分布可分为３型，即弥漫型、局灶型、散在型。肝组织中ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性物呈棕黄色细小颗粒分布于肝细胞核或胞浆内，以单个或数个阳性细胞散布于肝小叶中。２３例ＨＣＶＲＮＡ或／和ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性病例以肝炎后肝硬化（ＬＣ）病例占多数（１４／２３），其次为慢性重型肝炎（ＣＳＨ）和中度慢性肝炎（ＣＡＨ）。此两种检测方法具有较高符合率（９０．４％，４７／５２），表明病毒核酸及其表达产物均存在于肝细胞内，与ＨＣＶ感染密切相关。这为ＨＣＶ感染诊断提供了直接依据，有利于研究ＨＣＶ感染中病毒复制、慢性化进程、抗病毒治疗监测及重叠感染时病毒相互关系。     

Zur Frage der Hepatitishäufigkeit nach Austauschtransfusionen bei Neugeborenen

Zusammenfassung 63 Neugeborene wurden nach insgesamt 93 Austauschtransfusionen während eines Zeitraumes bis zu 6 Monaten auf das Risiko einer Transfusionshepatitis untersucht. Dabei wurden zusätzlich zur klinischen Beobachtung die Transaminasen und der Nachweis des Australia-Antigens als Kontrollkriterien gewertet. Klinisch wurde in keinem Fall eine Hepatitis beobachtet, eine SGPT-Erhöhung nach 3 Monaten in einem Fall könnte für eine anikterische Hepatitis sprechen. Ein Australia-Antigen-Nachweis konnte bei negativen Ausgangsbefunden bei Spendern und Empfängern nirgends in den Nachuntersuchungen erbracht werden. Demnach ist das Hepatitisrisiko einer Austauschtransfusion bei Wahrung der heute üblichen Spenderauslese praktisch nicht zu befürchten.     

122例急性戊型肝炎重叠感染患者的肝功能及临床特点分析

目的 比较分析单纯急性戊型肝炎与重叠感染患者的肝功能指标和临床特点.方法 以40例单纯急性戊型肝炎为对照,回顾性分析了122例重叠感染戊型肝炎患者的肝功能指标、临床资料.结果 单纯戊肝组、甲戊重叠感染组、乙戊重叠感染组,三组之间ALT、AST、TBIL、DBIL差异均无统计学意义(P0.05),急性戊肝组与乙戊重叠感染组,甲戊重叠感染组与乙戊重叠感染组的白蛋白、球蛋白有统计学差异(P<0.01);甲戊重叠感染、乙戊重叠感染与单纯戊肝相比较临床合并症多、并发症重.结论 戊型肝炎重叠感染,特别是乙戊重叠感染患者,要加强临床监测,提高早期预防并发症的意识,以降低病死率.     

乙肝病毒e抗原反式激活蛋白的亚细胞定位研究

目的 验证HBeAgTP基因在细胞内的表达及表达蛋白的亚细胞定位。方法 构建HBeAgTP基因的酵母表达诱饵质粒pGBKT7-HBeAgTP及绿色荧光蛋白表达质粒DEGFP-C1-HBeAgTP，pEGFP-C1．HBeAgTP转染HepG2细胞，24h后荧光显微镜下观察蛋白表达的亚细胞定位。pGBKT7-HBeAgTP转化AH109酵母细胞，提取转化了质粒的酵母蛋白质，进行Western免疫印迹分析。结果 成功构建出HBeAgTP基因。HBeAgTP基因的酵母表达诱饵质粒pGBKT7-HBeAgTP及绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1．HBeAgTP，Western免疫印迹法印证HBeAgTP可表达蛋白，其表达的蛋白亚细胞定位于细胞质。结论 HBeAgTP基因可表达蛋白，其表达蛋白亚细胞定位于细胞质。     

血清和肝组织TGF-β1与慢性乙型肝炎肝纤维化的关系

目的 探讨血清和肝组织TGF-β1水平与慢性乙肝肝纤维化程度的关系,为肝纤维化诊断提供依据.方法 以肝活检病理诊断区分131例慢性HBV感染者纤维化程度(S0～S4),用ELISA法检测血清TGF-β1水平,免疫组化法检测肝组织TGF-β1表达并半定量.分析血清TGF-β1和肝组织TGF-β1表达与肝纤维化程度的关系.结果 血清和肝组织TGF-β1均与肝纤维化程度具有非常显著性正相关(r分别是0.74和0.89,P＜0.01).血清TGF-β1各组间比较差异有统计学意义(P＜0.01).组问分割比较,S0和S1分别与S4比较差异均有统计学意义(P＜0.005);各组与S0组比较差异均有统计学意义(P＜0.005);S1组和S3组之间比较有统计学意义(P＜0.005).肝组织TGF-β1表达在S3和S4组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05),其余组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01).血清TGF-β1和肝组织TGF-β1表达具有非常显著性意义相关(r=0.61,P＜0.01).结论 血清TGF-β1和肝组织TGF-β1水平与慢乙肝肝纤维化程度相关,血清TGF-β1有希望成为临床判断轻度或重度肝纤维化的无创伤性诊断指标.     

慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗前PBMC细胞因子的研究

目的 研究准备抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者的免疫特点.方法 将30例慢性丙型肝炎患者和10例正常对照外周血单个核细胞(PBMC)体外培养72 h后,用ELISA法检测培养上清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α的浓度.结果 (1)慢性丙型肝炎患者PBMC培养上清中IFN-γ、IL-10和TNF-α的水平明显升高(P＜0.05),没有检测到IL-2、IL-4、IL-12的基础分泌.(2)不同病情患者间的细胞因子的分泌水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢性丙型肝炎患者体内TH2型细胞因子的分泌占优势.提示通过调整TH1/TH2失衡可能达到抗病毒治疗目的.     

慢性乙型肝炎患者肝细胞凋亡的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者肝细胞凋亡与肝组织诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、肝脏病理及血清转氮酶水平之间的相关关系.方法 取37例CHB患者和10例正常对照,采用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测肝组织中的细胞凋亡情况,免疫组化法检测肝组织iNOS的表达,并常规测定患者肝组织炎症分级和纤维化分期、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、HBV DNA水平.结果 所有CHB患者的肝组织中均见到不同程度的TUNEL染色阳性.正常对照肝组织中未见到TUNEL阳性肝细胞.在CHB肝组织中,凋亡指数(A1)与炎症分级(r=0.404,P=0.015)及肝组织iNOS水平(r=0.465,P=0.004)明显相关并有统计学意义,而与血清ALT水平、HBV DNA以及组织学纤维化分期无明显关系.结论 慢性乙型肝炎患者体内氧化应激水平可能是肝细胞凋亡的诱导因素之一,细胞凋亡参与了CHB的肝细胞损伤过程,但并不影响患者的生物化学指标.     

中国庚型肝炎病毒河南株非结构基因（NS）3区cDNA的克隆 …

目的 为了研究中国庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）非结构（ＮＳ３）区基因结构特征。方法 利用逆转录－半巢式－聚合酶链反应从河南１份ＨＧＶ ＲＮＡ阳性血清获得覆盖ＨＢＶ ＮＳ３全长ｃＤＮＡ的４个片段，并克隆到ｐｃＤＮＡⅡ载体中，采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧末端终止法测定全部ｃＤＮＡ序列。结果 发现克隆到的包括ＨＢＶ ＮＳ３区在内的ｃＤＮＡ序列和度为２１３７个核苷酸，编码７１１个氨基酸。与国内外已测定的５株全序列的相     

逆转录病毒载体介导乙型肝炎病毒反义基因的转录表达

为了探索在真核细胞内转录表达乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）反义核酸的方法，用基因重组技术将ＨＢＶ前Ｃ／Ｃ基因（ＰｒｅＣ／Ｃ）和前Ｓ／Ｓ基因（ＰｒｅＳ／Ｓ）片段反向插入逆转录病毒载体质粒，再将重组体分别转染ＰＡ３１７包装细胞，进而获得能够介导ＨＢＶ反义基因向小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞转移表达的重组逆转录病毒。经分子杂交试验表明，含有ＨＢＶ反义基因的重组逆转录病毒序列已经整合到转染的ＰＡ３１７细胞染色体上；转导的ＮＩＨ３Ｔ３细胞内有ＨＢＶ反义ＲＮＡ转录表达。结论：逆转录病毒载体包装细胞系统能够介导ＨＢＶ反义基因在真核细胞中转录表达，因而有可能利用反义技术和基因转移方法进行抗－ＨＢＶ基因治疗     

丙型肝炎病毒核心蛋白在患者外周血单个核细胞内的核表达检测

目的　检测和研究丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)核心蛋白在患者外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells ,PBMC)内核表达的意义 ,并探讨其与临床的关系。方法　对 6 6例慢性丙型肝炎患者PBMC标本进行免疫组化检测 ,并将HCV蛋白抗原定位分布情况与患者临床状况进行比较分析 ,对其中 2 7例患者PBMC进行HCVRNA和HCVAg的平行检测和分析。结果　免疫组化结果显示 ,慢性丙型肝炎患者PBMCHCVAg(core +NS3)阳性检出率为 77 2 7% (5 1 6 6 )。结果还证实 ,HCV核心蛋白均定位于胞核内 ,且呈强表达 ;NS3蛋白主要定位于胞质内 ,呈弱表达。当进行HCVAg在PBMC内定位情况与患者临床状况比较分析时显示 ,病情较重患者PBMC内核心蛋白表达阳性率 (35 2 9% )明显高于病情较轻者 (5 88% ) (P <0 0 0 1)。结论　HCV核心蛋白在PBMC内核表达与患者临床状况相关 ,提示其可能是丙型肝炎慢性化的一个指标 ,并可能在肝硬化和肝癌发生上起一定作用