Sex differences in circadian timing systems: Implications for disease

Virtually every eukaryotic cell has an endogenous circadian clock and a biological sex. These cell-based clocks have been conceptualized as oscillators whose phase can be reset by internal signals such as hormones, and external cues such as light. The present review highlights the inter-relationship between circadian clocks and sex differences. In mammals, the suprachiasmatic nucleus (SCN) serves as a master clock synchronizing the phase of clocks throughout the body. Gonadal steroid receptors are expressed in almost every site that receives direct SCN input. Here we review sex differences in the circadian timing system in the hypothalamic–pituitary–gonadal axis (HPG), the hypothalamic–adrenal–pituitary (HPA) axis, and sleep–arousal systems. We also point to ways in which disruption of circadian rhythms within these systems differs in the sexes and is associated with dysfunction and disease. Understanding sex differentiated circadian timing systems can lead to improved treatment strategies for these conditions.     

内质网应激在大鼠酒精性肝病肝细胞凋亡中的作用

目的 探讨内质网应激在大鼠酒精性肝病肝细胞凋亡中的作用.方法 采用酒精灌胃的方法建立大鼠酒精性肝病模型,分别于4、8、12、16周随机处死动物,留取血清和肝组织,同时设置正常对照组.检测大鼠血清总同型半胱氨酸(tHcy)浓度,比色法测定大鼠肝组织胱硫醚β合成酶(CBS)活性,逆转录-聚合酶联反应和免疫组织化学法分别检测肝组织葡萄糖调节蛋白78 (GRP-78)、需钙蛋白酶2 (calpain-2)和caspase-12前体蛋白(procaspase-12)的mRNA和蛋白质表达情况;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测肝细胞凋亡情况.组间数据比较用完全随机设计的方差分析(SNK法或Tamhane' s法),相关性分析用Pearson直线相关分析法.结果 模型组大鼠16周末出现肝细胞弥漫小泡性脂肪变性、窦周纤维化,汇管区纤维组织增生并有纤维间隔形成.正常对照组及造模4、8、12、16周时,大鼠血清tHcy浓度分别为(5.10±0.56)μmol/L、(6.95±0.17)μ mol/L、(8.36±0.17)μmol/L、(9.45±0.28)μmol/L和(9.85±0.12) μmol/L,肝组织匀浆CBS浓度分别为(613.92±17.09) U/g、(573.53±24.96) U/g、(503.42±44.67) U/g、(438.02±14.67) U/g和(390.45±31.17) U/g,随着造模时间的延长,tHcy浓度逐渐升高(F=338.60,P＜0.01),CBS活性逐渐降低(F=91.90,P＜0.01),且二者呈负相关关系(r=-0.632,P＜0.01).随着造模时间的延长,GRP-78、calpain-2和caspase-12的mRNA相对表达量逐渐升高(F值分别为216.19、128.91和95.印,P值均＜0.01),且GRP-78 mRNA的表达与tHcy浓度呈正相关(r=0.617,P＜0.01); GRP-78和calpain-2的蛋白质表达量逐渐增多,procaspace-12的蛋白质表达量逐渐减少.正常对照组及造模4、8、12、16周的大鼠肝细胞凋亡指数分别为2.17％+1.06％、29.59％±2.62％、加.91％+4.70％、57.39％±6.13％和65.71％±9.78％,呈上升趋势(F=188.30,P＜0.01).结论肝细胞凋亡可能与CBS活性降低导致高同型半胱氨酸血症,从而诱发内质网应激,进而激活calpain-2和caspase-12的信号转导通路有关,这可能为酒精性肝病发病的重要机制之一.     

葡萄糖调节蛋白78上调MMP-2和MMP-9促进鼻咽癌细胞CNE1的增殖与侵袭

目的 探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）对鼻咽癌细胞CNE1的增殖与侵袭的作用机制。方法 收集2018年6月—2019年6月手术切除病灶的56例经病理确诊鼻咽癌患者的肿瘤组织作为鼻咽癌组织的研究对象,男40例,女16例;均为初次确诊鼻咽癌,并且尚未经过放/化疗干预。另同期选取进行治疗的50例慢性鼻咽炎组织作为比对,男38例,女12例。用免疫组化分别检测鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎组织中GRP78的表达。CNE1细胞实验分为对照组（CNE1鼻咽癌细胞常规培养,不进行外界干预）、NC组（CNE1鼻咽癌细胞转染LvGFP-Puro-GRP78-NC后,常规培养）、Sh-GRP78组（CNE1鼻咽癌细胞转染LvGFP-Puro-GRP78后,常规培养）,转染完成48 h后,可在荧光显微镜下观察到各组细胞内的绿色荧光蛋白（GFP）,PCR检测各组细胞中GRP78的mRNA的表达。Brdu标记检测各组细胞的增殖能力,Transwell小室检测各组细胞的侵袭能力,小管形成实验检测各组细胞的血管形成能力;双荧光素酶实验分析GRP78和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、MMP-9的作用,Western blot检测各组细胞GRP78、MMP-2和MMP-9表达水平。结果 与慢性鼻咽炎组织相比,GRP78在鼻咽癌组织中的表达明显升高,Sh-GRP78组CNE1细胞增殖、侵袭和迁移能力、血管形成能力明显增强,差异均具有统计意义（P<0.05）。双荧光素酶实验结果显示MMP-2和MMP-9是GRP78作用的靶基因。与对照组相比,Sh-GRP78组细胞中GRP78、MMP-2和MMP-9的表达水平明显上升,差异均具有统计意义（P<0.05）。结论 GRP78在鼻咽癌组织中存在高表达的现象,并且GRP78靶向调控MMP-2和MMP-9的表达增强CNE1细胞的增殖、侵袭与血管新生的能力。     

GRP78蛋白在胰腺癌中的表达及对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响研究

目的：检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在胰腺癌组织中的表达,探讨GRP78蛋白与胰腺癌发生、发展的相关关系.观察GRP78基因表达下调对胰腺癌细胞凋亡和增殖的影响,为以GRP78基因为靶基因治疗胰腺癌提供理论依据.方法：利用免疫组织化学技术检测93例胰腺癌组织及58例胰腺良性病变组织中GRP78蛋白的表达情况;Sh GRP78和Sh Neg克隆人真核表达载体,经脂质体转染胰腺癌细胞系BXPC-3,G418筛选阳性克隆,半定量RT-PCR检测GRP78 mRNA表达,Western blot检测GRP78蛋白表达.采用流式细胞仪、磺酰罗丹明B（SRB）染色法检测各组细胞增殖和凋亡情况.结果：GRP78蛋白在正常胰腺组织表达率为10.8％,在胰腺良性病变组织的表达率为41.4％,在胰腺癌组织中阳性率为88.2％,3组之间差异显著.建立了2组稳定转染细胞系：BXPC-3 sh GRP78和BXPC-3 sh Neg,BXPC-3 sh GRP78细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达显著下调.GRP78基因表达抑制后BXPC-3细胞的增殖明显受到抑制,凋亡显著增加.结论：GRP78蛋白在正常胰腺组织,胰腺良性病变组织及胰腺癌组织中的表达水平依次升高;GRP78基因高表达是细胞组织恶性转化的重要标志物.     

乏氧和低糖条件下低表达ESE3促进胰腺癌细胞的侵袭

目的 观察乏氧和低糖条件下胰腺癌细胞中上皮特异性ETS转录因子3（ESE3）表达的变化及其对胰腺癌细胞侵袭能力的影响。方法 收集在天津医科大学肿瘤医院2005年1月—2014年10月期间行根治性手术治疗的99例胰腺癌患者的胰腺癌组织和16例邻近正常胰腺组织标本。采用免疫组化法分析癌组织和邻近正常胰腺组织中ESE3的表达水平,探究其表达水平与胰腺癌患者生存预后间的关系;进一步在TCGA数据库中分析ESE3的mRNA 表达水平与147例胰腺癌患者的临床病理学特征间的关系;构建胰腺癌细胞PANC-1过表达ESE3稳定转染细胞系并验证;Transwell法探究过表达ESE3的胰腺癌细胞侵袭能力的变化;利用蛋白质免疫印迹法检测乏氧和低糖条件下胰腺癌细胞中乏氧诱导因子1α（HIF-1α）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和ESE3蛋白表达水平的变化。结果 胰腺癌组织中ESE3的表达量明显低于正常胰腺组织,ESE3的低表达与患者总生存期（OS）和无复发生存期（DFS）缩短密切相关（均P＜0.05）。TCGA数据库分析表明ESE3表达高低与肿瘤转移相关（P＜0.05）;在乏氧和低糖条件下胰腺癌细胞侵袭能力增强,ESE3的表达降低,HIF-1α与GRP78的表达增加（P＜0.05）。结论 在乏氧和低糖条件下,胰腺癌细胞中ESE3的表达降低,促进胰腺癌细胞的侵袭。     

危重症患儿血清上皮来源中性粒细胞活化肽-78的变化及意义

目的 探讨危重症患儿血清上皮来源中性粒细胞活化肽-78(ENA-78)的变化,及其与儿童危重症病情严重程度和预后的关系.方法 采用前瞻性病例对照研究,选取2013年9月至11月上海交通大学附属儿童医院重症医学科收治的42例危重症患儿(危重症组),入院后24h内(急性期)和第7天(恢复期)留取血标本;选取本院同期42例儿童体检残血样本作为对照.采用儿童危重病例评分标准(PCIS)和儿童死亡危险因素评分(PRISMⅢ)评估病情的危重程度;双抗体夹心酶联免疫法测定血清中ENA-78水平.结果 1.对照组血液ENA-78水平为(0.44 ±0.28) ng/L;危重症组急性期ENA-78为(2.85±0.89) ng/L,恢复期为(1.00±0.64) ng/L,危重症组与对照组、急性期与恢复期ENA-78水平比较差异均有统计学意义(P均=0.000).2.ENA-78水平与PCIS评分呈负相关(r=-0.724,P=0.000);PRISMⅢ≥10分组血清ENA-78水平明显高于PRISMⅢ＜10分组(P =0.000).危重症患儿中,存活组ENA-78水平与死亡组比较差异有统计学意义(P=0.000).3.严重感染患儿血清ENA-78水平与非感染性疾病组比较差异有统计学意义(P =0.000).4.随着器官功能障碍损伤范围扩大ENA-78水平相应上升,差异有统计学意义(P =0.000).结论 危重症患儿存在血液ENA-78水平的变化,测定血液中ENA-78水平,能对评估疾病严重程度及判断预后提供参考.     

肿瘤相关成纤维细胞对于免疫细胞的调节作用研究现状

肿瘤相关成纤维细胞（cancer-associated fibroblasts, CAFs）和肿瘤浸润性免疫细胞是肿瘤微环境（tumor microenvironment, TME）中重要的组成成分。二者在肿瘤微环境中相互通信，在肿瘤的发生和发展中发挥着重要作用。CAFs具有很大的异质性，不同的CAFs亚群存在着不同的功能。同时其又可以通过分泌多种细胞因子、趋化因子等方式实现对肿瘤浸润性免疫细胞的调节，从而进一步影响肿瘤的发生、发展、侵袭、转移等生物学行为。本文对国内外近年来有关CAFs在TME中对浸润性免疫细胞调节作用的研究现状作一综述。     

痿证中药方抑制线粒体内质网应激减轻大鼠脊髓损伤

目的 研究痿证中药方对脊髓损伤(SCI)大鼠模型中氧化应激反应及内质网应激相关蛋白表达的调节作用.方法 SPF级SD大鼠30只随机分为为假手术组、脊髓损伤模型组及痿证中药方组,痿证中药方组予以痿证中药方干预.术后第3～4天、1周、2周、3周、4周进行下肢运动功能评分,干预后30 d,取脊髓组织并采用HE染色法检测脊髄损...     

葡萄糖调节蛋白78对肝癌细胞放射敏感性的调控作用及其机制

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对肝癌细胞放射敏感性的影响,初步阐明其分子机制.方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测肝癌SMMC-7721、HepG2、PLC、Huh7和QGY-7703细胞中GRP78 mRNA和蛋白表达水平,筛选GRP78高表达和低表达的...