VP-16诱导细胞凋亡及其细胞核基质中热休克蛋白表达的研究

目的　研究VP 16诱导HL 6 0细胞凋亡的变化特点以及凋亡细胞及核基质中热休克蛋白 (HSP)表达的变化。　方法　琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞基因组DNA断裂 ;TUNEL法观察凋亡细胞的形态学变化 ;用免疫印迹方法显示凋亡细胞核基质蛋白、细胞总蛋白中HSP表达的差异。　结果　VP 16作用HL 6 0细胞 0 5h出现早期凋亡特征。作用 4h可见明显的DNA梯状条带。与未凋亡的细胞比较 ,凋亡细胞核基质蛋白中HSP70和HSC70表达明显上调 ;VP 16作用 2、3及 4h细胞总蛋白中HSP70的表达随时间延长略显增加 ;诱导 2 2h比诱导 4h时去除VP 16后孵至 2 2h凋亡细胞总蛋白HSP70表达量增强了 3 4倍。　结论　 1 HL 6 0细胞早期凋亡形态出现在DNA梯状条带形成之前。 2 凋亡细胞核基质中HSP70、HSC70的表达明显增加 ,经 2、3及 4h作用的细胞总蛋白中HSP70表达差异不显著。这提示细胞凋亡后HSP70的活性位点主要位于核基质上。 3 VP 16作用细胞时间增长至2 2h ,HSP的保护作用可能消失     

新生隐球菌荚膜基因CAP60与荧光蛋白融合表达系统的构建

荚膜是新生隐球菌的主要毒性因子 ,目前Ｃｈａｎｇ等已克隆了 4种荚膜基因 :ＣＡＰ5 9、ＣＡＰ6 4、ＣＡＰ6 0及ＣＡＰ10。已知这 4种基因对新生隐球菌的荚膜形成都是必须的 ,缺失任何一个基因都会使新生隐球菌变成无荚膜表型。搞清荚膜形成的任何一个生理、生化机制都将在新生隐球菌的临床诊断和治疗上带来突破性的进展。我们建立荧光蛋白作为标记与荚膜基因ＣＡＰ6 0融合表达 ,为进一步的研究创造条件。根据已知的ＣＡＰ6 0基因序列设计ＰＣＲ引物 ,上游为 5′ ＡＴＴＧＣＴＡＧＣＴＴＣＧＡ ＣＡＧＡＣＡＴＴＧＡＧＣＣＣＴ 3′ ,下游引…     

紫杉醇诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察抗微管药紫杉醇对急性白血病细胞株HL－60是否具有凋亡诱导作用,并进一步研究bcl－2基因在此过程中的作用。方法：（1）以紫杉醇处理HL－60细胞,观察细胞生长抑制作用的时间效应和剂量效应,在光镜和电镜下观察细胞形态变化;（2）用流式细胞仪检测药物孵育前后细胞凋亡率（AP）的变化;（3）用RT－PCR法检测药物孵育前后bcl-2基因的表达水平。结果：（1）在一定剂量和时间范围内紫杉醇能抑制HL－60细胞生长;（2）紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡,并显示剂量效应：（3）在紫杉醇诱导HL－609细胞凋亡过程中,bcl－2基因表达水平下调。结论：紫杉醇能诱导HL－60细胞凋亡;bcl-2基因参与了紫杉醇诱导HL－60细胞凋亡的调控。     

干扰素—α与蟾蜍灵、槲皮素、砷剂联合逆转HL—60／ADR耐药的初步研究

目的：探讨用干扰素－α（TNF-α、IFN）分别与蟾蜍灵（Bufalin,Buf),槲皮素（Quercetin,Que)、砷剂（Arsenic Trioxide,As2O3)联合或单独孵育耐药细胞株HL－60／ADR对ADR有无增敏及逆转耐药作用。方法：用MTT法检测IFN与Buf,Que,As2O3孵育后增敏作用。结果：IFN,Buf单独应用无增敏作用,但两者联合有增敏作用。Que,As2O3单独应用有增敏作用,但分别与IFN联用后增敏作用不增强。结论：Que,As2O3能增加HL－60／ADR对阿霉素的敏感性、逆转其耐药,IFN与Buf联合亦能增敏及逆转耐药。     

昆明种系小鼠胚胎干细胞的分离培养及特性鉴定

目的 提高昆明小鼠胚胎干细胞（ES细胞）建株的成功率。方法 收集小鼠3．5d的囊胚培养,用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,形成的ES细胞样集落,经两次亚克隆分离培养ES细胞;进行相差显微镜观察、碱性磷酸酶染色和体内外分化能力鉴定。结果 获得两个稳定ES细胞集落,传至第11代。ES细胞呈集落样生长,碱性磷酸酶染色强阳性,体外分化的细胞沿拟胚体外向性生长,形态多样,在体分化可形成来源于3个胚层的组织。结论 两次亚克地获得的细胞具有ES细胞主要的生物学性状,有助于提高昆明小鼠ES细胞建株的能力。     

潜艇航行60昼夜期间艇员躯体症状调查

有较多的文章报告潜艇长航时艇员心身健康水平下降,但直接、全面报告长航艇员躯体症状的资料较少.为此,我们在为某常规潜艇艇员航行60d后体检时,系统调查了该艇艇员航行过程中的躯体症状情况,现报告如下.     

乙肝散60Co辐照灭菌研究

乙肝散为贵州德祥制药有限责任公司生产 ,具疏肝利胆、健脾化湿 ,用于治疗慢性乙型病毒性肝炎等疾病。因部分乙肝散达不到国家卫生检验标准 ,需进行 60 Co辐照补充灭菌 ,照射量为 6k Gy,为确认60 Co辐照对乙肝散质量影响 ,对 60 Co辐射前后的样品作对比实验。1　实验材料1 .1　实验药品与试剂 :大黄素对照品 (中国药品生物制品检定所提供 ) ;土大黄对照药材 (贵州省药品检定所提供 ) ;乙肝散 (贵州德祥制药有限责任公司提供 )。1 .2　仪器与分析条件 :电光分析天平 (TG- 32 8A) ;三用紫外分析仪 (ZF- 1型 ) ;LC- 6A高效液相色谱仪(日本…     

ATRA和雄黄对白血病细胞PML基因及蛋白表达的影响

目的探讨PML基因及蛋白在白血病细胞中的表达和细胞内分布定位。方法经ATRA、雄黄处理后的NB4、HL-60、K562细胞为研究对象,细胞形态学观察采用Wright’s染色法及荧光染色法;PML蛋白细胞内分布定位采用免疫荧光技术;PMLmRNA表达采用RT-PCR法。结果 1.ATRA处理后,NR4和HL-60细胞形态学上出现分化表现,K562细胞无变化;经雄黄处理后,各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。2.ATRA处理后,NB4细胞内融合蛋白降解,PMl蛋白恢复定位,HL-60、K562细胞内PML蛋白定位分布无变化;雄黄处理后NB4细胞内融合蛋白降解,PML聚积于POD结构,随后降解;在HL-60及K562细胞,PML发生相似改变。3.ATRA、雄黄处理后各组细胞PMLmRNA表达均无显著影响。结论在不同诱导剂刺激下,PML基因在蛋白水平参与细胞终末分化及诱导白血病细胞凋亡机制;PML蛋白在POD中发挥诱导凋亡控制细胞生长的作用。     

APO2.7在凋亡和坏死的HL-60细胞中的表达

目的研究单克隆抗体APO2.7识别的一种线粒体膜蛋白质在凋亡和坏死的HL-60细胞中的表达情况.方法依托泊甙(VP16)和热处理分别诱导HL-60细胞产生凋亡和坏死,用荧光显微镜检查、DNA片段化和PI摄取试验进行鉴定,利用流式细胞仪分析其APO2.7的动态表达.结果凋亡细胞的APO2.7表达率在0、2、4、8、16、24h分别为(2.5±0.56)%、(4.4±0.61)%、(6.5±0.70)%、(6.2±0.17)%、(25.8±0.56)%和(15.7±0.26)%.而坏死细胞却分别是(4.5±0.72)%、(62.8±0.26)%、(87.8±0.41)%、(93.5±0.95)%、(94.8±0.53)%和(89.3±0.85)%.二者均在16h达到峰值.结论提示APO2.7可能不是凋亡测定的特定标志而是在细胞死亡(凋亡和坏死)过程中发挥作用.     

蛇毒酶粉针剂辐照灭菌的应用研究

目的:研究蛇毒酶粉针剂辐照灭菌的可行性.方法:采用60钴-γ射线对蛇毒抗栓酶冻干粉针剂进行辐照灭菌,用无菌检查方法检查灭菌效果.经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别、酶活性分析等项目的检测,分别比较辐照前后蛇毒酶的质量变化.用动物实验方法,比较辐照前后对药物疗效的影响.结果:在77.4 C/kg照射剂量以内,灭菌效果理想,蛇毒酶粉针剂的物理化学性质不改变.动物实验表明,对本品的药效无影响.结论:此方法适用于蛇毒酶粉针剂的灭菌.