药对研究(Ⅷ)——丹参-红花药对

丹参-红花是著名的活血药对,丹参活血化瘀,红花活血通络,二者均为活血要药。丹红注射液是把丹参与红花按科学配方提取精制而成,是二者配伍的典型应用,主要用于治疗脏器供血不足和缺血梗塞性疾病,能够明显缓解心绞痛症状,改善心肌缺血,消退动脉粥样硬化斑块,抗血栓等。该文从功效物质、配伍效应与相关机制、临床应用方面对丹参-红花药对的近期研究进展进行了系统的阐述,以期进一步提升该药对的基础研究与应用水平。     

A combined extract of Cinnamomi Ramulus, Anemarrhenae Rhizoma and Alpiniae Officinari Rhizoma suppresses production of nitric oxide by inhibiting NF-kappaB activation in RAW 264.7 cells

An herbal mixture prepared with Cinnamomi Ramulus, Anemarrhenae Rhizoma and Alpiniae Officinari Rhizoma (CAA) is used in oriental medicine for treating several ailments. The purpose of this study was to determine the mechanisms by which CAA elicits an antiinflammatory effect on nitric oxide (NO) production in the mouse macrophage cell line RAW 264.7 cells. The results indicated that lipopolysaccharide (LPS)-induced NO production was inhibited by CAA in a dose-dependent manner. Western blotting and RT-PCR analysis demonstrated that CAA decreased LPS-induced inducible nitric oxide synthase (iNOS) protein and gene expression in RAW 264.7 cells. Furthermore, CAA inhibited the LPS-induced DNA binding activity of nuclear factor-kappa B (NF-kappaB) and this effect was mediated through inhibiting the degradation of inhibitory factor-kappaBalpha (IkappaBalpha). Therefore, the results demonstrate that CAA inhibits LPS-induced production of NO and expression of iNOS by blocking NF-kappaB activation. CAA might be a potential therapeutic candidate for treating inflammatory diseases such as arthritis.     

星点设计-效应面法优化灯盏花素胃漂浮片的处方

目的：优选羌活-独活药对的合提工艺。方法：在单因素试验基础上,以总香豆素、蛇床子素和异欧前胡素提取量的综合评分为指标,通过正交试验考察乙醇体积分数、提取次数、料液比、提取时间对羌活-独活混合提取工艺的影响。采用UV测定总香豆素含量,检测波长315 nm;利用HPLC测定蛇床子素和异欧前胡素含量,流动相乙腈-水（45：55）,检测波长316 nm。结果：乙醇体积分数对合提工艺具有显著性影响,最佳提取工艺为加10倍量75%乙醇提取2次,每次1 h;总香豆素、蛇床子素、异欧前胡素提取量分别为470,24.46,9.73 mg·g^-1。结论：优选的提取工艺稳定可行,为该药对的临床复方制剂开发提供参考。     

神曲制备过程中配料比考察

目的：考察不同溶剂和提取方式对酸碱配伍药对中有效成分提取率的影响。方法：选择黄连-甘草药对为研究对象,以水和75%乙醇为提取溶剂,提取方式包括混合或单独煎煮与回流,考察不同溶剂和提取方式对黄连-甘草药对中有效成分提取率的影响。采用RP-HPLC测定甘草酸及甘草苷、盐酸小檗碱含量,流动相分别为乙腈（A）-0.05%磷酸溶液（B）梯度洗脱（0~8 min,19%A;8~35 min,19%~50%A;35~36 min,50%~100%A;36~40 min,100%~19%A）和乙腈-0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液（50：50）,检测波长依次为237,345 nm。结果：以盐酸小檗碱为指标,提取率排序为混合乙醇回流（100.0%）>单独乙醇回流（98.2%）>单独水煎（80.3%）>混合水煎（54.6%）;以甘草酸为指标,提取率排序为混合乙醇回流（100.7%）>单独水煎（99.8%）>单独乙醇回流（97.8%）>混合水煎（69.0%）;以甘草苷为指标,提取率排序为混合乙醇回流（98.5%）>单独乙醇回流（93.6%）>单独水煎（91.3%）>混合水煎（66.9%）。混合醇提液减压回收乙醇会产生大量沉淀,经水洗涤后,小檗碱、甘草酸、甘草苷转移率均>88%。结论：溶剂和提取方式对黄连-甘草药对中有效成分提取率影响较大,提示含酸碱药对的方剂在临床汤剂应用中更适合分开提取,而工业生产中以乙醇提取为最佳。     

知母水、醇提取液的急性毒性实验研究

[目的]观察知母水、醇提取液的急性毒性反应。[方法]选择昆明种小鼠为受试对象,采用急性经口毒性实验测定知母水、醇提取液的的最大耐受量。[结果]知母水提液的小鼠经口最大耐受量为35.0g/kg。知母80%乙醇提取液的小鼠经口最大耐受量为37.5 g/kg。[结论]知母水、醇提取液的毒性较低,临床给药安全可靠。     

黄连生物碱对金黄地鼠血脂代谢及低密度脂蛋白受体基因表达的影响

研究黄连生物碱对低密度脂蛋白受体（LDLR）基因表达和各项降脂指标的影响。通过实时荧光定量PCR检测给药后HepG2细胞和金黄地鼠肝脏中LDLR mRNA 的表达量,同时检测给药前后血清总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）,高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）含量。结果显示,给药后,与模型组相比,各药物组都有降血脂作用,其中黄连碱、巴马汀和药根碱能降低金黄地鼠血清中TC,TG和LDL-c水平（P<0.05,P<0.01）,升高HDL-c（P<0.01）,增加HepG2细胞和金黄地鼠肝脏中LDLR mRNA的表达量。表明黄连生物碱具有调节金黄地鼠血脂代谢的作用,且黄连碱的降脂效果最好。     

天钩降压胶囊中天麻苷在大鼠体内药动学研究

研究天钩降压胶囊复方配伍及不同剂量对大鼠体内天麻苷药动学的影响。大鼠分别灌胃给予低、中、高剂量天钩降压胶囊(剂量分别相当于天麻苷8.410,16.82,33.64 mg·kg-1)及天麻提取物(剂量相当于天麻苷16.82 mg·kg-1),于不同时间点采集血浆。血浆样品经乙腈处理,HPLC测定天麻苷含量。平均血药浓度-时间数据用3P97药动学程序拟合,组间药动学参数用SPSS 16.0分析。结果显示,天麻苷口服给药在大鼠体内符合一室模型,天钩降压胶囊的Cmax,AUC与给药剂量成正比关系,t1/2Ka与剂量无关,表明天麻苷口服体内转运符合一级速度过程;与天麻提取物比较,等剂量天钩降压胶囊的Cmax,Ke显著减小,t1/2Ke,V/Fc显著增加,表明复方配伍能延缓天麻苷吸收,延长体内滞留时间,且有促进天麻苷体内分布的趋势,但对生物利用度无显著影响。     

丹参水提液的纳滤浓缩工艺考察

目的:摸索丹参水提液的纳滤浓缩工艺。方法:选择热不稳定成分丹酚酸B为检测对象,采用HPLC测定丹酚酸B保留率,检测波长281 nm,流动相乙腈(A)和1%冰乙酸(B)梯度洗脱(0~20 min,5%~15%A;20~50 min,15%~40%A)。以丹酚酸B保留率和膜通量为指标,通过单因素试验分析截留相对分子质量、操作压力、吸附特征等因素对丹参水提液浓缩工艺的影响。结果:丹酚酸B的保留率随着膜相对分子质量减小而增大,受压力、浓缩倍数的影响较小;膜通量与压力、截留相对分子质量呈正相关,随着浓缩倍数的增大而减小;孔径300 Da纳滤膜对丹酚酸B的保留率99.5%,膜通量12 L·m-2·h-1,对丹参药材中其他成分无明显影响,且浓缩效率高。结论:纳滤浓缩适用于含热不稳定类成分的药液浓缩,效率高且成分损失少。     

正交试验优选清半夏的炮制工艺

目的:优选清半夏的炮制工艺。方法:以浸出物、总酸及白矾质量分数为指标,通过正交试验考察药材-白矾的质量比、浸泡时间、水煮时间对清半夏炮制工艺的影响。结果:优选的炮制工艺为浸泡2 h,水煮6 h,药材-白矾质量比10∶1;总酸、浸出物、白矾平均质量分数依次为0.83%,10.5%,6.4%。结论:总酸、浸出物及白矾含量均符合2010年版《中国药典》对清半夏的要求,清半夏粉末中草酸钙针晶明显减少,说明通过水煮炮制可降低半夏的毒性和刺激性,与传统工艺相比缩短了炮制时间。     

HPLC法同时测定大黄、厚朴药对提取物中7个成分的含量

目的:建立同时测定大黄、厚朴药对提取物中7个成分(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、和厚朴酚、厚朴酚)含量的HPLC方法。方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以甲醇(A)-0.1%磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱,0¹5 min,82%A→85%A;1515 min,82%A→85%A;15³5 min,85%A→90%A;3535 min,85%A→90%A;35⁴0 min,90%A→82%A;4040 min,90%A→82%A;40⁴2 min,82%A→82%A,流速1.0 mL·min-1,检测波长为254 nm,柱温30℃。结果:大黄、厚朴药对提取物中7个成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、和厚朴酚、厚朴酚进样量分别在0.0279042 min,82%A→82%A,流速1.0 mL·min-1,检测波长为254 nm,柱温30℃。结果:大黄、厚朴药对提取物中7个成分芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、和厚朴酚、厚朴酚进样量分别在0.02790⁰.2790μg(r=0.9992),0.061760.2790μg(r=0.9992),0.06176⁰.6176μg(r=0.9991),0.050400.6176μg(r=0.9991),0.05040⁰.5040μg(r=0.9997),0.19950.5040μg(r=0.9997),0.1995¹.995μg(r=0.9992),0.041281.995μg(r=0.9992),0.04128⁰.4128μg(r=0.9993),0.46440.4128μg(r=0.9993),0.4644⁴.644μg(r=0.9994),0.64324.644μg(r=0.9994),0.6432⁶.432μg(r=0.9991)范围内与峰面积呈良好线性关系;平均回收率(n=5)分别为98.5%、99.4%、99.2%、98.5%、99.5%、99.0%、98.4%。结论:该方法准确可靠、重复性好,可用于大黄、厚朴药对提取物的质量控制。