冷冻切片常遇到的问题及解决对策

目的 提高制作冷冻切片质量，确保实验结果科学性。方法 通过对切片机工作室温度设置选择，防卷板的调整应用及切片常遇到的问题分析，阐述提高制作高质量冷冻切片的方法。结果 通过对冷冻切片机有关参数的设定，提高了切片质量。结论 冷冻切片常遇到的问题，通过及时调整切片机相应设置，可以便捷解决。     

PAS—M／PASM—M显示肾小球基膜,红细胞和细胞核的复合染色方法

多年来为了进一步提高肾小球的组化染色效果,我们进行了反复实验,根据染色机理和目的,重新组合PAS-M和PASM-M的二种染色方法,能够较好的显示肾小球毛细血管基膜、红细胞和细胞核的分布及病变程度,对于肾组织的疾病诊断和研究预后效果,具有一定的实用意义.1 材料和方法1.1 PAS—M法的试剂配制和染色方法 (1)试剂配制 ①Periodic acid (过碘酸)氧化液,过碘酸0.5g,蒸馏水98ml.②Martius yellow(马休黄)对比染色液:马休黄 0.5g,无水酒精 98ml,磷钨酸0.2g.③Schiff’s染色液:碱性复红2g,1M盐酸40ml,重亚硫酸钠4g,重蒸馏水400ml.先将蒸馏水煮沸,小火焰后加入碱性复红,再煮沸1分钟,冷却到50℃时加入盐酸,待35℃时加入重亚硫酸钠.将试剂盛棕色瓶中,冷却后入冰箱内备用.(2)染色方法 ①组织切片脱蜡至水.②过碘     

ELISPOT,MHC肽五聚体和ICCD三种检测特异性细胞免疫应答方法的比较研究

目的 比较三种特异性细胞免疫应答的检测方法，寻求一种简便、重复性好、易于质控的评价疫苗细胞免疫的检测方法。方法采用HIV DNA疫苗肌内注射BALB／c小鼠，第6周用艾滋病重组MVA痘苗病毒腹腔注射加强免疫，于第10天制备脾脏细胞悬液，并用酶联免疫斑点法（Enzymeunked Immune Spot，EusPOT）、MHC肽五聚体法和胞内细胞因子染色分析法（Intra—cellular cytokinede tection，ICCD）分别检测细胞免疫应答。结果 ELISPOT、MHC肽五聚体染色以及胞内细胞因子染色分析法检测疫苗组细胞免疫应答的阳性率分别为5／5、4／5和3／5；而且ELISPOT和MHC肽五聚体染色法之间有一定相关性（r=0、647），而ELISPOT和胞内因子染色法之间以及MHC肽五聚体染色和胞内因子染色之间无相关性。结论ELISPOT试验操作相对简单，灵敏度高、重复性好，是评价疫苗细胞免疫的有效方法。     

骨髓活检标本石蜡包埋制片方法

塑料包埋技术用于骨髓活检有许多优点，但目前还未能完全满足病理诊断需要。经过聚合后的骨髓组织，虽然能制成较薄的切片，但如需作免疫组织化学染色就相当困难。我们经过用多种脱钙液反复试验比较，最后选用“Formical-4”脱钙液用于骨髓活检标本脱钙，不论HE或免疫组织化学染色均收到良好效果。现将108例骨髓活检标本石蜡包埋制片方法介绍如下。     

骨髓粒—单系祖细胞集落染色体SCE的制备及正常值初探

介绍骨髓粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）集落姊妹染色单体互换（ＳＣＥ）的制备方法，应用时应注意集落细胞的收集，Ｂｒｄｕ及秋水仙胺浓度和作用时间等问题，为临床细胞遗传学的研究提供了新的手段。本文用本法删定２７例健康成人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ集落染色体ＳＣＥ频率为４．５９±０．６７次／集落细胞，该值可作为正常人分髓ＣＦＵ－ＧＭ集落ＳＣＥ的正常值供临床和实验参考。     

宫颈癌患者外周血淋巴细胞姐妹染色单体互换率及放疗前后染色体畸变率

本文对20例宫颈癌患者,20例正常人进行自发SCE频率以及宫颈癌患者放射线治疗前后染色体畸变的观察。结果表明:患者的SCE率为9.28±0.34/细胞,明显高于正常对照组(P<0.001),同时发现患者染色体数目及结构发生明显异常(P<0.01)。经放射线治疗后,染色体数目及结构异常与放疗前相比有显著改变,说明放射线虽可杀伤肿瘤细胞,但对正常细胞有较严重的损伤作用。本实验反映了癌患者淋巴细胞DNA复制后修复能力较正常人低,存在一定的遗传不稳定性。     

癌瘤患者骨髓细胞c－erbB和c－erbA的基因异常

本文在大系列研究造血系统恶性肿瘤-白血病和白血病前期的基础上，对３１例恶性肿瘤患者骨髓进行血液学、细胞和分子遗传学研究。发现恶性肿瘤患者骨髓有与白血病前期骨髓相似的病态造血（Ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｉａ）和相关基因异常即ｃ－ｅｒｂＢ基因重排、扩增和ｃ－ｅｒｂＡ缺失。它们不仅同骨髓红系病态造血相关，也同巨核系病态造血相关。骨髓巨核系病态造血及其相关基因异常可能代表急性淋巴细胞白血病等多种恶性肿瘤的早期病变。而ｃ－ｅｒｂＢ重排及其相关的骨髓巨核系异常增生可能是肿瘤发病的遗传背景。     

水通道蛋白4在大鼠胃内的分布

水通道蛋白 1(Aquaporin 1,AQP1)首次被克隆[1 ] 并证实其对水分子具有高度选择性和通透性 ,这为解析水分子快速透过以脂质双层分子为骨架基础 ,并具有亲脂性的细胞膜提供了结构基础。胃的生理功能之一是对水分的吸收和分泌 ,该过程涉及大量水分子跨膜运动 ,目前对胃粘膜上AQP功能及分布研究不多 ,已有的报道多与AQP1相关 ,而水通道蛋白4 (Aquaporin 4 ,AQP4 )的生物学特点与AQP1有所不同 ,即对汞不敏感。本研究应用免疫组化法检测正常大鼠胃粘膜内AQP4分布情况 ,以推测其在胃内的生理功能。1　材料与方法1 1　实验动物与标本准备 :…     

非肥胖型糖尿病小鼠胰腺淋巴管分布及微细结构的酶组织化学研究

应用酶组织化学的方法对非肥胖型糖尿病（ｎｏｎ－ｏｂｅｓｅｄｉａｂｅｔｉｃ，ＮＯＤ）小鼠胰腺淋巴管的分布及微细结构进行了光镜及电镜观察。５′－核苷酸酶（５′－Ｎａｓｅ）阳性小叶间淋巴管具有明显的神经支配和丰富的瓣膜，分布于整个胰腺。小叶内毛细淋巴管虽有典型的结构特征，如不规则的管腔、极薄的管壁和淋巴管内皮细胞的独特连接方式（端端、重叠与指状突起连接），但数量很少，其分布相对独立于毛细血管（碱性磷酸酶，即ＡＬＰａｓｅ阳性）。胰岛周围淋巴细胞浸润出现在生后４～５周，并开始于近血管或淋巴管一侧。糖尿病发病后，血糖浓度在短期内急剧上升，胰岛由严重的淋巴细胞浸润转化为β细胞脱颗粒及坏死。淋巴管内一般充满大量淋巴细胞。淋巴管内皮细胞内小泡明显增多，并有广泛的细胞质突起。其开放性细胞间连接均匀地附着有５－Ｎａｓｅ反应颗粒，形成了相当大的细胞间通路（５００～１５００ｎｍ），可见细胞或纤维碎片从组织间隙经此进入淋巴管腔。结果提示，糖尿病胰腺的淋巴管对浸润的淋巴细胞、坏死的细胞成分和某些溶质等的转运具有重要的作用。     

抗阴道毛滴虫单克隆抗体的制备及其特性

用杂交瘤技术建立了6株能稳定分泌抗阴道毛滴虫单克隆抗体的细胞株,选取其中3株进行了分析。3株单抗的效价分别是:ⅣA12B1和ⅣA22B1为250000ⅡB2A1为1250000。ⅣA12B1和ⅡB2A为IgG3抗体,ⅣA2281为IgGl抗体。位点分析及免疫酶染色发现,ⅣA12B1和ⅣA22B1抗同一抗原决定簇,所针对的抗原主要分布于膜上;ⅡB2A1针对的抗原主要分布于胞浆中。3株单抗针对的抗原均为糖蛋白。特异性试验发现,这3株单抗与人白细胞、阴道上皮细胞、白色念珠菌、大肠杆菌及人毛滴虫均无交叉反应。用制备的单克隆抗体,建立了试断滴虫性阴道炎的胶乳凝集试验(LAT)。研究表明,LAT是一种敏感、特异、简单和快速的方法。