哈巴苷及哈巴俄苷对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护作用

目的探讨哈巴苷及哈巴俄苷对过氧化氢（H2O2）损伤人血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVECS）,将生长良好的3代～5代细胞用于实验。实验分四组：对照组、H2O2组、哈巴苷干预组及哈巴俄苷干预组,光镜观察细胞形态,用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）检测细胞活力;取细胞上清液,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）含量。结果哈巴苷及哈巴俄苷干预均使H2O2损伤的HUVECS形态趋于正常,活力增强,细胞膜损伤减轻,减少细胞LDH及MDA产生。结论哈巴苷及哈巴俄苷能对抗H2O2引起的损伤,保护血管内皮细胞。     

不同浓度血管紧张素Ⅱ对人脐静脉血管内皮细胞衰老变化的影响

目的:观察不同浓度血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)衰老及细胞存活率的变化情况。方法:体外培养HUVEC,随机分为对照组和含不同浓度AngⅡ组(10-8～10-5mmol/L)共5组,用含不同浓度AngⅡ的培养基孵育细胞48h,β-半乳糖苷酶染色法鉴定内皮细胞衰老状态;流式细胞技术分析细胞周期变化;分别用MTT法和CCK-8法检测细胞存活率变化情况。结果:AngⅡ培养细胞48h后,β-gal阳性染色率随着AngⅡ浓度的增加逐渐增多(P均<0.01);细胞周期多停滞于G0/G1期,S期细胞逐渐减少;细胞存活率明显下降;与对照组相比,10-8和10-7 mmol/L AngII组无明显差异(P>0.05),10-6和10-5 mmol/LAngⅡ组有统计学差异(P<0.05)。结论:AngII诱导HUVEC衰老并呈剂量依赖性的抑制细胞增殖,提示细胞衰老程度随AngII浓度增加而加重。     

Pro-urokinase up-regulates the expression of urokinase-type plasminogen activator (u-PA) in human pulmonary arterial endothelial cells

The fibrinolytic function of endothelial cells plays an important role in the pathophysiology of pulmonary vascular diseases. In this study, the effects of pro-urokinase, a new thrombolytic drug that is currently being tested for the treatment of pulmonary embolism, on the expression of urokinase-type plasminogen activator (u-PA) and u-PA receptor (u-PAR) were assessed. The role of u-PAR was also investigated. Immunocytofluorescence and RT-PCR techniques were employed. In normal human pulmonary arterial endothelial cells (HPAECs), the expression levels of u-PA and u-PAR were very low. Incubation with pro-urokinase up-regulated u-PA expression at both the mRNA level and the protein level; however, the expression of u-PAR was not affected. The effect of pro-urokinase induction was totally inhibited by the release of u-PAR from the HPAECs' surface with PLC. This result suggests that the combination of u-PA with u-PAR may be a critical pathway for the induction of u-PA expression.     

白黎芦醇对fMLP诱导中性白细胞与人脐静脉内皮细胞粘附的抑制作用及机制

目的研究白藜芦醇(resveratrol,Res)对趋化肽N-甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰苯丙氨酸(fMLP)诱导中性白细胞与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的粘附及HUVECs释放可溶性粘附分子的影响。方法观察不同浓度Res对fMLP(10μmol.L-1)刺激HU-VECs与中性白细胞粘附的影响。以ELISA法测定可溶性细胞间粘附分子,血管细胞粘附分子和E-选择素。以Fura-3和海萤萤光素诱导剂为荧光指示剂分别测定中性白细胞内[Ca2+]i水平和O2.浓度。结果Res(1~50μmol.L-1)明显抑制fMLP诱导的中性白细胞与HUVECs的粘附反应,同时,明显抑制fMLP诱导粘附分子的释放效应。Res抑制中性白细胞中O2.生成和[Ca2+]i升高,其中Res5μmol.L-1和50μmol.L-1与fMLP诱导组相比具有统计学意义(P<0.01)。结论白藜芦醇通过影响中性白细胞内O2.生成和[Ca2+]i水平,抑制中性白细胞与内皮细胞的粘附以及细胞间粘附分子表达,在阻断炎性反应的发生与发展过程中发挥着重要作用。     

小檗碱对HeLa细胞诱导的血管内皮细胞增殖作用的影响

目的:探讨小檗碱对HeLa细胞诱导血管内皮细胞增殖作用的影响及其作用机制.方法:用MTT法检测小檗碱对HUVECs增殖及HeLa细胞条件培养液诱导HUVECs增殖的影响;用ELISA检测HeLa细胞上清液中VEGF的含量.结果:在0～48h范围内小檗碱对HUVECs的增殖有明显抑制作用,并有浓度时间依赖关系;经浓度为5μg/ml～40μg/ml小檗碱作用后的HeLa细胞条件培养液对HUVECs增殖的抑制率为24.4%～44.2%,而HeLa细胞条件培养液对HUVECs增殖有明显促进作用;小檗碱抑制HeLa细胞VEGF的表达.结论:小檗碱可能通过抑制HeLa细胞VEGF的表达从而抑制肿瘤血管生成.     

丹参茎叶提取物及其主要成分对人脐静脉内皮细胞的保护作用及机制研究

目的探讨丹参茎叶提取物及其主要成分对氧化应激和高糖损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用及机制。方法建立HUVECs氧化应激与高糖损伤模型,分别给予不同剂量的丹参茎叶醇提物(CJ)、丹参茎叶水提物(SJ)、丹参根醇提物(CG)、丹参根水提物(SG)及迷迭香酸、丹酚酸B、芦丁、异槲皮苷、隐丹参酮等,MTT法检测细胞活力,检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、一氧化氮(NO)、内皮素(ET-1)、细胞黏附因子(ICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。结果与对照组比较,HUVECs经H2O2处理后,GSH-Px、CAT和NO含量降低(P0.01),ET-1含量升高(P0.01);HUVECs经高糖处理后,ICAM-1和TNF-α含量升高(P0.01),NO含量降低(P0.01)。与模型组比较,CJ、CG、SJ、SG组GSH-Px、CAT和NO含量升高,ET-1、ICAM-1、TNF-α含量降低(P0.05、0.01)。迷迭香酸、丹酚酸B、芦丁等的高、中剂量组,异槲皮苷、隐丹参酮高剂量组均能显著提高GSH-Px、CAT和NO含量(P0.05、0.01),降低ET-1含量(P0.05、0.01),丹酚酸B、异槲皮苷和芦丁的高剂量组及迷迭香酸的高、中剂量组均可显著降低ICAM-1含量(P0.01),除氨基胍给药组外,其他给药组TNF-α含量相比模型组明显降低(P0.05、0.01)。除氨基胍和异槲皮苷低剂量组,其他给药组NO含量均明显升高(P0.05、0.01)。结论一定质量浓度范围内的丹参茎叶与丹参根醇提物及水提物、迷迭香酸、丹酚酸B、芦丁、异槲皮苷对H2O2和高糖引起的HUVECs细胞损伤具有明显保护作用,其作用机制与抑制细胞间黏附分子的表达,调节NO和TNF-α生成密切相关。本研究将为丹参药材生产过程产生的非药用部位茎叶的资源价值发现及转化利用提供参考。     

重组人血管内皮抑制素抑制内皮细胞血管生成的实验研究

目的:观察国产重组人血管内皮抑制素(Endostar,恩度)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的抗血管生成作用,并对其机制进行初步探讨.方法:采用MTS/PMS系统测定不同浓度恩度对HUVECs和人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用;流式细胞术检测恩度在相同时间内诱导HUVECs和HepG2细胞早期凋亡和晚期凋亡情况;通过迁移/侵袭实验、体外管腔形成实验和鸡胚尿囊膜(CAM)实验观察恩度对HUVECs迁移/侵袭和体内外管腔形成及功能的影响.结果:不同浓度的恩度持续作用72h,对HUVECs具有抑制增殖,且在50～200ng/ml的剂量范围内呈现浓度依赖关系;而对HepG2细胞未见明显作用.药物处理方式的不同,恩度对HUVECs诱导凋亡和迁移/侵袭作用差异显著;对HepG2细胞的迁移/侵袭未见明显影响.高剂量的恩度对HUVECs体外管腔形成和鸡胚尿囊膜的血管发生及成熟具有显著影响.结论:重组人血管内皮抑制素(恩度)能够有效地抑制血管内皮细胞形成复杂的管腔,并显著影响血管的成熟;对人肝癌细胞系HepG2生长及迁移/侵袭未见明显影响.     

人参-三七-川芎提取物对内皮微粒介导HUVECs衰老的干预作用

目的:观察人参-三七-川芎提取物对延缓内皮微粒(EMPs)诱导的血管内皮细胞衰老的影响,并探索其作用机制.方法:以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,复制性衰老10～12代细胞作为衰老模型,实验分为年轻组(2～4代细胞)、衰老组(10～ 12代细胞)、单纯EMPs干预组(提取衰老细胞产生的EMPs来干预年轻细胞...