龙胆泻肝汤激活Bax/Caspase-3通路并诱导人角质形成细胞凋亡

目的：明确龙胆泻肝汤对人角质形成细胞株HaCaT细胞凋亡的影响。方法：Tunel法检测龙胆泻肝汤对HaCaT细胞凋亡的影响; DAPI染色后荧光显微镜观察HaCaT细胞凋亡形态变化; Western blot检测分析HaCaT细胞凋亡相关蛋白表达。结果：龙胆泻肝汤处理组HaCaT细胞形态发生了明显变化，凋亡比例明显高于未处理细胞组。龙胆泻肝汤作用于HaCaT细胞后活化的caspase-3和Bax的表达明显上调， Bcl-2蛋白表达下降。caspase-3特异性抑制剂Z-DEVD-FMK预处理后可降低龙胆泻肝汤诱导的细胞凋亡。结论：龙胆泻肝汤能明显诱导人角质形成细胞的凋亡，其机制可能与下调Bcl-2的表达，增高Bax和caspase-3的表达有关。     

紫外线照射对HaCaT细胞IL-12和IFN-γ受体表达的影响

目的：观察紫外线（UV）照射对HaCaT细胞起源的IL-12、IFN-γ的影响，为进一步阐述光敏性皮炎的发病机制提供依据。方法：以UVA和UVB照射人永生化表皮细胞（HaCaT打细胞），应用免疫组化SP法观察UV照射后HaCaT细胞表面IL-12、IFN-γ受体的表达情况，并以阳性细胞百分比半定量IL-12、IFN-γ在HaCaT细胞中的表达；同时应用ELISA方法检测细胞培养液中IL-12、IFN-γ的含量。结果：静息状态下，HaCaT细胞低水平表达IL-12R、IFN-γR，上清液中IL-12、IFN-γ呈低水平表达或检测不出；UV照射HaCaT细胞后12h，细胞表面IL-12R、IFN-γR及上清液中的IL-12、IFN-γ与照射前无明显差异。结论：紫外线照射后角质形成细胞产生细胞因子致T细胞亚群失衡与光敏性皮炎的相关性，有待进一步探讨。     

葡萄籽原花青素及UVA照射对HaCaT细胞增殖活性的影响

目的 观察葡萄籽原花青素（GSPE）和长波紫外线（UVA）对人角质形成细胞（HaCaT细胞）增殖的影响,以探讨GSPE有无光保护作用。方法 MTT法分别测定不同浓度GSPE以及不同剂量UVA对HaCaT细胞增殖活性的影响。结果 GSPE浓度为5-200μg/m L时,对HaCaT细胞增殖影响不明显,浓度为500μg/m L及以上时抑制细胞生长,且有统计学意义;UVA剂量超过10 J/cm2有抑制作用且随剂量增高抑制作用越明显,且有统计学意义,25 J/cm2时其抑制率达37.65%;浓度为50、100μg/mL的GSPE对25 J/cm2 UVA照射后的HaCaT细胞的增殖有明显促进作用。结论25 J/cm2的UVA对HaCaT细胞的增殖有明显抑制作用,而合适浓度的GSPE对HaCaT细胞增殖活性有光保护作用。     

挥发油含氧单萜成分的透皮吸收促进作用与皮肤细胞毒性比较研究

目的比较中药挥发油含氧单萜成分的透皮吸收促进作用与皮肤细胞毒性。方法以中药挥发油中常见的9种含氧单萜(1,8-桉叶素、4-萜品醇、樟脑、薄荷脑、α-松油醇、香芹酮、芳樟醇、香叶醇和柠檬醛)为研究对象,比较其对布洛芬的透皮吸收促进效果和对人角质形成细胞HaCaT的细胞毒性。结果 9种含氧单萜成分均能显著促进布洛芬的透皮吸收,且皮肤细胞毒性远低于经典的化学合成促渗剂氮酮,其中1,8-桉叶素的效果最好。环状含氧单萜(1,8-桉叶素、4-萜品醇、樟脑、薄荷脑、α-松油醇、香芹酮)的透皮吸收促进效果优于链状含氧单萜(芳樟醇、香叶醇、柠檬醛),皮肤细胞毒性没有显著差异。结论环状含氧单萜更适合作为透皮吸收促进剂进行开发。     

来氟米特对脂多糖诱导下 HaCaT细胞分泌 IL-8和 ICAM-1的影响

目的：观察来氟米特活性代谢产物A771726对脂多糖诱导下人永生化角质细胞（ HaCaT ）分泌白介素-8（IL-8）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的影响。方法用脂多糖诱导HaCaT细胞增殖,ELISA法检测细胞上清液中IL-8、ICAM-1的含量。结果1μg/ml的脂多糖可以诱导HaCaT细胞高分泌IL-8和ICAM-1,加入A771726（浓度范围为30～270μg/ml）后能够抑制其分泌,抑制作用随浓度的增大而增强。结论来氟米特可以抑制脂多糖诱导下HaCaT细胞分泌IL-8、ICAM-1。     

五味子提取工艺优化及乙醇提取物的皮肤细胞抗氧化作用研究

目的 探究五味子提取物对人皮肤细胞氧化损伤的保护作用,开发其在皮肤抗氧化方面的应用。方法 分别采用热水蒸煮和水蒸气蒸馏的方法进行脱色和除味;另外,采用叔丁基过氧化氢（tBHP）诱导的HaCaT细胞氧化应激模型评价五味子提取物对人皮肤细胞氧化损伤的保护作用,采用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡率,2,7-二氯荧光黄双乙酸盐法检测细胞内活性氧的水平。结果 采用优化后的提取工艺得到了气味变淡且颜色明显变浅的五味子提取物;用北五味子提取物预处理HaCaT细胞6 h后,可有效降低tBHP引起的细胞凋亡,提高细胞存活率,降低细胞内ROS水平。结论 优化后的乙醇提取工艺显著改善了五味子提取物的颜色和气味,并保持了提取物的抗氧化活性,因而有望成为一种应对皮肤氧化损伤的外用保护剂。     

银屑病患者真皮间充质干细胞对HaCaT细胞的作用

目的 研究分析不同浓度银屑病患者真皮间充质干细胞（Dennis mesenchymal stem cells,DMSCs）对人永生化角质形成细胞（HaCaT）的作用.方法 取银屑病患者和正常人的真皮,获得纯度高的DMSCs,将HaCaT在Transwell小室下室接种,同时按照第5代DMSCs与HaCaT细胞之间的比例（1：1、5：1、10：1）将DMSCs分3组接种在Transwell上室,并设正常对照组和自然增殖组,采用实时细胞分析系统（RTCA）对HaCaT细胞进行增殖检测,培养74 h后用细胞计数法检测HaCaT细胞的数量.结果 共培养组较自然增殖组HaCaT细胞计数减少,与健康对照组相比,银屑病患者组HaCaT细胞计数减少不明显,以银屑病患者DMSC与HaCaT细胞按照1：1共培养组为著.结论 ①DMSCs对HaCaT细胞增殖有抑制作用.②与正常对照组、自然增殖组和其他比例组相比银屑病患者DMSCs与HaCaT 1：1共培养组对HaCaT细胞增殖抑制作用减弱更显著.     

中药清热利湿饮对HaCaT细胞表达IL-6mRNA、IL-8mRNA、IL-10mRNA及分泌IL-8、IL-10的影响

目的:揭示中药清热利湿饮对人永生化角质形成细胞HaCaT细胞表达IL-6mRNA、IL-8mRNA、IL-10mRNA和分泌IL-8、IL-10的作用机制。方法:以HaCaT细胞为研究对象,分别采用RT-PCR技术及ELISA方法观察中药清热利湿饮提取液对经TNF-α诱导活化的HaCaT细胞表达IL-6mRNA、IL-8mRNA、IL-10mRNA和分泌IL-8、IL-10的影响。结果:清热利湿饮对经TNF-α诱导活化的HaCaT细胞IL-6mRNA和IL-8mRNA的表达有下调作用,在药物浓度为10g/L和12.5g/L时,HaCaT细胞IL-10mRNA的表达量增强较为明显,与TNF-α诱导活化组相比,有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。清热利湿饮对经TNF-α诱导活化的HaCaT细胞IL-8的分泌有不同程度的抑制作用,但对IL-10的影响不明显。结论:清热利湿饮可下调IL-6mRNA、IL-8mRNA的表达,上调IL-10mRNA的表达,且此作用随药物浓度的升高而增强;同时可降低细胞IL-8的分泌,但对IL-10的分泌无明显的作用。     

他克莫司联合罗格列酮对TNF-α诱导的HaCaT细胞LL37及NF—κB表达的影响

目的：确定他克莫司与罗格列酮单独及联合应用对肿瘤坏死因子-α（TNF—α）诱导的HaCaT细胞LL37及核因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法：利用TNF—α诱导体外培养的HaCaT细胞处于炎性状态,在不同浓度的他克莫司与罗格列酮单独及联合作用下,采用RT—PCR法检测LL37的表达情况,采用免疫细胞化学（SABC）法检测NF—κB的表达情况。结果：（1）TNF-α诱导的HaCaT细胞中LL37及NF—κB的表达显著高于对照组（P〈0．05）。（2）他克莫司、罗格列酮单独及联合应用均可显著抑制TNF-α诱导的HaCaT细胞LL37及NF—κB的表达（P〈0．05）;二者联合应用的作用效果均较单独用药组更强（P〈0．05）。结论：他克莫司和罗格列酮联合应用能增强其对TNF-α诱导的LL37及NF—κB表达的抑制作用。