病毒白细胞介素-10转基因在造血干细胞中的表达

目的　观察逆转录病毒转病毒白细胞介素 10 (vIL 10 )基因在体内的表达。方法　用MSCVneo vIL 10重组体在体外转导CBA (H 2 K)小鼠的造血干细胞 (HSCs) ,给经致死照射(90 0rads)的 2 0只同基因CBA(H 2 K)小鼠注入经MSCVneo vIL 10转染的HSCs ,2× 10 6HSCs/只。酶联免疫吸附测定 (ELISA)、逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )、Westernblot分析vIL 10的表达。结果　移植MSCVneo vIL 10转染HSCs的 2 0只小鼠 ,移植后 8周用ELISA检测 ,其中 15只小鼠血清的vIL 10浓度为 :2 70～ 13 40ng/L ,5只小鼠血清的vIL 10为阴性。 12周后有 2只小鼠vIL 10测不出 ,13只小鼠长时间表达vIL 10达 6个月。对照组小鼠血清vIL 10均为阴性。RT PCR和Westernblot证实小鼠的器官均有vIL 10的mRNA和蛋白的表达。结论　逆转录病毒能有效地将vIL 10基因导入造血干细胞并在体内长时间表达。     

人脑胶质瘤白介素13受体基因表达与肿瘤增殖活性的关系研究

目的探讨人脑胶质瘤白介素13受体（IL-13R）基因表达与肿瘤增殖活性的关系。方法对6例正常脑组织，50例人脑胶质瘤和2个脑瘤体外细胞系采用RT—PCR法和免疫组织化学法检测IL-13R。结果人脑胶质瘤组织IL-13RαmRNA总阳性表达率70％，正常脑组织中仅1例有极弱的表达；2例恶性胶质瘤体外细胞系均高表达。IL-13RαmRNA表达率和表达丰度与胶质瘤分级（前者rs=0．87，P〈0．01；后者rs=0．69，P〈0．01）、肿瘤增殖活性Ki-67LI（r=0．64，P〈0．01）呈正相关，即胶质瘤恶性程度越高，IL-13RαmRNA表达率和表达水平越高。结论IL-13Rα基因在人脑胶质瘤中表达上升，与肿瘤的分级和肿瘤增殖活性呈正相关，可作为预测某些肿瘤治疗效果及监测复发的指标之一。     

雌激素及其受体对心血管系统保护作用实验研究进展

雌激素对心血管系统具有重要的保护作用。雌激素及其受体主要通过调节血管舒张功能、抑制血管平滑肌细胞增殖和迁移以及影响肾素 -血管紧张素等介导这一保护作用。但临床上雌激素替代治疗尚未得到肯定 ,需进一步研究     

中国人不同C4基因型时血中C4浓度的定量检测

用神经氨酸酶及羧肽酶B处理血浆,依次经C4高压琼脂糖电泳、免疫固定、薄层激光扫描等步骤,并结合血浆免疫火箭电泳定量法对我国武汉地区随机人群的血浆C4总量及C4两种同种型,主要别型,单、双QO,重复座位等时的血浆C4含量进行了检测与分析。结果发现:遗传因素明显影响血浆C4水平,因而在群体中表现宽广的C4浓度范围,特别在有C4QO与C4重复基因座位时差异特别明显。这一研究提示,不同的C4基因型,循环C4含量表现明显差异。临床上检测C4含量时应该考虑患者的C4基因型别。     

Increase of prolactin mRNA in the rat hypothalamus after intracerebroventricular injection of VIP or PACAP

Vasoactive intestinal peptide (VIP), the structurally homologous pituitary adenylate cyclase-activating peptide (PACAP) and the pituitary hormone, prolactin (PRL) enhance rapid eye movement sleep (REMS). VIP and PACAP are both inducers of PRL gene expression and release in the pituitary gland. Little is known about PRL regulation in the brain although it is hypothesized that the REMS-promoting activity of i.c.v. administered VIP may be mediated via the activation of cerebral PRL. To test whether VIP or PACAP in fact increase intracerebral mRNA, the peptides (VIP: 30 or 300 pmol; PACAP: 220 pmol) were injected i.c.v. into rats at dark onset. 1 h later, cDNA was synthesized from purified hypothalamic mRNA. Standardized amounts were analysed for PRL using the polymerase chain reaction followed by Southern blotting and hybridization. Compared with β-actin mRNA levels, both VIP and PACAP increased PRL mRNA levels in a dose-dependent fashion though VIP was more effective on a molar basis. The previously reported alternatively spliced PRL mRNA (lacking exon 4) was not detected. The data support the hypothesis that the REMS-promoting activity of central VIP and PACAP might be mediated by cerebral PRL.     

p53基因与肝癌

p53肿瘤抑制基因突变与多数恶性肿瘤的发生发展有关,包括肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)在内的人类恶性肿瘤中至少有50%发生了p53基因改变。因此,以正常p53基因治疗肿瘤就成了研究热点,随着介入放射学(inter-ventional radiology)向纵深发展,经介入放射方法进行肝癌的基因治疗令人关注。本文介绍了p53基因的结构与功能,其与肝癌的病理联系以及在肝癌治疗中的应用。     

TLR4 Asp299Gly、Thr399Ile基因多态性对变应性哮喘的发病及IgE水平的影响

目的　探讨TLR4 (toll likereceptor 4 )Asp2 99Gly、Thr399Ile基因多态性对变应性哮喘的发病和血浆IgE水平的影响。方法　利用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析技术 (PCR RFLP) ,对 1 97例变应性哮喘患者和 1 5 6例健康人进行TLR4的Asp2 99Gly、Thr399Ile两位点的基因型检测。同时利用免疫发光法检测血浆IgE的水平。结果　 1 97例变应性哮喘患者TLR4基因Asp2 99Gly位点Asp Asp、Asp Gly和Gly Gly的基因型频率为 0 .81 7、0 .1 4 7和 0 .0 36 ,与正常对照组相比差异无统计学意义 (χ2 =0 .0 32 ,P =0 .984 ) ;但变应性哮喘患者Gly Gly、Asp Gly基因型血浆总IgE对数值 ( x±s:2 .6 1 5± 0 .6 0 0 1 ,n =36 )与Asp Asp基因型血浆总IgE对数值 ( x±s:2 .2 4 0± 0 .6 894 ,n =1 6 1 )相比较高 ,差异有统计学意义 (P =0 .0 0 2 )。TLR4基因Thr399Ile位点Thr Thr、Thr Ile和Ile Ile的基因型频率为 0 .970、0 .0 2 0和 0 .0 1 0 ,与正常对照组相比差异无统计学意义 (χ2 =0 .6 2 0 ,P =0 .733) ;变应性哮喘患者Ile Ile、Thr Ile基因型血浆总IgE对数值 ( x±s:2 .4 1 7± 0 .4 4 2 3,n =6 )与Thr Thr基因型血浆总IgE对数值 ( x±s:2 .30 5± 0 .6 94 9,n =1 91 )相比差异无统计学意义 (P =0 .5 71 )。     

小鼠轮状病毒EW株VP7基因的克隆及其在重组腺病毒中的表达

目的：构建表达小鼠轮状病毒(EDIM)EW株VP7基因的重组腺病毒，以在小鼠模型上研究轮状病毒的免疫保护机制。方法：用RT-PCR方法扩增EDIM VP7全长cDNA并进行基因序列分析，将所得的VP7基因片段插入腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV，获得重组质粒pShuttleCMV-EVP7，将该质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183获得重组腺病毒质粒pAdCMV-EVP7，将该质粒线性化后转染293细胞包装重组腺病毒rvAdEVP7。以rvAdEVP7感染293细胞，并分别应用电子显微镜、PCR、RT-PCR和Western blot等方法观察rvAdEVP7的形态、VP7基因整合、遗传稳定性、VP7基因在细胞内转录及表达等有关生物学特性。结果：获得了小鼠轮状病毒的全长cDNA，重组腺病毒rvAdEVP7具有典型的腺病毒形态，PCR、RT-PCR和Western blot等分子生物学方法分析显示：rvAdEVP7中确有特异性的VP7基因稳定整合；有较好的遗传稳定性；感染293细胞后能有效转录；可表达轮状病毒主要结构蛋白VP7。结论：成功构建含VP7基因的重组腺病毒rvAdEVP7，为进一步研究轮状病毒的免疫保护机制打下了基础。     

变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗对唾液变形链球菌和牙菌斑的影响

目的　了解变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗单独及联合免疫对定菌鼠唾液变链菌和牙面菌斑的影响。方法　 2 8d龄 Wistar大鼠 3 6只 ,随机分为 pc DNA3 - pac组、pc DNA3 - gtf B组、pc DNA3 - pac联合pc DNA 3 - gtf B组、变形链球菌灭活全菌组、pc DNA3空载体组和 PBS液组 ,进行三次双侧颌下腺腺周注射免疫 ,建立定菌鼠模型 ,作诱龋实验 3个月。唾液变链菌计数和菌斑计分。结果　唾液变链菌菌落计数和牙面菌斑计分在 pc D-NA3与 PBS组最高 ,其次为单基因疫苗免疫组 ,联合基因疫苗和灭活全菌细胞免疫组最低 ,各组间有显著性差异 ( P<0 .0 5 )。结论　 pc DNA3 - gtf B和 pc DNA3 - pac具有明显的免疫抑菌作用 ,联合基因疫苗免疫优于单基因疫苗     

聚合酶链反应单链构象多态性检测乳腺癌中P53基因突变

应用聚合酶链反应单链构象多态性方法，对２４例原发性乳腺癌肿瘤组织基因组ＤＮＡ进行了分析，结果表明：其中７例存在Ｐ５３基因的突变，突变频率约为３０％。同时对其中１０例进行Ｓｏｕｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，有２例在ｃｈｒ１７Ｐ上存在等位基因的缺失，而其另一等位基因上均存在基因突变。