17β-雌二醇可促进胃癌细胞BGC823生长

目的:观察不同浓度17β-雌二醇(E2β)处理时,人胃癌BGC823细胞生长情况以及雌激素受体ERα36表达的变化,探讨E2 β在胃癌生长调节中的作用及相关机制.方法:BGC823细胞经10-10,10-11和10-12 mol/L浓度的E2β处理24 h和48 h.细胞生长通过WST1方法检测.RT-PCR,Western blot及灰度分析法检测ERα36mRNA水平及蛋白水平变化,其平均光密度值通过t检验分析,应用免疫荧光染色方法检测ERα36蛋白在细胞中的位置变化.结果:E2β可促进胃癌BGC823细胞生长,但随着其浓度的上升,E2β的促生长能力下降.E2β可促进ERα36 mRNA表达,该促进作用具有浓度依赖性.E2β处理BGC823细胞24 h时,ERα36蛋白表达上升,48 h时,ERα36蛋白表达下降.ERα36蛋白定位于细胞膜,E2β对BGC823细胞ERα36蛋白定位无明显影响.结论:E2β可促进胃癌细胞BGC823生长.E2β-ERα36可能通过膜信号通路参与了胃癌细胞的生长调节.     

乳腺癌MCF-7细胞系中侧群细胞分选及其生物学特性

目的 分离乳腺癌MCF-7细胞系中的侧群细胞(SP)并观察其生物学特性.方法 利用流式细胞荧光分选法将乳腺癌MCF-7细胞系分成SP和非SP细胞两个亚群.对两个亚群细胞采用软琼脂克隆形成实验观察其增殖能力.结果 MCF-7细胞株中分选出SP细胞占(6.5±0.4)％;SP细胞的体外克隆形成率为(38.5±9.4)％,高于非SP细胞的(8.4±2,6)％(t=5.34,P＜0.05).结论 乳腺癌MCF-7细胞中的SP细胞富集了乳腺癌于细胞,其增殖能力强于非SP细胞,表明SP表型的肿瘤细胞在乳腺癌的生长中具有重要的地位.     

异硫氰酸苯己酯诱导伊马替尼耐药K562/G01细胞株凋亡的组蛋白调控机制研究

目的体外观察异硫氰酸苯己酯(PHI)对人慢性粒细胞白血病伊马替尼耐药的K562/G01细胞株的凋亡的影响,初步探讨其可能的组蛋白调控机制。方法流式细胞仪检测PHI作用前后K562/G01细胞凋亡的变化;Western Blot检测PHI处理K562/G01细胞株后凋亡相关蛋白Bcl-2,procaspase-3,组蛋白H3、H4乙酰化状态,组蛋白H3K4、H3K9甲基化状态的变化。结果 PHI可以诱导K562/G01细胞凋亡,且呈浓度依赖性。PHI终浓度为0,10,20,40μmol/L时,K562/G01细胞凋亡率分别为(3.76±1.46)%,(8.89±2.31)%,(18.10±3.56)%,(35.35±3.70)%,差别有统计学意义(n=3,P<0.05);凋亡相关蛋白Bcl-2及procaspase-3的表达下降;组蛋白H3、H4乙酰化及组蛋白H3K4甲基化水平均上升,而H3K9甲基化水平下降,随着作用时间的延长变化趋势更加明显。结论 PHI能诱导K562/G01细胞凋亡,可能与PHI对组蛋白的乙酰化及甲基化调控有关。     

葛根素抑制HL60细胞增殖及抗裸鼠移植瘤的研究

目的检测葛根素对髓系白血病细胞系HL-60增殖及HL-60细胞裸鼠移植瘤的影响。方法 （1）MTT法检测不同浓度葛根素对HL60生长的影响;（2）Western blot检测葛根素对HL-60细胞AKT及ERK信号通路的影响;（3）以HL-60细胞系建立裸鼠移植瘤模型,考察葛根素对小鼠抑瘤率和生存期的影响。结果 （1）当葛根素浓度为0.1g/L和0.2g/L时,对HL-60细胞的生长有明显抑制作用（P〈0.01）;（2）0.1g/L和0.2 g/L的葛根素处理降低了HL-60细胞p-AKT、p-ERK蛋白的表达;（3）HL-60细胞移植瘤模型建立后,50mg/kg葛根素处理组抑制肿瘤生长,其抑瘤率为60.6%。结论葛根素可抑制髓系白血病细胞系HL-60增殖及HL-60裸鼠移植瘤的生长。     

PD98059对HL60细胞Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导影响的研究

目的探讨MEK1抑制剂PD98059对HL60细胞Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导以及细胞增殖的影响。方法四唑盐比色试验(MTT)法检测PD98059对HL60细胞增殖的抑制作用,流式细胞术观察PD98059对HL60细胞凋亡和G0/G1期阻滞的影响,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定PD98059对HL60细胞ERK2、p27、Skp2基因表达的影响,免疫组织化学SP法检测ERK2、p27、Skp2蛋白表达的改变情况。结果 PD98059能够抑制HL60细胞的生长,该抑制作用具有浓度及时间依赖性(P<0.05)。PD98059能够促进HL60细胞凋亡,该作用具有浓度及时间依赖性(P<0.05);PD98059作用HL60细胞48h,随着浓度的增加G0/G1期阻滞增强(P<0.05)。PD98059可使HL60细胞ERK2、Skp2的mRNA及蛋白表达量减少,p27的mR-NA及蛋白表达量增加(P<0.05)。结论 PD98059能够抑制HL60细胞的生长,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,促进其凋亡,这可能是通过PD98059阻断Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导,影响了ERK2、Skp2、p27等的表达而实现的。     

胆固醇衍生物阳离子脂质体复合EGFP—IL-1Ra质粒体外转染HELA细胞系的研究

目的研究胆固醇衍生物阳离子脂质体复合EGFP—IL—IRa质粒体外转染HELA细胞系的效率,为类风湿性关节炎治疗提供新的选择。方法制备新型胆固醇衍生物脂质体及EGFP—IL-1Ra质粒,两者结合转染HELA细胞系,通过体外凝胶阻滞试验检测阳离子脂质体与质粒DNA的最佳配比关系,MTT法检测脂质体细胞毒性,荧光免疫法检测HELA细胞的转染效率。结果实验中所用脂质体的IC50为650μg／mL,较对照组有更低的细胞毒性。脂质体／DNA质量比为50：1作为最适比例,荧光显微镜观测脂质体结合EGFP—IL-1Ra质粒转染HELA荧光强度高于单纯EGFP—IL-1Ra质粒转染组。结论胆固醇衍生物阳离子脂质体复合EGFP—IL-1Ra质粒可高效的转染HELA细胞系,有望成为类风湿性关节炎治疗的新方法。     

神经黏附分子NECL1抑制神经胶质瘤细胞的迁移、侵袭并诱导其分化

目的 在NECL1表达缺失的神经胶质瘤细胞系中探讨神经黏附分子NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响.方法 在U251胶质瘤细胞系中,通过划痕及Transwell实验观察NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响,通过对细胞外金属蛋白酶活性的检测证明NECL1恢复表达后对肿瘤侵袭能力的影响.利用不同培养密度的U251细胞,对NECL1恢复表达后细胞形态进行观察,并通过Western blot实验验证相关蛋白的表达.结果 在NECL1表达缺失的胶质瘤细胞系U251中,恢复NECL1的表达后,肿瘤细胞的迁移及侵袭受到了抑制. NECL1恢复表达的U251细胞有向星形胶质细胞分化的趋势,星形胶质细胞标志蛋白神经胶质纤维酸性蛋白的表达上调.结论 神经黏附分子NECL1作为一个潜在的胶质瘤抑制因子,对肿瘤细胞的迁移和侵袭能力均有不同程度抑制作用,同时,NECL1具有诱导神经胶质瘤U251细胞向星形胶质细胞方向分化的潜能.     

基于ENC28J60的局域网心电采集系统的设计

设计一种基于新型网络控制芯片ENC28J60的局域网心电采集系统。系统主控制芯片采用ARM7内核的LPC2148。在处理上,首先在模拟前端对心电信号经过放大和滤波处理,再AD转换后经信号隔离,然后送至局域网中主机端进行多通道波形显示和存储。实验证明本系统具有稳定性强、功耗低、安全性高及使用方便等特点,且同时满足采集和显示的要求。此系统适用于病房的心电远程监控,促进了病房监护的自动化进程,具有很好的市场应用前景。     

TRAIL联合长春新碱对HL-60细胞生长及凋亡的影响

目的研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）联合长春新碱（VCR）诱导急性早幼粒白血病细胞株HL-60细胞凋亡,探讨其应用于临床的可行性。方法在对数生长期的HL-60细胞中分别加入不同浓度的TRAIL和0.1mg/L的VCR,采用MTT比色法测定TRAIL和VCR单独和联合应用时对细胞的生长抑制率,并用流式细胞术检测细胞凋亡。结果TRAIL联合VCR可协同降低HL-60细胞活力,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。且24h内当TRAIL浓度〈100g/L时促调亡作用随TRAIL浓度增加及培养时间延长而增强（P〈0.05）,而24h内当TRAIL浓度≥100μg/L时以及24h后虽抑制率和调亡率较高,但随浓度增高作用无显著差别（P〉0.05）。结论TRAIL与VCR具有协同作用,能高效杀灭白血病细胞。TRAIL是一种有望应用于白血病临床治疗的新型生物制剂。