TRPV4对HeLa细胞增殖的作用

目的 观察瞬时感受器电位离子通道香草素受体4（TRPV4）与宫颈癌HeLa细胞增殖的关系.方法 采用宫颈癌HeLa细胞系,用Western blot技术检测HeLa细胞中TRPV4的表达量;并分别用TRPV4阻滞剂RN1734干预体外培养HeLa细胞,通过细胞计数法、LDH检测及流式细胞技术观察TRPV4通道调控对HeLa增殖和细胞周期进展的影响.结果 与对照组W12细胞系相比,宫颈癌HeLa细胞系中TRPV4呈高表达.TRPV4阻滞剂干预48和72 h后,HeLa细胞增殖较未干预组降低（P＜0.05）;而TRPV4阻滞剂干预24h和48 h时,处于S期细胞的百分率明显低于未干预组;处于G0/G1期细胞的百分率则明显高于未干预组（P＜0.05）.结论 TRPV4抑制可以阻滞体外培养宫颈癌HeLa细胞增殖及细胞周期进展.     

新合成壳聚糖季铵盐/DNA复合物在Hela细胞中的转染效率☆

背景：壳聚糖季铵盐衍生物可以提高载体的转染效率,同时解决了壳聚糖溶解性差的问题,扩展了其pH值适用范围。 目的：合成一种新型壳聚糖季铵盐载体,研究其与质粒结合的条件及转染效率,并与壳聚糖进行对比。 设计、时间及单位：分子生物学,对比观察实验,于2008-08/10在浙江大学医学院附属第二医院完成。 材料：壳聚糖季铵盐——N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖为北京理工大学高分子材料实验室合成。质粒pEGFP-C1为浙江大学医学院郑一春惠赠。Hela细胞为浙江大学医学院程静提供。 方法：将N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖配制成质量浓度为0.2 g/L、pH值为5.5(或6.9、7.6)、乙酸钠终浓度为50 mmol/L的乙酸溶液,迅速与质粒pEGFP-C1混合,并在旋转混合器上涡流15~30 s,室温静置30 min以上,促进复合物的形成。 主要观察指标：通过凝胶阻滞实验研究了pH值及时间对壳聚糖季铵盐与质粒结合能力的影响。通过荧光倒置显微镜观察壳聚糖季铵盐作为载体转染Hela细胞的效率,并与壳聚糖进行对比。 结果：N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖能够在酸性、中性及碱性条件下溶解,并能够与质粒DNA很好的结合形成复合物,拓展了其使用范围。在酸性条件下,N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖与质粒的结合作用强于壳聚糖。壳聚糖及N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖在酸性条件下,30 min即可与质粒形成稳定的复合物,并在12 h内保持良好的稳定性。Hela细胞的体外转染结果表明,N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的转染效率大于壳聚糖。 结论：N-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖所适用的pH值范围较壳聚糖更加广泛,其稳定性与壳聚糖无明显差别,并且对Hela细胞的体外转染效率略高于壳聚糖,值得对其进行更深入的研究。 关键词：壳聚糖季铵盐;基因载体;Hela细胞;转染     

腺病毒3型诱导MxA蛋白产生及其抗病毒作用的研究

目的:观察腺病毒3型对MxA蛋白的诱导作用以及MxA蛋白的体外抗病毒作用。方法:采用流式细胞仪分析不同浓度的腺病毒3型（Ad3）诱导健康人外周血单个核细胞（PBMC）胞浆MxA蛋白的产生;采用微量细胞病变抑制法观察重组MxA蛋白对Hela细胞内腺病毒3型的抗病毒作用。结果:不同浓度的腺病毒诱异PBMC产生MxA蛋白的含量均显著高于对照组。10 ng/ml MxA蛋白质抗Hela细胞内腺病毒3型感染的效价为20TCID20。结论:腺病毒3型体外可诱导PBMC产生MxA蛋白;重组MxA蛋白具有抗腺病毒3型作用。     

双黄连抑制甲1型流感病毒诱导细胞凋亡的机制研究

目的:研究双黄连抑制甲1型流感病毒诱导细胞凋亡的机制。方法:将宫颈癌(Hela)细胞分成4组:病毒对照组、实验组、细胞对照组、药物对照组,采用流式细胞术计算细胞凋亡的百分率。结果:实验组细胞凋亡的百分率与病毒对照组比较有非常显著性差异(P<0.01)。结论:双黄连可抑制甲1型流感病毒诱导Hela细胞凋亡。     

丙肝病毒siRNA表达载体构建及抗病毒作用研究

目的进行丙型肝炎病毒（HCV）RNA干扰（RNA interference RNAi）作用研究。方法本实验选择HCV NS3基因片段作为靶序列,合成含有靶序列的DNA片段并克隆到pGCsi-U6/Neo/GFP/siNeGative载体中,构建可表达具有发夹结构双链siRNA的真核表达质粒pGCsi-U6/Neo/GFP/A,并转染Hela细胞,用HCV攻击该细胞,通过TCID50和HCV负链RT-PCR检测该载体对HCV感染细胞的保护效果。结果通过测序及荧光显微镜观察证明载体构建成功,实验组TCID50明显高于对照组,且RT-PCR结果显示pGCsi-U6/Neo/GFP/A转染组的HCV负链RNA表达量显著低于对照组。结论证实重组质粒表达产物能成功地使模型细胞中的HCV NS3基因沉默,并间接抑制了病毒的复制,本实验的成功无疑为HCV的治疗及蛋白功能的研究打下坚实的基础。     

四硫化四砷对人宫颈癌细胞Hela环氧合酶表达和PGE2产生的影响

目的研究中药雄黄主要成分四硫化四砷（As4S4）对子宫颈癌细胞Hela增殖和凋亡作用的影响及其作用机制。方法以不同浓度（7．5、15、30、60mg／L）的As4S4对Hela细胞分别处理不同的时间（12、24、36、48、60h）,用四甲基偶氮唑蓝（MTY）法测定细胞增殖反应;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测环氧合酶-2（COX-2）蛋白的表达;用放射免疫法检测细胞PGE2释放水平。结果As4S4对Hela细胞增殖有明显的抑制作用（P〈0．01）,并呈明显的时效和量效关系,作用24h时IC50的As4S4作用浓度为30ms／L。As4S4可诱导Hela细胞凋亡,与对照组相比,差异有极显著意义（P〈0．01）,并呈浓度依赖性。As4S4可明显抑制Hela细胞COX-2的表达（P〈0．05）,随着As4S4浓度的增加,其COX-2蛋白表达水平逐渐降低。不同浓度As4S4作用24h,可明显抑制Hela细胞PGE2的分泌水平,与对照组比较差异有极显著意义（P〈0．01）。结论As4S4对Hela细胞增殖具有抑制作用,可促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制细胞COX-2表达和PGE2分泌水平有关。     

端粒酶催化亚基hTERT调控Hela细胞周期的实验研究

目的探讨hTERT基因与细胞周期因子之间的关系,从细胞周期调控的角度研究反义hTERT影响肿瘤细胞生长的机制。方法脂质体介导将hTERT反义寡核苷酸（hTERT-ASODN）转染到Hela细胞中,运用RT—PCR方法分析hTERT-ASODN对细胞周期相关基因表达水平的改变,流式细胞仪技术检测细胞周期分布的变化。结果hTERT—ASODN可在mRNA水平封闭Hela细胞中hTERT基因的表达,并使细胞周期相关基因如CyclinE1,CyclinB1,CyclinD1的表达水平出现明显变化。流式细胞仪的检测结果显示,hTERT-ASODN转染组的细胞数在G0／G1期增多,而在S期及G2／M期减少,但无特征性的凋亡峰出现。结论hTERT基因参与调控肿瘤细胞中相关细胞周期因子的表达。     

人参皂苷Rh2增强紫杉醇诱导Hela细胞的凋亡

目的:探讨人参皂苷Rh2能否增强紫杉醇诱导Hela细胞的凋亡。方法:应用SRB法检测药物抑肿瘤效应;荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡;应用金氏公式分析药物间的相互作用。结果:人参皂苷Rh2可浓度依赖性地抑制Hela细胞的增殖,并可协同性地增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用;人参皂苷Rh2可协同性地增强紫杉醇诱导的Hela细胞凋亡,并具有浓度依赖性。结论:人参皂苷Rh2可协同性地增强紫杉醇对Hela细胞增殖抑制作用和诱导凋亡作用。     

扇贝提取物诱导Hela细胞凋亡的研究

目的探讨扇贝提取物对体外培养Hela细胞有无凋亡诱导作用。方法体外培养的Hela细胞经不同浓度的扇贝提取物处理24h,经Hoechst 33258(8g/L)染色进行形态学观察、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术(FCM)检测细胞。结果加扇贝提取物处理后,荧光显微镜下观察发现培养细胞中出现核固缩、凋亡小体,琼脂糖凝胶电泳可见DNA ladder条带,流式细胞仪检测有凋亡峰。结论扇贝提取物可诱导体外培养Hela细胞凋亡。     

Anti-Proliferative Effects of Methanol and Water Extracts of Pyrrosia piloselloides on the Hela Human Cervical Carcinoma Cell Line

Background: Cervical cancer is one of the most commonly diagnosed neoplasms and a leading cause of cancerdeath among females worldwide. Limitations with conventional medical treatments have driven researchers tosearch for alternative approaches using natural products. This study aimed to detemine potential anti-proliferativeeffects of methanol and water extracts of Pyrrosia piloselloides (P. piloselloides) on the HeLa cell line. Methods:3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assays were performed to determine IC50concentrations and apoptosis analysis was by flow cytometry. To identify chemical compounds in the extracts, gaschromatography-mass spectrometry (GC-MS) was employed. Results: P. piloselloides methanol extracts (PPME) showedantiproliferative effects on HeL awith an IC50 of 16.25μg/mL while the P. piloselloides water extract (PPWE) was withoutinfluence. Neither extract showed any significant effects on apoptosis. GC-MS analysis, revealed 5-hydroxymethylfurfural(23.1%), allopurinol (8.66%) and 3, 5-dihydroxy-6-methyl-2,3-dihydropyran-4-one (7.41%) as major components inthe PPME, while sulfolan-3-ol (10.1%), linoleic acid (9.06%) and β-sitosterol acetate (7.98%) predominated in thePPWE case. Conclusion: This first study of P. piloselloides showed PPME to exert potent anti-proliferative effect onHeLa cell lines. Further research now needs to be performed to establish the mechanisms of inhibition.