环孢菌素A阻断人HL－60抗药性细胞于G_1期而诱导敏感细胞凋亡

进一步研究了抗三尖杉酯碱的ＨＬ－６０细胞（ＨＲ２０）抗细胞凋亡的机制及该抗性和抗药性的关系。结果表明，环孢菌素Ａ（ＣｓＡ）２０，１０μｇ·ｍｌ￣（－１）诱导ＨＬ－６０细胞发生凋亡，而阻断ＨＲ２０细胞于Ｇ＿１期，就不能诱导细胞发生凋亡。低浓度的ＣｓＡ明显增加柔红霉素在ＨＲ２０细胞内的积聚，其逆转抗药性作用与阻断细胞周期运行无关。ＣｓＡ１０μｇ·ｍｌ￣（－１）处理ＨＲ２０细胞，可引起５０ｋＤａ的蛋白质高度磷酸化。结果提示：环孢菌素Ａ阻断抗三尖杉酯碱的ＨＬ－６０细胞于Ｇ＿１期，而诱导敏感的ＨＬ－６０细胞发生凋亡，其阻断作用与抗药性无关     

HCV核心基因插入突变体编码蛋白对人肝癌细胞系(Huh-7)细胞基因表达的影响

目的用基因表达分析法鉴定丙型肝炎病毒(HCV)核心(Core，C)区基因插入突变体编码蛋白在人肝癌细胞系(Huh-7)表达，探讨该蛋白生物学功能及其基因表达改变与致病的关系。方法构建HCV-1bc基因插入突变体编码蛋白重组表达质粒，建立表达c基因插入突变体编码蛋白Huh-7细胞系，按Affymetrix公司实验程序制备探针、再与该公司H0u133A和Hg-u133b芯片杂交。对基因表达上调或下调≥3倍的基因，用NetAflk作进一步分析。并用半定量RT-PCR对其中3个上调基因进行鉴定。结果Microarray分析显示，HCV-1b C基因插入突变体编码蛋白比c蛋白引起更多的基因表达改变，主要集中在信号传导、蛋白酶活性、分子转运、免疫反应等，特别是免疫反应基因表达更加显著。C基因插入突变体编码蛋白表达可同时导致凋亡基因／抗凋亡基因表达上调或下调及致癌基因上调。半定量RT-PCR对有趣的致癌基因FHL2、抗凋亡基因PRKCZ和凋亡基因LGALSI的鉴定结果表明，FHL2、PRKCZ和LGALSI基因的表达比空载体转染对照组相同基因明显上调。结论Hcvc基因插入突变体编码蛋白在Huh-7细胞表达对其基因表达有很大影响，其中对免疫反应基因的影响更明显，这一结果对理解HCV C基因插入突变体编码蛋白在HCV致病过程中的作用及其研制抗HCV药物均有重大的参考价值。     

表皮生长因子对高转移人卵巢癌细胞生长和播？…

目的：探讨表皮生长因子（ＥＧＦ）对高转移人卵巢细胞（ＨＯ－８９１０ＰＭ）生长和播散的影响，方法；用细胞生长曲线，形态变化，细胞迁移集落观察ＥＧＦ对细胞生长和迁移的影响，用免疫细胞化学和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法观察ＥＧＦＲ和Ｎｅｕ癌基因蛋白在细胞的表达。结果：当培养液中ＥＧＦ０．０１ｍｇ．Ｌ＾－１培养７天，细胞数量增加１１倍，对照细胞数量增加４．９倍，细胞形态变梭形，边界清楚，排列松散，有６３％的细胞     

人白细胞介素12在哺乳动物细胞中的稳定表达及其生物活性的研究

目的采用遗传基因工程方法获得具有生物活性的人白细胞介素12,探索其治疗肿瘤和慢性肝炎的可行性。方法采用已克隆的国人IL-12基因序列,利用内部核糖体切入位点(IRES)完成IL-12P35、P40双亚基共表达载体的构建,通过转染CHODHFR缺陷细胞,双抗夹心ELISA法筛选阳性克隆,MTX加压扩增,PCR检测其基因整合,T淋巴细胞增殖和诱生γ干扰素实验检测其生物活性。结果获得了稳定高效表达人IL-12的工程细胞系,表达产物为70×103左右的糖蛋白。结论本研究得到的基因重组人IL-12具有良好的生物活性,有强的诱导产生γ干扰素的能力和诱导活化T淋巴细胞增殖能力。     

高三尖杉酯碱对HL60细胞凋亡的影响及机制的研究

目的:研究高三尖杉酯碱对HL60细胞凋亡的影响及其机制。方法:运用高三尖杉酯碱作用HL60细胞后撤药实验筛选其诱导HL60细胞凋亡启动时相,流式细胞和免疫组化技术检测高三尖杉酯碱诱导HL60细胞凋亡启动时相凋亡信号分子Bcl-2、Bax、Fas/FasL、caspase-3、ERK2和p38的表达状况。结果:在高三尖杉酯碱诱导HL60细胞凋亡启动时相,Bcl-2表达降低,Bax表达增高,Bcl-2/Bax比值降低,ERK2表达减低,p38表达增加,caspase-3表达增加,Fas/FasL分子的表达无显著变化。结论:Bcl-2、Bax、MAPK途径和caspase-3参与高三尖杉酯碱启动HL60细胞凋亡的信号转导。     

NFkB活化诱导剂筛选细胞的建立

目的:了解不同刺激剂作用HL-60细胞后对NF-kB活化的特点,为人类功能基因的筛选提供新的方法.方法:采用基因转染技术获得能稳定表达IkBa-EGFP融合蛋白的HL-60细胞系,定性和定量检测8种刺激剂作用于该细胞系后荧光强度的变化.结果:定性结果发现,在所用的8种刺激剂中,除IL-1ra作用后的细胞荧光强度没有明显的变化外,其它7种刺激剂作用后都有不同程度的细胞荧光强度的降低,尤以PHA作用后的变化更为典型.定量检测结果发现,稳定表达的HL-60细胞自身的荧光强度,随时间延长即有降低,IL-1ra作用后细胞荧光强度的降低同没有刺激时相比没有明显区别;其它7种刺激剂作用后均有明显的荧光强度降低,但它们作用后的特点并不相同.结论:该真核转染的细胞可用于NK-kB活化刺激剂的初步筛选,可以作为功能基因组研究中新基因功能初筛的一个平台技术.     

pGenesil-siHBV X 对 HepG2.2.15 细胞 HBV 表达和复制的抑制效果研究

 目的 研究针对HBV X基因区设计的小干扰RNA（siRNA）表达载体质粒pGenesil-siHBV X 对HepG2.2.15细胞HBV表达和复制的抑制效果及特异性。方法 针对HBV X区设计siRNA表达载体质粒pGenesil- siHBV X。分别用培养液（空白对照）、脂质体Metafectene、pGenesil 空载体、pGenesil-siHK（阴性对照）、pGenesil-siAFP（特异性对照）、pGenesil-siHBV X处理或转染HepG2.2.15细胞各3次。于每次转染后24 h，取各组细胞培养上清液，用时间分辨荧光免疫测定技术检测上清液中HBsAg和HBeAg含量，用化学发光法检测AFP含量，用PCR荧光定量技术检测HBV-DNA复制水平。 结果 pGenesil-siHBV X转染能抑制HepG2.2.15细胞对HBV标志物的表达，且抑制作用随转染次数增加而增强。第3次转染后，pGenesil-siHBV X组细胞上清液中 HBsAg、 HBeAg和HBV-DNA检测结果分别为（6.26 ± 1.07）ng/ml 、（0.13 ± 0.05）Ncu/ml和（3.01 ± 0.40）×107拷贝/ml，与空白对照组的（22.50 ± 1.39）ng/ml、（1.12 ± 0.11）Ncu/ml和（12.33 ± 1.28）×107拷贝/ml比较，差异有统计学意义（t值分别为12.80、12.21、9.71，P < 0.05）；pGenesil-siHBV X 转染不影响细胞对AFP的表达（t = 0.18，P = 0.86）。结论 pGenesil-siHBV X可以有效和特异地抑制HepG 2.2. 15细胞HBV-DNA的复制及HBsAg和HBeAg表达。     

用单克隆抗体测定血中卵巢肿瘤抗原NB/70K(文摘)

作者用4种不同抗卵巢肿瘤抗原NB/7oK的单克隆抗体(NBi2123。、NB129i3、NBi3s34和NB13831),用放射免疫测定法(RIA)检测人血中卵巢肿瘤抗原NB/70K的水平。以区别健康人、良性妇科疾病与恶性卵巢疾病。 方法未治疗的卵巢癌患者60例,健康对照组99例、良(32例)、恶性(44例)乳腺、肺(良性30例,恶性51例)和胃肠(良性29例,恶性49例)疾病患者的血清冷藏一70℃备用,恶性病经临床和病理检查所证实。标本加入单克隆抗体(McAb)37℃孵育15 min,然后加入I‘23标记的NB/70K,在37℃中继续孵育40 min。冷却后加入沉淀剂与兔抗鼠球蛋白,37℃孵育40 m…     

莱姆病螺旋体60kD抗原的基因克隆及表达

利用质粒ｐＡＴ１５３为载体，构建了莱姆螺旋体全细胞ＤＮＡ基因文库，用菌落原位固相酶斑法从文库中初选出一株表达６０ｋＤ抗原的克隆子，命名为ｐＬＷ２２７。经免疫印迹分析、核酸杂交、连续亚克隆分析，证明此重组菌株表达了莱姆螺旋体６０ｋＤ抗原，编码该抗原的基因表达单位为２．２ｋｂ或更小，位于莱姆螺旋体的染色体上。该抗原的表达为进一步研究莱姆病的致病机理打下了基础。     

氨甲酰磷酸合成酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的:制备抗人氨甲酰磷酸合成酶(CPSI)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定与应用.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备 mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化及免疫荧光染色的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原,借助免疫捕获的方法用抗体来分离复合物.结果:获得3株可稳定分泌抗人CPSI mAb的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgGl(K),该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化、免疫荧光染色、免疫沉淀实验和复合物的分离.结论:成功制备了抗人CPSI的mAb,为CPSI的研究提供了有力的工具.