肿瘤异质性及其在妇科恶性肿瘤诊疗中的思考

人体恶性肿瘤是由不同病理表现及生物学行为的细胞亚群构成。临床上即使同一病理类型的卵巢肿瘤,由于肿瘤细胞异质性,对化疗药物反应性和临床预后明显存在差异。研究显示即使遗传背景完全相同的卵巢癌细胞系,也存在不同转移潜能的异质性克隆。因此,正确理解肿瘤异质性,有助于恶性肿瘤的诊断及治疗的选择。本文通过对肿瘤异质性进行讨论,旨在对卵巢肿瘤的诊治模式进行思考。     

绒癌耐药细胞系的建立及获得性耐药机制的研究

目的 :采用目前治疗绒癌最常用的药物诱导建立绒癌的耐药细胞系 ,比较不同药物引起耐药机制的差异。方法 :采用浓度梯度递增法和间歇诱导法 ,分别用 5 FU ,MTX ,VP 16诱导绒癌细胞系JEG 3,建立相应耐药细胞系 ,采用MTT法测定耐药细胞系对5 FU、MTX、KSM、VP 16和Taxol的耐药指数 ,用RT PCR测定亲本细胞及各耐药细胞系耐药相关基因如肺耐药蛋白 (LRP)、多药耐药相关蛋白 (MRP)、谷胱甘肽转移酶 (GST π)、二氢叶酸还原酶 (DHFR)和多药耐药基因 (MDR 1)的mRNA表达 ,比较各种细胞生长曲线 ,细胞群体倍增时间。结果 :JEG 3细胞系在诱导耐药细胞前即有LRP、MRP、GST π、DHFR的共表达 ,诱导耐药后上述各基因的表达无明显变化。诱导耐药前JEG 3细胞无MDR1的表达 ,用VP 16、5 FU间歇诱导的方法诱导形成的耐药细胞系有MDR 1表达 ,且耐药指数增加。结论 :JEG 3耐药细胞系耐药性的产生与MRP、LRP、GST π、DHFR表达的关系不密切 ,而与MDR1的表达有关。     

胆固醇合成抑制剂洛伐他汀对NB4细胞体外作用的研究

目的 研究胆固醇合成抑制剂洛代他汀（Lovastain,LOV)对NB4白血病细胞增殖、凋亡、分化的影响。方法 以NB4白血病细胞为模型,用MTT比色法、锥虫蓝拒染法首先观察LOV对细胞增殖及活力的影响。通过细胞形态学观察、NBT还原试验、DNA凝胶电泳、流式细胞术细胞周期分析、TUNEL、RT-PCR半定量测定bcl-2 mRNA水平,系统观察LOV对NB4体外诱导分化和凋亡的情况。最后利用RT-PCR半定量测定H、K、N-ras基因表达水平,结合流式细胞术进行胞膜P21^Ras蛋白测定,探讨LOV作用机制。结果 （1）LOV抑制NB4细胞增殖,IC50为12.59μmol/L。（2）LOV诱导NB4细胞凋亡,影响细胞周期进程,细胞阻滞于G1/S期。LOV在诱导细胞凋亡过程中随作用时间延长,bcl-2表达水平逐渐下降。（3）LOV不影响NB4细胞分化。（4）LOV作用于NB4细胞,H、K、N-ras基因转录水平无变化,但膜表面P21^Ras蛋白水平随时间进行性下降。结论 LOV抑制NB4细胞增殖并诱导凋亡,使细胞周期进程阻滞于G1/S期。bcl-2参与了LOV诱导NB4细胞凋亡的基因调控。LOV对NB4细胞分化无影响。p21^Ras蛋白异戊二烯化受抑而阻滞p21^Ras蛋白定位细胞膜上可能是LOV影响NB4细胞的主要机制。     

一株新的急性髓系白血病细胞系SH-2的建立及其鉴定

Objective To establish and characterize a novel human myeloid leukemia cell line SH-2. Methods Bone marrow mononuclear cells(BMMNC) isolated from a AML-M2 patient, who failed to ob-tain complete remission after chemotherapy and allogenic bone marrow transplantation were passed in a long term IMDM culture medium supplemented with 20% fetal calf serum. Stromal cells were retained and rh-IL-3was added in the culture system. A new human myeloid leukemia cell line SH-2 was successfully established with a cytogeuetic characteristics of a loss of Y chromosome(- Y), a derivative chromosome 16 resulting from unbalanced translocation between chromosome 16 and 17, monosome 17, trisomy 19 and p53 alteration. Vari-ous methods were employed to characterize SH-2 cell line. Results SH-2 cells has been maintained without cytokine and stromal cells for more than 3 years without EB virus and mycoplasma contamination. SH-2 cells had the basically same morphological, immunophenotypic and cytogenetic features as the patient' s leukemia cells did, such as myeloid morphology, an immunophenotype of CD13+ , CD33+ , CD56+ , CD16/56+ and a hypodiploid karyotype of 45, X, - Y, der(16) t(16;17) (q24;q12) , - 17, + 19, which were gradually de-creased and replaced by the near-tetraploid cells with a karyotype of 73 - 102 (80), XX, - Y, - Y, del (lq31) ×2, der(16)t(16;17) (q24;q12) ×2, - 17, - 17, + 19, + 19. FISH and multiple FISH delineated all the abnormalities and revealed a loss of one p53 allele due to monosomy 17. DNA direct sequencing detec-ted a point mutation of CAG to CAT at codon 576 of exon 5 in another p53 allele. RT-PCR showed that SH-2 cells expressed apoptosis-related genes (bcl-2, Fas, GST- π and p21) rather than MDR-related genes. Short tandem repeat PCR provided powerful evidence for the derivation of SH-2 cell line from the patient' s leukemia cells. SH-2 cells had certain colony formation and tumorigenic capacities in nude and SCID mice. Conclu-sion SH-2 is a new myeloid leukemia cell line with a unique biology background, and will provide a useful tool for leukemia research.     

β—缆香烯对不同分化程度胃癌细胞株端粒酶活性及细胞凋亡的影响

目的：探讨β－缆香烯治疗胃癌的作用机制。方法：应用四唑蓝（MTT）比色法、端粒重复扩增（TRAP）－微孔板杂交法、光镜检查和DNA末端原位标记染色法（TUNEL）研究β－缆香烯对胃癌细胞株SGC－7901（中分化）、MKN－45（低分化）和MKN－28（高分化）的细胞毒作用及其对端粒酶活性、细胞形态变化和细胞凋亡的影响。结果：β－缆香烯对不同分化程度的胃癌细胞均具有较强的细胞毒作用;其抗癌作用与抑制端粒酶活性和诱导凋亡有关。β－缆香烯抑制端粒酶活性及诱导凋亡的数量与作用时间、浓度及细胞分化程度相关。结论：β－缆香烯对胃癌细胞具有很强的细胞毒作用,这一作用与抑制端粒酶活性和诱导凋亡有关。     

转铁蛋白增强脂质体介导基因对肝癌细胞的转染和表达

目的：检测转铁蛋白能否增强脂质体介导外源基因对肝癌细胞的转染和表达。方法：应用本实验室构建的含小鼠白细胞介素（mIL)-12的真核表达质粒pcDNA3/mIL-12和绿色荧光蛋白（GFP）真核表达质粒pcDNA3/EGFP,观察转铁蛋白增强阳离子脂质体LipofectAMINE介导上述两种质粒DNA对小鼠和不同人肝癌细胞株的转染及表达效率。结果：LipofectAMINE加转铁蛋白介导pcDNA3/EGFP对小鼠肝癌细胞株Hep1-6的转染效率由2％－5％提高至20％,对4种不同人肝癌细胞株的转染效率由15％提高到65％－75％;但对小鼠肝癌细胞株MM45T.Li的转染效率并不增加。转铁蛋白可使LipofectAMINE介导pcDNA3/mIL-12在Hep1-6中的表达量增强18倍。结论：转铁蛋白能够与LipofectAMINE和质粒DNA形成复合物,显著增强脂质体介导外源基因对肝癌细胞的转染和表达,但对不同种肝癌细胞株的增强效率不同。     

利用动物耳皮肤组织培养成纤维细胞的研究

对采集的动物耳部皮肤样品采用将组织块剪碎后直接贴附于细胞培养瓶底部培养的方法与酶消化法对动物体细胞进行原代培养 ,前者使得对不同品种绵羊、山羊、牛、北山羊的原代体细胞出现率及可传代率均达到 1 0 0 %。两种培养方法在成纤维细胞出现及可进行传代时间上有所差别。对于在体细胞传代培养中出现的上皮样细胞与成纤维样细胞混合生长的问题根据两者贴壁紧实程度的不同 ,用 0 .0 5%的胰酶—EDTA对其进行不同时间的消化 ,将两种不同类型的细胞进行分离和纯化。纯化的体细胞经数次传代培养后进行冷冻—解冻后仍具有正常的传代能力。对不同代次绵羊和牛的体细胞进行的核型分析表明 ,在体外培养至 2 0～ 30代 (绵羊胎儿细胞培养至 45代 )成纤维细胞的染色体倍性及数目未发现异常     

IL—2基因转染逆转绒癌耐药细胞系多药耐药性

用RT－PCR的方法克隆人的IL－2基因,将IL－2基因插入真核表达载体pcDNA3.1( )中,通过阳离子脂质体将IL－2基因转染用足叶乙甙（VP－16）诱导建立的绒癌耐药细胞系JEG－3／VP16,用G418筛选含IL－2 DNA片段的单个细胞克隆,检测转染前后细胞对5－氟尿嘧啶（5－Fu),氨甲喋呤（MTX）,VP－16,更生霉素（KSM）,紫杉醇（TAXOL）耐药指数的变化,用RT－PCR的方法测定转染前后细胞IL－2和多种耐药基因包括肺耐药蛋白（LRP）,多药耐药相关蛋白（MRP）,谷胱甘肽转移酶（GST－π）,二氢叶酸还原酶（DHFR）和多药耐药基因（MDR－1）的mRNA表达情况。结果表明 转染IL－2的细胞中用RT－PCR的方法检测到IL－2 mRNA表达,转染IL－2基因的细胞耐药指数降低,MDR－1 mRNA表达转阴,而其它耐药基因的表达无明显改变。     

免疫荧光和激光共聚焦显微镜对人横纹肌肉瘤细胞系的观察

细胞质内骨架包括微丝、微管及中间丝。现今可采用多种技术如各种电镜技术、免疫荧光技术、流式细胞术来研究细胞骨架在细胞生命活动中的作用。近年来发展起来的激光扫描共聚焦显微镜 (ｌａｓｅｒｓｃａｎｎｉｎｇｃｏｎｆｏｃａｌｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ,ＬＳＣＭ)可以显示细胞骨架的结构及分布 ,并能进行定量分析。我们采用直接与间接免疫荧光法 ,运用ＬＳＣＭ观察细胞骨架 ,比较人体的横纹肌肉瘤细胞系与培养的正常人横纹肌母细胞的差别。一、材料与方法1.细胞来源 :ＲＤ和Ａ673是人胚胎性横纹肌肉瘤细胞系 ,引自上海细胞库 ,其中ＲＤ软琼…     

白细胞介素-13对巨核细胞系-HEL细胞原癌基因c-mpl表达的影响

目的：研究重组人白细胞介素-13（rhIL-13）刺激巨核细胞系-HEL细胞的增殖是否与原癌基因c-mpl表达有关。方法：用MTT比色法和RT-PCR法分别观察了rhIL-13对HEL细胞增殖的影响和对c-mpl mRNA表达的影响。结果：rhIL-13促进了HEL细胞的增殖,上调了HEL细胞c-mpl mRNA的表达。结论：rhIL-13促进巨核细胞系-HEL细胞增殖,其部分机制可能是通过上调c-mpl的表达来实现。