甜菜红苷对人结肠癌HT29细胞凋亡的影响

目的:研究甜菜红苷对人结肠癌HT29细胞凋亡的影响。方法:体外传代培养HT29细胞。以不同质量浓度[0(空白对照)、0.5、1、1.5、2、3 mg/ml]的甜菜红苷培养细胞24 h,以1.5 mg/ml甜菜红苷培养细胞不同时间[0(空白对照)、1、3、6、12、24 h]后,采用MTT法测定细胞活力并计算抑制率;以0(空白对照)、1、1.5、2 mg/ml甜菜红苷培养细胞24 h后,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,测定含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Caspase-9的活性,采用实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blot法测定Bcl-2、Bax m RNA与蛋白的表达。结果:与空白对照比较,0.5、1、1.5、2、3 mg/ml甜菜红苷培养细胞24 h后,1.5 mg/ml甜菜红苷培养细胞1、3、6、12、24 h后,细胞抑制率升高(P<0.01)。与空白对照比较,1、1.5、2 mg/ml甜菜红苷培养细胞24 h后,细胞凋亡率升高,Caspase-3、Caspase-9活性增强,Bcl-2 m RNA与蛋白表达减弱、Bax m RNA与蛋白表达增强(P<0.01)。结论:甜菜红苷可诱导HT29细胞凋亡,其机制可能与上调Caspase-3、Caspase-9活性和Bax m RNA与蛋白表达,下调Bcl-2 m RNA与蛋白表达有关。     

三氧化二砷通过JNK信号通路诱导K562细胞凋亡

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡中的作用及机制。方法:体外培养K562细胞,用As2O3及特异性JNK抑制剂SP600125对K562细胞进行处理;倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化;MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率;AnnexinV/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率;ELISA检测p-JNK蛋白表达的变化;流式细胞术检测突变型P53表达。结果:ELISA显示4μmol/LAs2O3作用48h后p-JNK蛋白表达增强,经SP600125预处理后,As2O3诱导的K562细胞p-JNK蛋白表达明显减弱(P<0.01),As2O3诱导的细胞增殖抑制率和细胞凋亡率均下降,与As2O3单作用组相比突变型P53表达增加(P<0.05)。结论:JNK信号转导通路在As2O3诱导K562细胞凋亡过程中发挥重要作用,是As2O3诱导K562细胞凋亡的主要途径之一。     

p-JNK在结肠癌组织中的表达及抑制JNK通路后HT-29细胞增殖和凋亡变化

目的研究p-JNK在结肠癌组织中的表达以及抑制JNK信号通路后人结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的变化。方法使用免疫组织化学方法检测50例结肠癌组织标本和50例正常结肠组织标本中p-JNK的表达情况并和临床资料进行比较分析;在人结肠癌细胞株HT-29中使用SP600125抑制JNK信号通路后,MTT法检测细胞增殖,TUNEL法检测凋亡。结果 p-JNK在结肠癌组织中的表达水平明显高于正常对照组织(P<0.05);并和淋巴结转移、肿瘤分化程度、肿瘤的侵犯深度相关(P<0.05);而与肿瘤部位无关。抑制JNK信号通路后,HT-29细胞中的p-JNK表达降低(P<0.05);增殖减少,凋亡增加(P<0.05)。结论在结肠癌组织中存在p-JNK的高表达,抑制JNK信号通路能降低人结肠癌细胞株HT-29细胞的增殖,并促进凋亡;JNK信号通路和结肠癌的发生发展有关。     

植物培养细胞次级代谢产物高产细胞系的筛选

对植物培养细胞中高产次级代谢产物细胞系筛选的方法与研究作了概述;包括高产变异系和突变体的产生和筛选等。同时对高产细胞系的稳定性及保存方法和当前研究的进展进行了讨论。     

内质网蛋白29在人上皮性卵巢癌顺铂化疗耐药中的作用

目的 通过相关分子生物学手段了解重要的内质网蛋白之一—— 内质网蛋白29(endoplasmic reticulum pro-tein 29,ERp29)对人上皮性卵巢癌细胞顺铂化疗敏感性的影响.方法 通过免疫组织化学法检测人卵巢癌组织中ERp29的表达情况.利用分子生物学手段下调ERp29的表达,RT-PCR及Wes...     

基于网络药理学探讨扶正强筋片治疗重症肌无力的作用机制

目的：基于网络药理学探讨扶正强筋片治疗重症肌无力（MG）的潜在作用机制。方法：在中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）中筛选出扶正强筋片的活性成分,利用TCMSP的靶点预测模型来寻找中药活性成分的潜在生物学靶点。利用GeneCards数据库、DisGeNet数据库和TTD数据库获得重症肌无力的疾病相关靶点基因。利用韦恩图获得药物靶点和疾病靶点的交集基因。利用Cytoscape的Bisogenet模块对药物和疾病的共有基因进行蛋白质相互作用网络构建,获得扶正强筋片治疗重症肌无力的关键基因模块和相关靶点。使用Metascape数据库和DAVID数据库对药物和疾病交集基因进行GO和KEGG富集分析。使用实时定量基因扩增荧光检测系统（qPCR）检测扶正强筋片对成肌细胞靶点基因的影响。结果：通过生物信息学结合网络药理学分析,获得扶正强筋片中96个主要活性成分、263个药物靶点;疾病相关数据库筛选获得990个重症肌无力相关靶点,KEGG分析获得99条相关信号通路。扶正强筋片治疗重症肌无力的主要成分为槲皮素、山奈酚、木犀草素、豆甾醇等,关键的潜在靶点为TP53、EGFR、ESR1、Cullin...     

微小RNA-29a通过沉默信息调节因子2相关酶类1基因调控肝细胞脂肪变性的机制

目的 探讨人肝细胞株L02脂肪变性时微小RNA-29a(miR-29a)的表达变化及其靶向沉默信息调节因子2相关酶类1(silent mating type information regulation 2 homolog-1,Sirt1)调节脂肪肝细胞脂肪沉积的机制.方法 采用油酸和棕榈酸混合物诱导建立非酒精性脂肪肝...     

狂犬病病毒糖蛋白29修饰的纳米复合物体内穿透血脑屏障的研究

目的 制备半导体聚合物量子点(Pdots)、狂犬病病毒糖蛋白29(RVG29)修饰的Pdots-RVG纳米复合物,体外表征后检测该纳米复合物能否被神经细胞摄取,体内探究其能否穿透小鼠血脑屏障(BBB)。方法 纳米共沉淀法制备Pdots,并通过静电吸附连接RVG29制备Pdots-RVG纳米复合物;动态光散射技术检测纳米复合物的平均粒径及Zeta电位;细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)检测Pdots及Pdots-RVG的细胞毒性;纳米颗粒与小鼠中脑多巴胺能神经元细胞系MN9D细胞共孵育,激光扫描共聚焦显微镜下观察纳米颗粒的细胞摄取。分别将磷酸缓冲盐溶液(PBS)、Pdots、Pdots-RVG经腹腔注射进小鼠体内,40 h后制备组织单细胞悬液,并通过流式细胞术分析各组织中Pdots阳性细胞数量及生物富集。结果 Pdots平均粒径为105.10 nm, Zeta电位为-33.83 mV,Pdots-RVG纳米复合物平均粒径为339.13 nm, Zeta电位为-18.20 mV;当Pdots浓度为0～50 mg/L时,Pdots与Pdots-RVG均表现出较好的生物相容性;激光共聚焦扫...     

Construction of p100 Knock Down Stable HepG2 Cell Line with a p100 shRNA Expression Lentiviral System

目的:用表达shRNA的干扰慢病毒载体系统构建p100基因稳定沉默的HepG2人肝癌细胞系.方法:通过RNAi序列设计软件进行p100干扰片段设计,筛选出p100基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的Oligo DNA并构建p LKO.3G-p1001慢病毒载体,用双酶切及测序进行鉴定.将构建好的p100 shRNA表达质粒与慢病毒包装质粒共转染至包装细胞293T,包装产生病毒颗粒.运用病毒颗粒感染HepG2细胞,获得p100稳定沉默的细胞系.荧光显微镜下观察感染效率,利用Western blot方法检测稳定细胞株中p100的沉默效果.结果:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒载体,并获得了稳定沉默p100及对照的HepG2细胞株.慢病毒感染HepG2细胞后,荧光显微镜下观察到90％以上细胞发出绿色荧光,Western blot证实干扰p100后,HepG2细胞株中p100蛋白表达水平明显降低.结论:成功构建了具有p100干扰效果的慢病毒干扰载体及p100稳定沉默的HepG2细胞系.     

他莫昔芬对BGC-823细胞Caveolin-1表达的影响

目的:观察Caveolin-1蛋白在胃癌细胞系BGC823中的表达情况,并探讨胃癌细胞BGC823经他莫昔芬(TAM)处理后,Caveolin-1蛋白表达的变化。方法:使用5×10-6M和1×10-5M TAM处理胃癌细胞系BGC823 24h后,通过免疫荧光细胞化学的方法及细胞计数,检测细胞的凋亡情况以及Caveolin-1蛋白的表达变化。结果:Caveolin-1在胃癌BGC-823中高表达,经不同浓度的TAM处理24h后Caveolin-1的表达均下降(P<0.05),同时均出现明显凋亡(P<0.05)。Caveolin-1的表达下降与细胞凋亡数呈正相关关系(P<0.05)。结论:Caveolin-1在胃癌细胞BGC823中发挥生物学作用且与TAM介导的BGC823细胞的凋亡相关。