用PCR—RFLP和16SrDNA指纹图法分析幽门螺杆菌基因型

本文建立了PCR－RFLP和16srDNA指纹图法．对19株幽门螺杆菌（HP）进行基因型分析：HP尿素酶C基因的PCR扩增产物．分别用HindⅢ、HaeⅢ、AluⅠ酶切，结果显示：每个酶均将19株HP分为3种RFLP图谱．综合HindⅢ，HaeⅢ和AluⅠ酶切结果，19株HP分为10个酶切带型；PCR扩增HP标准株16SrRNA基因，地高辛标记制备550bp探针，19株HPDNA分别经HaeⅢ和EcoRⅠ酶切、电泳后，通过Southern杂交获16SrDNA指纹图，结果显示：HaeⅢ酶切分为14个杂交带型，EcoRⅠ酶切19株HP杂交带型均不同。本实验表明：上述两种方法重复性好，分群力高，可准确有效地对HP作出鉴定并将其分型。19株HP株间存在基因型差异。     

Use of the 90Sr applicator for intraoperative radiation therapy in a mouse tumor model

Intraoperative radiation therapy (IORT) research is limited by the lack of small-animal models. We have implanted B16 melanoma into mouse kidneys, which we subsequently operated upon and irradiated with beta rays from a ⁹⁰Sr ophthalmic applicator. The IORT has effectively prolonged survival and produced some cures. The strategy should be applicable to other murine tumors and to other internal implantation sites.     

4666例妇女PCR检测HPV感染结果分析

目的:了解宫颈炎、宫颈及外阴赘生物、外阴疣等患者HPV感染的状况。方法:提取患者宫颈分泌物及脱落细胞、赘生物脱落细胞,用荧光定量PCR方法对提取物进行HPV6/11、HPV16/18检测。结果:4 666例患者中HPV感染率为25.50%;1 808例宫颈炎患者中HPV16/18型阳性率为13.38%;2 858例宫颈或外阴赘生物、外阴疣患者HPV6/11型阳性率为33.17%;228例同时接受了HPV6/11和HPV16/18型检测的患者中,有28例同时感染低危型及高危型乳头瘤病毒,占受检者的12.28%。结论:HPV在女性生殖道有较高的感染率,不同型别的乳头瘤病毒感染可导致不同的病变,HPV是影响女性生殖健康的重要危险因素;宫颈癌的年轻化与HPV感染低年龄段高感染率有密切关系;加强生殖健康宣传教育,提高性保健综合服务水平任重而道远。     

P16MTS1、P27KIP1基因在胆管癌组织中的表达研究

目的：探讨P16^MIS1,P27^KIP1基因与胆管癌临床病理的关系。方法：采用免疫组化方法，检测48例胆管癌和8例伴慢性炎症的胆管壁组织中P16^MIS1,P27^KIP1蛋白表达情况。结果：（1）胆管癌中P16^MIS1,P27^KIP1阳性表达率分别为47．9％和35．4％，而伴炎症的胆管组织阳性表达率为100％和87．5％；（2）P16^MIS1,P27KIP1蛋白表达与胆管癌的分化程度，有无淋巴结或远处转移以及临床分期呈显著相关性。结论：P16^MIS1,P27^KIP1多基因表达异常可能与胆管癌的发生发展有关，是衡量胆管癌预后的有用指标。     

长波紫外线照射对小鼠黑素瘤细胞的影响

[目的]研究不同剂量UVA照射对体外培养B_16小鼠黑素瘤细胞的形态、增殖率、黑素含量和酪氨酸酶活性的影响。[方法]选用B_16小鼠黑素瘤细胞 ,经不同剂量的UVA照射后 ,采用MTT法测定细胞的增殖 ,参照HideyaAndo等的方法测定酪氨酸酶活性和黑素含量。[结果]UVA照射后 ,黑素含量增加 (P<0.01) ,酪氨酸酶活性提高 (P<0.05) ,细胞增殖率上升 ,照射剂量在0.6、1.2、1.8J/cm2时 ,细胞增殖率的变化有显著性 (t=2.495、2.645、3.081,均为P<0.05)。[结论]随着照射剂量的增加 ,黑素含量增加 ,酪氨酸酶活性提高 ,细胞的增殖率增加 ,但UVA的促黑素瘤细胞增殖作用是有限的     

人乳头瘤病毒多肽与人免疫球蛋白G融合表达

目的 将人乳头瘤病毒16型(Human papillomavirus type 16，HPV-16)的晚期表达蛋白E7上的抗原24肽(从第38位氨基酸到第61位氨基6病毒感染防治酸)与人免疫球蛋白G的重链恒定区融合表达，并以此融合蛋白作为抗原，可能为HPV-1提供免疫治疗方法。方法 利用PCR方法分别扩增HPV-16 E7(38-61)24肽的DNA片段和人免疫球蛋白G的重链恒定区DNA片段，并构建到pEV21a表达载体上，转化入E．coli中表达，利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质免疫印迹(Western-blotting)的方法对表达结果进行鉴定。结果 构建的表达载体HPV16E7e／hIgGHCCR-pET21a经酶切鉴定和测序显示序列正确；通过SDS-PAGE和Western-blotting的鉴定，重组融合蛋白Mr约40000，表达量可占菌体蛋白的20％左右。结论 成功构建HPV16-E7的抗原多肽片段和人免疫球蛋白G的重链恒定区的融合蛋白，并可在E．coli中高效表达。     

76例宫颈癌组织中人类乳头瘤病毒的检测

本文应用ＨＰＶ－ＰＣＲ技术和ＤＮＡ杂交技术对７６例宫颈鳞癌标本进行了ＨＰＶ－ＤＮＡ的研究，发现ＨＰＶ－ＤＮＡ存在率为９０．７９％（６９／７６），主要类型为ＨＰＶ１６和１８。多酶切ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ杂交证实在宫颈癌中９２．５６％的ＨＰＶ－ＤＮＡ发生变异，说明ＨＰＶ－ＤＮＡ的基因变异与其致癌作用密切相关。ＰＣＲ结果证实ＨＰＶ－Ｅ６片段在宫颈癌组织中常可出现，推测可能是致癌的关键片段之一。因此，检测宫颈癌组织中ＨＰＶ－ＤＮＡ的完整性、关键基因片段的存在与否，可能对于病变恶变的预测有一定的意义     

D16S80和D16S125两位点RFLP在多囊肾症状前诊断中的应用

给出了用“混合型”雅可比级数的泰勒平均逼近黎普希兹函数类的点态估计。     

Nucleic acid spot hybridization with nonradioactive labeled probes in screening for human papillomavirus DNA sequences

We examined 161 human tissue samples using the spot hybridization technique with nonradioactive labeled DNA probes of human papillomavirus (HPV). Whole cells were spotted on nitrocellulose filters; DNA of the cells was denatured and fixed to the filter. Then the DNA spots were hybridized to nonradioactive labeled DNA and monitored by a sandwich immunoenzymatic reaction. This technique is simple, sensitive, specific, requires no special equipment, and can be used in clinical settings. HPV DNA was found in 92% of samples in which, on the basis of histologic and colposcopic criteria, its presence was suspected, as well as in 31 samples where it was not suspected.     

莱菔硫烷对人膀胱癌细胞周期的影响及机制研究

背景与目的:探讨莱菔硫烷对人膀胱癌细胞(T24)细胞周期的影响及作用机制。材料与方法:采用噻唑蓝(MTT)法研究不同浓度的莱菔硫烷对T24细胞生长的抑制作用并测定其半数抑制浓度(IC50);采用流式细胞仪检测莱菔硫烷对T24细胞周期的影响;采用westernblot研究莱菔硫烷对T24细胞中细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂P16和P27的表达情况。结果:在较低剂量范围内(≤40μmol/L),随着作用剂量的增加,莱菔硫烷对T24细胞的生长的抑制作用也明显增强。10、20、40μmol/L莱菔硫烷的抑制率分别为(12.5±3.95)%,(25.0±2.50)%、(50.0±5.33)%;在较高剂量(60μmol/L~160μmol/L)时,这种抑制作用不再呈剂量依赖性;莱菔硫烷作用72h后的IC50值为(51.12±7.10)μmol/L;莱菔硫烷能使T24细胞周期阻滞于G0/G1期,20μmol/L莱菔硫烷作用48h后,在G0/G1峰之前出现凋亡峰;20μmol/L莱菔硫烷作用于T24细胞8、12、24h后能明显诱导P27蛋白的表达,作用早期(8h)时能诱导P16蛋白的表达。结论:莱菔硫烷能抑制T24细胞生长并使该细胞周期阻断在G0/G1期,其作用机制主要是通过诱导P27蛋白及早期诱导P16蛋白来实现的。