四硫化四砷对人宫颈癌细胞Hela环氧合酶表达和PGE2产生的影响

目的研究中药雄黄主要成分四硫化四砷（As4S4）对子宫颈癌细胞Hela增殖和凋亡作用的影响及其作用机制。方法以不同浓度（7．5、15、30、60mg／L）的As4S4对Hela细胞分别处理不同的时间（12、24、36、48、60h）,用四甲基偶氮唑蓝（MTY）法测定细胞增殖反应;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测环氧合酶-2（COX-2）蛋白的表达;用放射免疫法检测细胞PGE2释放水平。结果As4S4对Hela细胞增殖有明显的抑制作用（P〈0．01）,并呈明显的时效和量效关系,作用24h时IC50的As4S4作用浓度为30ms／L。As4S4可诱导Hela细胞凋亡,与对照组相比,差异有极显著意义（P〈0．01）,并呈浓度依赖性。As4S4可明显抑制Hela细胞COX-2的表达（P〈0．05）,随着As4S4浓度的增加,其COX-2蛋白表达水平逐渐降低。不同浓度As4S4作用24h,可明显抑制Hela细胞PGE2的分泌水平,与对照组比较差异有极显著意义（P〈0．01）。结论As4S4对Hela细胞增殖具有抑制作用,可促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制细胞COX-2表达和PGE2分泌水平有关。     

PDCD4在 Hela 细胞中过表达致抗凋亡蛋白 Bcl －2表达下调机制探讨

目的：探讨程序性细胞死亡因子4（PDCD4）的抑癌机制。方法：以含有全长 PDCD4的 cDNA 为模板,扩增 PDCD4全长基因,融合 PDCD4－GFP 融合基因真核表达载体,将其转染 Hela 细胞,采用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在细胞中的表达,以荧光定量 PCR 和 Western －blot 检测 PDCD4在细胞内的表达以及抗凋亡基因 Bcl －2的表达情况。结果：经酶切图谱分析、PCR 扩增及 DNA 测序证实融合基因真核表达载体构建正确;荧光显微镜可观察到细胞内 PDCD4－GFP 融合蛋白的表达;RT －PCR 证实经 PDCD4基因转染的细胞内 PDCD4 mRNA 表达增高。PDCD4的过表达能够导致 Bcl －2基因表达下调。结论：PDCD4基因表达于宫颈癌细胞核和胞浆内,并且 PDCD4能够抑制 Bcl －2基因的表达水平。     

地西他滨诱导宫颈癌细胞凋亡分子机制探讨

目的 地西他滨(decitabine, DAC)具有较好的抗肿瘤活性,其分子机制与DNA去甲基化有关,本研究通过DAC对腺瘤性结肠息肉病(adenomatous polyposiscoli,APC)基因的表达水平和去甲基化的影响,探讨DAC诱导宫颈腺癌Hela细胞凋亡分子机制.方法 不同浓度的DAC作用于宫颈腺癌Hela细胞24、36和48 h,MTT法检测对宫颈癌细胞的增殖抑制作用,观察DAC对Hela细胞增殖的浓度依赖效应和时间依赖效应.流式细胞术检测DAC对宫颈腺癌Hela细胞凋亡和细胞周期的影响.在DAC作用于宫颈腺癌Hela细胞前后,通过甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR, MSP)检测APC基因的甲基化状态;RT-PCR法检测APC基因mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测APC蛋白、β-catenin蛋白在胞内及核内表达的变化.结果 DAC对宫颈腺癌Hela细胞增殖抑制具有浓度依赖效应和时间依赖效应,Hela细胞半数抑制浓度(IC50) 24、36、48 h 分别为 28.23、7.65和5.64 μmol/L.DAC处理后的宫颈腺癌Hela细胞的凋亡率为(73.82±0.11)%,明显高于对照组的(12.41±0.24)%,P<0.001.DAC处理Hela细胞后,S期细胞比例(47.82±2.57)%和G2期细胞比例(30.87±2.28)%显著高于空白对照组的S期细胞比例(24.08±0.71)%和G2期细胞比例(2.52±0.84)%,P<0.001.DAC处理后,APC基因启动子区域去甲基化状态明显增高,APC mRNA表达量上升,处理前后比较差异有统计学意义,P<0.05.DAC处理后,胞内APC蛋白表达上调,而胞内和核内的β-catenin蛋白表达下调,差异均有统计学意义,P<0.05.结论 DAC可通过对APC基因的去甲基化作用,上调胞内APC蛋白表达,下调胞内和核内β-catenin表达,诱导宫颈癌细胞凋亡.     

钩吻B2组分对Hela细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨钩吻醇提-氯仿萃取(GW-B2)组分对Hela细胞生长与增殖以及细胞周期的影响。方法:采用XTT法分析细胞生长与增殖,Timelapse显微镜观察细胞生长和形态,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期,综合评价GW-B2组分抗Hela细胞的作用。结果:GW-B2具有明显抑制Hela细胞生长与增殖的作用,1μL/mL GW-B2组分处理的Hela细胞生长速度明显降低,在2~5μL/mL的剂量范围内,细胞生长与增殖能力基本完全被抑制。GW-B2组分处理后,Hela细胞主要的形态学变化为贴壁能力丧失,悬浮细胞增多,细胞分裂阻滞,部分细胞崩解破碎。GW-B2组分能明显的诱导Hela细胞凋亡,1μL/mL、2μL/mL和5μL/mL GW-B2组分处理72h后,Hela细胞的凋亡率分别可达8.16%、36.83和61.32%,而对细胞周期的影响主要是G2/M期阻滞,同时对G0/G1期也有一定的阻滞作用。结论:GW-B2组分具有抑制Hela细胞增殖、诱导凋亡,具有明显的抗肿瘤细胞的作用;GW-B2组分对细胞周期的影响主要是G2/M期阻滞,随后可诱导细胞的凋亡。     

人参皂苷Rh2增强紫杉醇诱导Hela细胞的凋亡

目的:探讨人参皂苷Rh2能否增强紫杉醇诱导Hela细胞的凋亡。方法:应用SRB法检测药物抑肿瘤效应;荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;应用金氏公式分析药物间的相互作用。结果:人参皂苷Rh2可浓度依赖性地抑制Hela细胞的增殖,并可协同性地增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用;人参皂苷Rh2可协同性地增强紫杉醇诱导的Hela细胞凋亡,并具有浓度依赖性。结论:人参皂苷Rh2可协同性地增强紫杉醇对Hela细胞增殖抑制作用和诱导凋亡作用。     

siRNA干扰对Hela细胞株VEGF表达的影响

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)siRNA干扰对宫颈癌Hela细胞株VEGF的影响。方法:设计合成VEGFsiRNA1、2、3号链,体外脂质体介导转染宫颈癌Hela细胞株,半定量RT-PCR及Western blot分析转染效果。结果:转染VEGF siRNA1、2号链后,宫颈癌Hela细胞株VEGFmRNA表达明显下降,但是VEGF蛋白水平下降不明显。结论:VEGF siRNA转染宫颈癌Hela细胞株可下调细胞中VEGFmRNA的表达,不同的siRNA下调mRNA效率不同。作为基因沉默的一个重要工具,siRNA干扰有望成为治疗宫颈癌一种新方法。     

纳米二氧化硅搭载4'-去甲基表鬼臼毒素对人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制作用研究

目的 研究鬼臼毒素、4''-去甲基表鬼臼毒素及其与不同比例纳米二氧化硅（SiO₂）的联合用药对人宫颈癌HeLa细胞的体外增殖抑制作用,并探讨其机制。方法 采用正硅酸乙酯水解法制备25 nm SiO₂样品,将其进行表面改性后搭载4''-去甲基表鬼臼毒素;MTT法检测SiO₂、鬼臼毒素、4''-去甲基表鬼臼毒素和联合用药（12.500、1.250、0.125 μg/mL纳米SiO₂分别搭载6.25 μg/mL 4''-去甲基表鬼臼毒素）对HeLa细胞体外增殖的抑制作用;Hoechst 33342染色法检测25 nm SiO₂的细胞相容性、鬼臼毒素和4''-去甲基表鬼臼毒素对细胞凋亡影响;倒置显微镜观察联合用药对细胞形态的影响;Western blotting技术检测4''-去甲基表鬼臼毒素和联合用药对HeLa细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果 4''-去甲基表鬼臼毒素对HeLa细胞的增殖抑制作用优于鬼臼毒素,联合用药对HeLa细胞的抑制作用优于单一4''-去甲基表鬼臼毒素,且0.125 μg/mL纳米SiO₂搭载6.25 μg/mL 4''-去甲基表鬼臼毒素时,抑制作用最明显;鬼臼毒素、4''-去甲基表鬼臼毒素和联合用药均可诱导细胞凋亡;4''-去甲基表鬼臼毒素和联合用药可以上调Bax/Bcl-2比值及Caspase-3、p53、p38的表达水平。结论 SiO₂联合用药对HeLa细胞的增殖抑制作用优于单一4''-去甲基表鬼臼毒素,其作用机制可能为,通过影响Bcl-2、Bax、Caspase-3、p53、p38等凋亡相关蛋白表达诱导细胞凋亡。     

8-Br-cAMP诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的实验研究

目的探讨以8-Br-cAMP体外诱导Hela细胞凋亡中,相关基因及蛋白质表达与凋亡之间的关系,为使用无毒性8-Br-cAMP治疗宫颈癌提供依据.方法采用TUNEL法检测凋亡细胞,采用原位杂交和完整细胞原位斑点印迹技术检测凋亡相关基因及蛋白质的表达.结果8-Br-cAMP试验组细胞凋亡率为(40.0±1.32)%,对照组(5.2±0.74)%;8-Br-cAMP可上调wp53,iNOS基因表达,下调mp53,bc1-2,c-myc基因表达,可增强iNOS和FasL的酶活性,降低Fas免疫反应性.以上各结果,试验组与对照组相比P＜0.01.结论8-Br-cAMP能诱导Hela细胞凋亡,可作为一种治疗宫颈癌的新途径.     

Effects of antisense oligonucleotides targeting VEGF on radio sensitivity of uterine cervix cancer Hela cells

Objective： To determine the impact of antisense oligonucleotides targeting vascular endothelial growth factor （VEGF） on radiosensitivity of uterine cervix cancer Hela cells. Methods： VEGF antisense oligodeoxynucleotides （ASODN） was transfected into Hela cells by liposome-mediated method. Cells transfected with the oligodeoxynuclecotide and saline were used as control groups. Cells were irradiated by 6 MV X ray at the dose of 0 Gy, 2 Gy, 4 Gy and 6 Gy respectively. The expression of VEGF mRNA was determined by RT-PCR. Apoptosis were evaluated using FCM. Cloning efficiency was determined by colony formation assay. Results： The expression of VEGF mRNAwas inhibited by ASODN （P 〈 0.01） in Hela cells. The inhibited activation which was influenced by radiation resulted in increasing apoptosis （P 〈 0.01） and inhibiting plating efficiency （P 〈 0.01）. Conclusion： The expression of VEGF induced by X irradiation in Hela cells can be blocked by VEGF ASODN. Treatment with VEGF might increase apoptosis in HeLa cells and enhance radiosensitivity.     

马甲子叶提取物的抗肿瘤活性研究

目的 研究马甲子叶提取物的体内外抗肿瘤活性.方法 采用系统溶剂萃取法萃取马甲子叶醇提物,采用MTT法分别检测马甲子叶水提物、醇提物、石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位对人肝癌HepG-2、人胃癌MGC-803、人宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤活性;考察马甲子叶乙酸乙酯部位对S180荷瘤小鼠的体内抗肿瘤活性.结果 马甲子乙酸乙酯部位对3种肿瘤细胞均有明显抑制作用,呈一定量效关系,IC50分别为23.68、24.91、75.32 μg·mL-;乙醇提取物和石油醚部位对3种肿瘤细胞均有一定抑制作用;正丁醇部位和水提物的抑制作用不明显.乙酸乙酯部位对S180荷瘤小鼠的体内抗肿瘤作用明显,中剂量的抑瘤效果与环磷酰胺的相当,抑瘤率达49.38％.结论 马甲子叶乙酸乙酯部位的抗肿瘤活性最强.