环孢素A体外诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察环孢素Ａ是否有诱导白血病细胞凋亡的作用。方法：应用细胞形态学检查、二苯胺法ＤＮＡ片段化定量，ＤＮＡ凝胶电泳及流式细胞术等方法观察细胞凋亡。结果：ＣｓＡ５０ｍｇ／Ｌ作用ＨＬ－６０细胞４ｈ，ＤＮＡ片段率显著增高，达（２８．２±５．８）％，而对照组仅为（１２．５±１．７）％（Ｐ＜０．０１，ｎ＝１０）。光镜及电镜检查见细胞核固缩，碎裂，有凋亡小体形成。ＤＮＡ电泳显示典型的ＤＮＡｌａｄｄｅｒ。流式细胞术检测发现ＣｓＡ５０ｍｇ／Ｌ作用ＨＬ－６０细胞６ｈ凋亡细胞率为４９．７％，而空白组仅为９．１％。ＣｓＡ诱导ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ片段化呈剂量和时间依赖性。结论：ＣｓＡ在体外能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡。     

Caveolin-1对MGC803细胞增殖、分化的影响及其机制

为了研究caveolin-1对胃癌细胞生物学行为的影响，探讨caveolin-1作为基因治疗的候选基因的可能性，用Lipofectin将caveolin-1基因稳定转染胃癌细胞系建立稳定表达caveolin-1的胃癌细胞系MGCS03／Cav-1，并将空载体转染MGC803作为对照(MGC803／pcl-neo)。采用免疫细胞化学及western blot检测转染及未转染的MGC803细胞中caveolin-1的表达情况。     

抗人CD38分子单克隆抗体生物学功能研究

目的 研究抗人CD38单克隆抗体(1C6)的生物学功能.观察1C6对多种肿瘤细胞系生长增殖的影响,利用不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应,观察抗人CD38单克隆抗体(1C6)在人外周血淋巴细胞增殖反应中的作用.方法 以MTT法检测单克隆抗体抑制细胞增殖以及介导补体杀伤靶细胞的功能.利用抗人CD3单克隆抗体刺激人外周血淋巴细胞增殖、同种异型抗原诱导混合淋巴细胞反应,在加入或未加入抗人CD38单克隆抗体(1C6)的情况下,观察细胞形态并检测3H-TdR掺入量.结果 加入不同浓度的1C6的实验组与对照组相比,多种细胞系的生长受到不同程度的抑制.不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应中,加入1C6的实验组细胞克隆明显减少,3H-TdR掺入量明显下降,细胞增殖受抑.结论 1C6可抑制多种肿瘤细胞的生长,可介导补体杀伤多种靶细胞.1C6对抗CD3刺激的外周血淋巴细胞增殖以及混合淋巴细胞培养均具有明显的抑制效应.     

腺病毒载体介导的lacZ基因在NG细胞系及大鼠黑质的表达

本实验用标记基因ｌａｃＺ５型重组腺病毒（Ａｄ５ＣＭＶｌａｃＺ）转染培养的ＮＧ细胞系，Ｘ－ｇａｌ染色检测转染效率．在培养的ＮＧ细胞系，当病毒滴度为２×１０８时，转集率达到５０％，当滴度为２×１０９时，转染率达１００％，有较好的量效关系；固定病毒液度为１０１０，培养２～１６ｈ，细胞的转染率随时间延长而提高，有较好的时效关系。将Ａｄ５ＣＭＶｌａｃＺ注射到大鼠黑质部位后，分别于注射后３～１２０ｄ取脑、切片、Ｘ－ｇａｌ染色，发现黑质局部从第７ｄ开始有部分蓝染，第１０ｄ达高峰，注射局部感染率１００％；９０ｄ时开始下降，持续至１２０ｄ；纹状体等其它部位无蓝染．上述结果提示，腺病毒载体介导的标记基因可在培养的神经细胞系和中脑黑质部位高效表达，为进一步开展中枢神经系统退变性疾病尤其是帕金森氏病的基因治疗奠定基础。     

DNA错配修复基因甲基化在肝细胞癌发生发展中的作用

目的探讨DNA错配修复基因(MMR)hMLH1,hMSH2和hMSH3甲基化在肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法对38例新鲜HCC组织,相应非肿瘤肝组织,2例正常的捐肝组织及6种肝癌细胞系的hMLH1,hMSH2和hMSH3基因启动子CpG岛甲基化进行检测;培养6种肝癌细胞系,MSP法检测加入5-aza-2‘-deoxycytidine前后hMSH2基因在HCC中的甲基化状态改变;逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测加入5-aza-2’-deoxycytidine前后hMSH2在肝癌细胞株中的mRNA表达改变。结果HCC标本中13．2％(5／38)发生了hMLH1启动子甲基化,68．4％(26／38)发生了hMSH2启动子甲基化;相应的非肿瘤肝组织中hMLH1,hMSH2启动子甲基化阳性率分别为2．6％(1／38),55．3％(21／38);2例正常肝组织中未发现甲基化;6株肝癌细胞系中有5株发生了hMSH2启动子甲基化,而未发现有MLH1启动子甲基化。所有标本中均未发现有hMSH3启动子甲基化。5-aza-2‘-deoxycytidine处理细胞株后,可部分或完全逆转hMSH2启动子甲基化,各细胞株的mRNA均有不同程度的表达增加。结论hMSH3基因启动子CpG岛甲基化与HCC的发生发展关系不大。hMSH2基因甲基化与mRNA表达密切相关,是基因表达调节的一种重要方式。hMLH1和hMSH2基因启动子CpG岛的高甲基化在HCC中是一个常见的基因改变,DNA错配修复基因尤其是hMSH2基因启动子甲基化在HCC的发生中起了重要作用,是早期事件,其可能为临床诊断HCC提供新的检测指标。     

白血病MDR细胞系CEM／ADM超微结构改变的定量研究

对人类淋巴细胞性白血病ＭＤＲ细胞系ＣＥＭ／ＡＤＭ及其亲代药敏细胞系ＣＥＭ进行了超微结构的体视学定量比较。结果表明，ＣＥＭ／ＡＤＭ细胞分裂相较多见、核平均体积增大、核畸形严重、异染色质分布更散在、核仁异型性及边集较多见、多数细胞器不发达，说明ＣＥＭ／ＡＤＭ恶性程度更高，ＣＥＭ／ＡＤＭ线粒体平均体积增大与ＭＤＲ主要机制──Ｐ－糖蛋白过度表达而致能量需求增加相关。     

Acceleration of Immune Reconstitution after Bone Marrow Transplantation in Mice by Bone Marrow Stromal

To observe potential effect of the engineered bone marrow stromal cell line QXMSC1 secreting IL-6 (QXMSCIL-6) on accelerating immnune reconstitution in syngeneic bone marrow transplantation in mice, QXMSC1 was transfected with the eukaryocytic expression vector pcDNAIL-6, which contained hIL-6 cDNA by liposome-mediated gene transfecting technique. G418-resistance clone was selected by limiting dilution. The highest secreting clone was selected by ELISA assay and used in animal experiments. The recipient mice (BALB/c) were lethally irradiated and cotransplanted syngeneic bone marrow (10^7/mice) and the QXMSCIIL-6 (5×10^5/mice). Lymphocyte proliferation induced by ConA and LPS, helper T lymphocyte precursor (HTLp), cytotoxic T lymphocyte precursor (CTLp), plaque-forming cell (PFC), delayed type hypersensitivity (DTH) were examined 30, 60 days in post transplantation respectively. The results showed that lymphocytes proliferation to ConA and LPS, HTLp, CTLp increased, DTH and PFC were improved by cografted stromal cells QXMSCIIL-6 on 30, 60 days after BMT. These results demonstrated that the bone marrow stromal cell line QXMSC1 IL-6 transfected with IL-6 (QXMSC11L-6) accelerated immnune reconstitution in syngeneic bone marrow transplantation.     

miR-29b介导的TGF-β/Smad信号通路对大鼠肝纤维化进程的影响

目的:初步研究微小RNA-29b(mi R-29b)介导的TGF-β/Smad信号通路在肝星状细胞(HSC)活化中的作用及其对大鼠肝纤维化进程的影响。方法:构建肝纤维化大鼠模型并分离其HSC,同时通过体外获取并鉴定正常大鼠HSC。运用RT-qPCR和Western blot检测以上获取细胞中mi R-29b、TGF-β/Smad信号通路相关蛋白和肝纤维化标志蛋白的变化水平,并通过双萤光素酶报告基因检测系统鉴定mi R-29b对TGF-β1的直接靶向结合情况。结果:随着HSC活化加深,mi R-29b的表达量逐渐减少(P 0. 01),而HSC活性标志物I型胶原蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的表达量逐渐增加(P 0. 01)。在TGF-β/Smad信号通路中,Smad2/3/4的表达显著增加,而Smad7的表达明显下降(P 0. 01)。双萤光素酶报告基因检测结果显示,mi R-29b可直接结合于TGF-β1 3’UTR的"UCUCUCCGU"序列,表明TGF-β1为mi R-29b的一个下游靶基因。结论:mi R-29b可参与抑制HSC的活化和迁移,进而抑制肝纤维化进程,而其生物学功能可能是通过直接靶向抑制TGF-β1进而调控TGF-β/Smad信号通路实现的。     

三磷酸腺苷对人胃癌细胞系MGC－803影响的电镜观察

用透射电镜和扫描电镜方法观察了三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对人胃癌细胞系ＭＧＣ－８０３的影响，结果表明，ＡＴＰ能使ＭＧＣ－８０３细胞的核仁由网状向环状改变，微丝的组装得到改善，细胞表面微绒毛减少。提示ＭＧＣ－８０３细胞的恶性表型在ＡＴＰ作用下可向正常方向逆转。     

三磷酸腺苷对人胃癌细胞系MGC—803影响的电镜观察

用透射电镜和扫描电镜方法观察了三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对人胃癌细胞系ＭＧＣ－８０３影响，结果表明，ＡＴＰ能使ＭＧＣ－８０３细胞的核仁由网状向环状改变，微丝的组装得改善，细胞表面微绒毛减少。提示ＭＧＣ－８０３细胞的恶性表型ＡＴＰ作用下可向正常方向逆转。