Determination of chlorophylls and their derivatives in Gynostemma pentaphyllum Makino by liquid chromatography-mass spectrometry

The objectives of this study were to develop a high performance liquid chromatography-mass spectrometry (HPLC-MS) method for determination of chlorophylls and their derivatives in Gynostemma pentaphyllum Makino, a traditional Chinese herb possessing vital biological activities. Chlorophylls were extracted with a quaternary solvent system of hexane-acetone-ethanol-toluene (10:7:6:7, v/v/v/v), followed by separation of a total of 15 chlorophylls and their derivatives within 32min using a gradient mobile phase of acetone, acetonitrile and methanol and a HyPURITY C18 column, with detection at 660nm and flow rate at 1mL/min. Identification was carried out on the basis of retention behavior, absorption spectra and mass spectra using atmospheric pressure chemical ionization (APCI) in positive ion mode for detection. Of the 15 analytes, chlorophyll a, chlorophyll b, pheophytin a and pheophytin b were quantified by using standard calibration curves, with the other 11 being quantified with an internal standard Fast Green FCF. Chlorophyll extracts in G. pentaphyllum were found to contain pheophytin a (2508.3mug/g), pheophytin a' (111.2mug/g), chlorophyll a (113.8mug/g), chlorophyll a' (11.0mug/g), hydroxypheophytin a (88.6mug/g), hydroxypheophytin a' (66.5mug/g), pyropheophytin a (76.0mug/g), hydroxychlorophyll a (23.8mug/g), pheophytin b (319.6mug/g), pheophytin b' (13.2mug/g), chlorophyll b (287.9mug/g), chlorophyll b' (11.1mug/g), hydroxychlorophyll b (15.0mug/g), hydroxypheophytin b (11.2mug/g) and hydroxypheophytin b' (8.5mug/g).     

复方绞股蓝对金地鼠颊囊癌变过程中PCNA变化的影响

实验采用免疫组化技术,以增殖细胞核抗原(PCNA)为检测指标,对复方GP阻断金地鼠颊囊癌前病变的作用进行观察,发现复方GP能有效地降低PCNA阳性细胞标识率,与模型对照组相比,有显著性差别.说明复方GP通过抑制细胞异常增殖而发挥阻癌抑癌效果.     

绞股蓝黄酮类成分HPLC指纹图谱

目的:建立绞股蓝黄酮类成分HPLC指纹图谱。方法:反向高效液相色谱法,采用ZORBAX S_B-C_(18)色谱柱(4.6mm×150 mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,柱温30℃,检测波长360 nm,流速1.0 m L·min~(-1),进样量10μL。结果:建立了绞股蓝黄酮类成分HPLC指纹图谱,标定了11个共有指纹特征峰,方法学考察符合指纹图谱技术要求。结论:该方法稳定、可靠,精密度高,重复性好,可为绞股蓝药材的质量控制提供依据。     

Cytotoxic triterpenes from the acid hydrolyzate of Gynostemma pentaphyllum saponins

One new dammarane-type triterpene, gypsapogenin A (1), was isolated from the acid hydrolyzate of total saponins from Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino, together with two known compounds, (20S,24S)-3β,20,21β,23β,25-pentahydroxy-21,24-cyclodammarane (2) and (23S)-3β-hydroxydammar-20,24-dien-21-oic acid 21,23-lactone (3). Its structural elucidations were accomplished mainly on the basis of the interpretation of spectroscopic data, such as IR, HR-TOF-MS, and NMR. The cytotoxic activities were evaluated against HepG2 and A549 human cancer cell lines.     

药用绞股蓝主产区药材的定性分析

绞股蓝资源分布较广,秦巴山区为药用绞股蓝的主产区,选取其中陕西平利和四川青川2个区域的16份野生全草样本,利用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术(UHPLC-Q-TOF-MS^E)得到的精确相对分子质量、碎片信息,结合对照品的质谱、色谱规律及相关文献,鉴定陕西平利产绞股蓝药材中主要成分的结构。共鉴定了45个化学成分,包括43个达玛烷型三萜皂苷和2个黄酮,并发现绞股蓝中一类含量相对较高的糖基丙二酰基化的原生三萜皂苷。全面表征了药用绞股蓝中三萜皂苷成分的组成,并显示秦巴山区2个区域的野生绞股蓝药材成分组成较为相似,且共同含有绞股蓝皂苷ⅩLⅨ、绞股蓝皂苷A及其糖基丙二酰化产物等主要三萜皂苷,表明药用绞股蓝药材质量趋于一致,与文献报道的其他产区的绞股蓝药材成分差异较大。     

绞股蓝总甙对酒精性脂肪肝大鼠肝保护与TNF-α的关系

目的 建立酒精性肝病大鼠模型,研究绞股蓝总甙在酒精性脂肪肝大鼠肝脏中的保护作用与TNF-α的关系.方法 SD雄性大鼠建立大鼠酒精性肝病模型,干预组在建模同时以绞股蓝总甙200 mg/kg灌胃,每日1次.12周末处死大鼠,分别检测ALT、AST、TC、TG指标,采用ELISA试剂盒检测TNF-α;选取部分肝组织进行HE染色,光镜下观察肝组织病理学改变,取部分肝脏制备肝脏匀浆,使用流式细胞仪进行肝细胞凋亡检测.结果 研究显示,与模型组相比,干预组血清ALT、AST、TC、TG以及TNF-α水平均降低(P＜0.05),差异均有统计学意义.干预组病理评分为0.51 ±0.49分,显著低于模型组(P＜0.05);模型组凋亡率明显高于正常组(P＜0.05),干预组凋亡率明显低于模型组(P＜0.05);结论 绞股蓝总甙对酒精性肝病大鼠肝脏具有较好的保护作用.明显减轻酒精对肝脏的组织学损害,增强肝细胞抗氧化能力,对抗脂肪变性,尤其在抗凋亡中发挥较大的作用,其作用机制可能是通过下调细胞因子TNF-α水平来得以实现.     

酶法辅助提取绞股蓝中总黄酮工艺优化

目的 优化酶法辅助提取绞股蓝中总黄酮工艺。方法 采用响应面法优化工艺,绞股蓝经纤维素酶处理后用95%乙醇提取总黄酮,研究酶用量、酶解温度、酶解时间和酶解pH值对总黄酮得率的影响。结果 酶法提取的最佳工艺条件：酶用量120 U/mL,酶解温度49 ℃,酶解时间150 min,酶解pH值3.9,总黄酮得率可达0.357%。结论 纤维素酶辅助提取绞股蓝中总黄酮工艺稳定可行。     

绞股蓝对肿瘤细胞增殖和免疫功能的影响

采用细胞学、免疫细胞化学及 Ames 试验法观察绞股蓝对小鼠 S_(180)腹水瘤胞的细胞增殖、细胞有丝分裂周期 DNA 合成、抗基因突变能力、免疫器官(胸腺和脾)及外周血中 T 淋巴细胞 B 淋巴细胞及其亚群的影响。结果表明绞股蓝对对瘤细胞的抑制作用主要表现在对肿瘤细胞有丝分裂的阻断,干扰 DNA 合成过程及提高抗基因突变能力,同时也证实绞股蓝是较强的免疫增进剂,既能促进 T 淋巴细胞及其亚群的增殖,增强细胞免疫,又能促进 B 淋巴细胞的增殖,增进体液免疫。     

刺蓝抗疲口服液对小鼠免疫及抗应激作用的影响

目的研究刺蓝抗疲口服液的抗应激作用及对免疫功能的影响。方法将小鼠分为6组:空白组,模型组,口服养生精组,刺蓝抗疲口服液低、中、高剂量组,采用小鼠注射环磷酰胺和腹部手术分别建立免疫抑制和创伤模型,观察刺蓝抗疲口服液对免疫低下小鼠碳粒廓清、血清溶血素、创伤小鼠负重游泳耗竭时间和常压耐缺氧存活时间的影响。结果与模型组比较,刺蓝抗疲口服液高剂组碳粒廓清指数、血清溶血素明显提高,差异有统计学意义(P<0.01);小鼠负重游泳时间和耐缺氧的生存时间明显延长,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论刺蓝抗疲口服液具有抗应激和增强小鼠非特异性免疫及体液免疫功能的作用。     

RP-HPLC法测定绞股蓝中绞股蓝皂苷B的含量

目的：采用反相高效液相色谱法测定绞股蓝中绞股蓝皂苷B的含量。方法：采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（4．6mm×250mm,5μm）,以乙腈-0．5％磷酸（38：62）为流动相,流量1．0mL·min-1,检测波长210nm,柱温30℃。结果：绞股蓝皂苷B进样量在0．0402～2．012μg范围内与峰面积呈良好线性关系,平均回收率为99．52％,RSD为1．69％（n=6）。结论：该方法简便、准确,重复性好,可作为绞股蓝的质量控制方法。