LMP1通过Survivin抑制60Co诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的　研究EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)介导凋亡抑制蛋白 (Survivin)表达对辐射效应的影响。方法　利用LMP1可调控表达鼻咽癌细胞系 (Tet on LMP1HNE2 )诱导LMP1表达 ,同时 60 Co照射 5Gy ,采用形态学观察、流式细胞术和半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase 3)活性检测等方法 ,分析LMP1表达对60 Co诱导鼻咽癌细胞凋亡的影响。用反义Survivin寡核苷酸阻断Survivin表达 ,观察Sur vivin表达阻断对60 Co辐射效应的影响。结果　LMP1表达抑制60 Co诱导鼻咽癌细胞凋亡 ,LMP1表达60 Co照射组形态学和流式细胞术检测凋亡率 (32 .7%± 2 .1% ,6 .3% )明显低于LMP1表达阴性组 (6 6 .0 %± 3.0 % ,2 9.6 % ) (P <0 .0 5 ) ;转染Survivin反义寡核酸后细胞凋亡率 (5 9.3%± 3.2 % ,3.0 % )明显高于对照组 (2 6 .0 %± 2 .6 % ,8.6 % ) (P <0 .0 5 ) ;同样转染Survivin反义寡核酸组Caspase 3活性 (3.78nmol/ 10 6)高于对照组 (2 .79nmol/ 10 6)。结论　提示LMP1通过介导Survivin表达而抑制60 Co照射诱导凋亡 ,Survivin反义核酸协同辐射诱导肿瘤细胞凋亡 ,Survivin作为增敏放射治疗靶 ,具有潜在的临床意义。     

雌二醇与孕酮对卵巢癌细胞系的影响

由于对卵巢恶性肿瘤患者的激素替代治疗 (HRT)是否增加复发的危险性尚存争议 ,妇科医师对卵巢癌术后的HRT持谨慎态度。我们采用体外实验的方法探讨了雌、孕激素对卵巢上皮癌的影响及机理 ,旨在为卵巢上皮癌患者合理的HRT奠定基础。一、材料与方法1.材料 :卵巢癌细胞系PE0 4、PE0 14由英国爱丁堡大学临床肿瘤中心皇家癌症基金实验室Grabra博士惠赠。PE0 4是来源于人的卵巢内膜样癌细胞 ,PE0 14来源于卵巢乳头状浆液性囊腺癌。2 .方法 :(1)雌、孕激素对卵巢癌细胞的抑制作用测定 :采用MTT法。实验组加入含有不同浓度的 17 β雌二醇、…     

~(60)Co照射对肿瘤坏死因子基因转导的人肝癌细胞的增殖及TNF-α分泌的影响

 目的　用⁶⁰ 钴 (⁶⁰ Co)照射肿瘤坏死因子基因转导的人肝癌细胞 (BEL 74 0 4 TNF细胞 ) ,用于制备一种肿瘤疫苗。方法　用不同方式及不同剂量的⁶⁰ Co照射BEL 74 0 TNF细胞及未转基因的BEL 74 0 4细胞 ,观察照射后细胞增殖情况及肿瘤坏死因子α(TNF α)分泌量。结果　经 80Gy ⁶⁰ Co连续分量照射的BEL 74 0 TNF细胞增殖能力丧失 ,但仍然生存并能持续分泌TNF α2周以上 ,细胞在 3周内全部死亡。结论　用⁶⁰Co照射BEL 74 0 4 TNF细胞制备肿瘤疫苗是可行的 ,80Gy ⁶⁰Co连续分量照射可能是合适剂量     

人单核巨噬细胞泡沫化抑制剂筛选模型的建立及应用

目的: 建立人单核巨噬细胞泡沫化抑制剂筛选模型,筛选得到可抑制细胞泡沫化的抑制剂.方法: U937单核细胞经100 nmol·L-1佛波酯(PMA)诱导72 h分化为巨噬细胞后,换无血清培养液于96孔板中,每毫升含巨噬细胞1×106个,每孔再加入80 mg·L-1氧化的低密度脂蛋白(ox-LDL),37 ℃培养48 h,建立单核巨噬细胞泡沫化模型.利用微生物发酵液,或单一的化合物样品与其共孵育,油红.染色后观察细胞胞内变化,寻找对泡沫细胞形成有抑制作用的样品.利用基因工程技术表达的人清道夫受体A类II型的胞外部分,在本模型中可抑制巨噬细胞泡沫化的形成,进一步验证了模型的可行性.结果: 从2000 个微生物发酵液中筛选到6株微生物发酵液为阳性,从10个化合物中发现一个有抑制巨噬细胞泡沫化活性的新化合物.结论: 本模型可用于细胞泡沫化抑制剂的高通量筛选.     

海藻多糖对辐射后巨噬细胞产生一氧化氮的影响

目的:研究海藻多糖(polysaccharides from seaweed,SP)对辐射后巨噬细胞(macrophages,MΦ)产生一氧化氮(Nitric oxide, NO)的影响.方法:用电子自旋共振(electron spin resonance,ESR)技术检测MΦ在8Gy的60Co-γ辐射后NO的波谱积分值,用免疫组化法研究MΦ中诱导性一氧化氮合酶(inducible NO synthase, iNOS)的表达.结果:经60Co-γ辐射后,MΦ产生NO减少,对脂多糖(LPS)、γ-干扰素(IFN-γ)等刺激因子和iNOS抑制剂及NO前体的敏感性降低,且MΦ中iNOS的表达明显下降.SP可部分程度地逆转上述变化.结论:SP可减缓辐射后MΦ产生NO的减少.     

新型PDE3抑制剂西洛他唑对fMLP诱导的HL-60细胞超氧自由基生成和钙离子浓度升高的影响

目的　研究新型磷酸二酯酶 (PDE) 3抑制剂西洛他唑(cilostazol)对中性粒细胞超氧自由基 (O·2 )和钙离子浓度([Ca2 + ]i)的影响。方法　体外培养急性早幼粒细胞白血病HL 6 0细胞 ,以 1 3%DMSO分化诱导为中性粒细胞样细胞后 ,采用特制新型仪器 ,同时实现化学发光法测定O·2 和荧光法测定 [Ca2 + ]i,观察西洛他唑对趋化肽N 甲酰 甲硫氨酰 亮氨酰苯丙氨酸 (fMLP)刺激引起的中性粒细胞样HL 6 0细胞O·2 生成和 [Ca2 + ]i 升高的影响以及二者变化的时相关系。结果　西洛他唑 (1～ 30 μmol·L-1)明显抑制由fMLP诱导的中性粒细胞O·2 生成和 [Ca2 + ]i 升高 ,其中 10和 30 μmol·L-1浓度的西洛他唑组与对照组相比差异有统计学意义 (P<0 0 1)。在时相关系上 ,fMLP诱导O·2 生成的达峰时间较之 [Ca2 + ]i 的变化略显滞后 ,而 10 μmol·L-1西洛他唑对fMLP诱导O·2 生成和 [Ca2 + ]i 升高的影响表现出一致性 ,几乎同步。结论　西洛他唑对fMLP 诱导的中性粒细胞样细胞内O·2 生成和 [Ca2 + ]i 具有同步的抑制作用 ,提示该药的药理学作用部分是通过影响中性粒细胞功能而实现的     

多种类型趋化性细胞因子在小鼠胸腺基质细胞系中的表达

目的分析趋化性细胞因子 SDF- 1α、 IP- 10、 KC、 MCP- 1和 RANTES在小鼠胸腺基质细胞系 MTEC1、 MTDC、 D2SC、 MTECB、 TEC 1C8、 TNC及原代培养胸腺基质细胞的半定量表达情况,并检测重组的趋化性细胞因子纯品 SDF- 1α、 IP- 10、 MCP- 1和 RANTES对小鼠胸腺细胞的趋化活性。方法以β- actin为内对照,用 RT- PCR方法,对上述 5种趋化性细胞因子进行 30个循环 PCR扩增,用凝胶成像系统观察扩增结果 ,并对各电泳带进行积分光密度扫描分析。用 Boyden小室法检测重组趋化性细胞因子 SDF- 1α、 IP- 10、 MCP- 1和 RANTES对全胸腺细胞的趋化活性,并计算其趋化指数。结果 SDF- 1α、 IP- 10、 KC、 MCP- 1和 RANTES在被检测胸腺基质细胞系的表达谱不同,表达强度亦有差异。 SDF- 1α和 MCP- 1在 D2SC和 TEC 1C8中未出现可见扩增条带;在 TEC 1C8中也未见 KC的扩增条带。重组趋化性细胞因子 SDF- 1α、 IP- 10、 MCP- 1和 RANTES对胸腺细胞的趋化指数分别为 3.7、 4.5、 6.2和 2.6。结论不同的胸腺基质细胞系,其趋化性细胞因子的表达谱和表达强度不同, 4种重组趋化性细胞因子对胸腺细胞表现出不同的趋化活性。     

四株人白血病多药耐药细胞系的建立及其生物学特性的初步研究

我们对人红白血病细胞株K562和人早幼粒细胞白血病细胞株HL－60应用高三尖杉酯破（HHT）或长春新碱（VCR），采用反复短期暴露法，并逐渐增加HHT和VCR的浓度，成功地建立了K562／VCR、K562／HHT、HL－60／VCR和HL－60／HHT四株具有高度耐药性的多药耐药（MDR）细胞系。免疫组织化学染色显示，K562／VCR、K562／HHT及HL60／VCR三株MDR细胞系有卜糖蛋白（Pgp）的高度表达，而HL－60／HHT细胞系没有pgP的表达。四株MDR细胞系均未见有多药耐药相关蛋白（MRP）的表达。5μg／ml异搏定和50μg／ml红霉素都能部分逆转K562／VCR、K562／HHT和HL－60／VCR三株MDR细胞系的耐药性，但其对HL－60／HHT细胞系的耐药性几乎无逆转作用。四株MDR细胞系与其相应敏感细胞系相比，前者对DNR的摄取均减少，外排均增加。2．5～10μg／ml异搏定能增加K562／VCR、K562／HHT和HL－60／VCR三株MDR细胞系对DNR的摄取量和滞留量，且其作用随异搏定浓度的增加而增强，但50～200μgn／ml红霉素不能增加它们对DNR的摄取量和滞留量。上述浓度异搏定或红霉素均不能增加HL－60／HHT细胞系对DNR的摄取量和滞留量。     

阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡

阿糖胞苷诱导ＨＬ－６０细胞凋亡仇志根吴马伴吟细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种不同于细胞坏死的死亡方式，正常细胞和肿瘤细胞均有凋亡。如何诱导肿瘤细胞凋亡是肿瘤治疗的新热点。我们以不同浓度的阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，观察了凋亡细...     

反义核酸抑制胃癌细胞Bcl-2表达

本文采用分子克隆技术成功地构建了反义核酸表达载体pDOR-Bcl-2 cDNA.以脂质体介导法将重组反义核酸表达载体转染受体细胞SGC7901,并经C418筛选,从2×10~5细胞中筛选出大约150个抗性克隆,转导率大于1‰,随机挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,获得了1株稳定的抗性细胞,从而建立了Bcl-2表达阻断的胃癌细胞株,我们命名为7901anBcl-2 cells.通过Southern印迹法、Northern印迹法、Western印迹法检测显示,转导株与非转导株均有Bcl-2 cDNA的表达,但转导株Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显低于非转导株.说明在胃癌细胞中Bcl-2基因处于高表达状态,通过真核表达载体介导的转染,反义Bcl-2可成功地导入胃癌细胞,并有效地阻断Bcl-2表达.