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411.
目的:探讨3种细胞因子单一、协同以及与化疗药物顺铂(DDP)的联合作用杀伤肝癌SMMC-7221细胞、宫颈癌Hela细胞株的影响。方法:应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT比色法)、检测与化疗药物DDP单独或联合应用组及药物作用的12h与24h的光密度值(OD),计算杀伤率,以台盼蓝拒染计算杀伤率对照。结果:单独应用3种细胞因子时,IFN—a、TNF—a对肝癌细胞、宫颈癌Hela细胞毒作用,IL-2对肝癌细胞、宫颈癌Hela细胞则细胞毒作用不明显。IFN—a、IL-2、TNF—a可以增强DDP的抑瘤作用,与DDP单独作用具有显著性差异(P〈0.01)。IFN-a、IL-2、TNF-a联合作用具有协同作用,均与单一应用具有显著性差异(P〈0.01)。细胞因子均可以增强顺铂(DDP)的抑瘤作用并与其作用的先后及时间具有依赖关系。结论:MTT比色法为临床肿瘤化疗的药物敏感性检测提供了简便、快速的方法。不同类型的肿瘤有着不同的药敏谱。干扰素-a(IFN—a)、肿瘤坏死因子(TNF—a)、白细胞介素-2(IL-2)与DDP联合具有协同作用,为肝癌、宫颈癌病人化疗提供了理想的参考方案。 相似文献
412.
目的分别构建携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫(Plasmodiumberghei)环子孢子(CSP)全长基因和去除中央重复序列的CSP的融合蛋白真核表达质粒,并检测其在Hela细胞中的表达。方法采用PCR技术,从伯氏疟原虫基因组中扩增全长CSP基因,将其定向克隆入pEGFP-N1,构建pEGFP/PbCSP全长基因重组质粒,酶切、PCR及序列分析鉴定;同样,采用PCR技术扩增PbCSP的N端和C端两个片段,先将C端片段定向克隆入pEGFP-N1,构建pEGFP/PbCSP-C重组质粒,再将PbCSPN端片段定向克隆入pEGFP/PbCSP-C,构建pEGFP/PbCSP'重组质粒,酶切、PCR及序列分析鉴定。将pEGFP/PbCSP和pEGFP/PbCSP′分别用脂质体介导转染体外培养的Hela细胞,荧光显微镜及RT-PCR检测融合蛋白的表达。结果PCR、酶切及测序证实目的基因PbCSP全长和片段分别正确连接至pEGFP-N1的多克隆位点,两种重组质粒转染Hela后,荧光显微镜及RT-PCR均检测到目的蛋白在Hela中表达。结论成功构建了携带绿色荧光蛋白报告基因的伯氏疟原虫CSP全长基因和该基因片段的融合蛋白真核表达质粒,并在Hela细胞中获得表达。 相似文献
413.
目的:探讨Klf4表达水平对Hela细胞上皮间质转化的影响。方法:设计合成针对Klf4的siRNA和阴性对照siRNA,并转染至Hela细胞。用含10ng/ml TGF-β1和10%胎牛血清的DMEM培养液诱导Hela细胞发生上皮间质转化,对照组使用不含TGF-β1的培养液。倒置显微镜下观察记录细胞的形态学改变。Western blot法和细胞免疫荧光法检测Klf4、上皮标志分子E-cadherin、ZO-1及间质标志分子N-cadherin的表达变化。结果:在TGFβ1的诱导作用下,Hela细胞呈现出梭形、类成纤维细胞的形态,发生了上皮间质转化。Western blot和细胞免疫荧光检测结果显示,Hela细胞在TGFβ1诱导作用下,Klf4、上皮标志分子E-cadherin、ZO-1表达减少,间质标志分子N-cadherin表达增多。转染了si Klf4的Hela细胞经TGFβ1诱导后,与转染了阴性对照siRNA的细胞相比,上皮标志分子E-cadherin、ZO-1表达略有减少,而间质标志分子N-cadherin的表达则明显增多。结论:抑制Klf4表达可以促进Hela细胞的上皮间质转化。 相似文献
414.
目的 寻找一种高效、简便的构建表达miRNA质粒的方法.方法 该研究用PCR 方法直接从小鼠gDNA扩增了包含miRNA375(miR375)前体序列在内的一个126 bp片段以构建质粒pAAv-miR375.该研究用pAAV-miR375转染Hela细胞48 h后,用定量RT-PCR方法和Northern bloc检测Heh细胞中miR375的表达.结果 转染了pAAV-miR375的Hela细胞中有miR375的表达,而在转染了空质粒pAAV-MCS和未转染的Hela细胞中没有检测到miR375的表达.结论 该研究所构建的pAAV-miR375质粒能够表达miR-NA375.作者介绍的这一种构建表达miRNA质粒的方法比以往的方法更快速、高效、简便和保证序列的正确性. 相似文献