CA50时间分辨荧光免疫分析法的建立及临床应用

目的建立糖类抗原（CA）50时间分辨荧光免疫分析法（CA50-TRFIA）并用于临床。方法以抗CA50单克隆抗体包被微孔板，双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸（DTFA）络合Eu^3＋及标记CA50单克隆抗体，采用夹心法建立CA50-TRFIA，发光增强系统为以8-二酮体为主的增强液。比较20例消化道恶性肿瘤患者、47例消化道良性病变患者和213名健康对照者的血清CA50值。数据采用Logit—Log函数和四参数Logistic函数程序处理。结果方法的批内和批间CV分别为2．6％和3．5％，平均回收率为108．61％，灵敏度为1．08×10^3U／L，可测范围为（1．08～140）×10^3U／L。其测定结果与进口的IRMA药盒测定值比较，两者高度相关（r=0．904）。对照组213例CA50测定结果为（2．10±4．96）×10^3U／L；20例消化道恶性肿瘤CA50测定结果为（26．58±52．82）×10^3U／L，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；47例消化道良性病变患者CA50测定结果为（7．25±28．67）×10^3U／L，与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论该法简便、快速、实用，精密度、重复性、线性相关性较好。     

Development of a Polarization Fluoroimmunoassay for the Herbicide Metsulfuron-Methyl

A polarization fluoroimmunoassay (PFIA) based on previously raised rabbit polyclonal antibodies was developed for detection and quantification of the sulfonylurea herbicide metsulfuron-methyl (MSM) in surface water samples. A 'restricted' hapten, consisting of only phenylsulfonamide moiety of MSM molecule was used to synthesize a fluorescein-labelled derivative of MSM (tracer). The limited assay cross-reactivity was observed towards most of sulfonylurea herbicides, with exception of primisulfuron-methyl and chlorimuron-ethyl. The optimized MSM PFIA had a dynamic range from 30 to 1000 w g r -1 with an IC 50 value of 123 w g r -1 and a lower detection limit of 5 w g r -1 . Intra- and inter-assay precision over the of MSM calibration curve dynamic range were 0.9 and 7.1%, respectively. Influence of several organic solvents on MSM PFIA performance was investigated, and the assay was found to tolerate up to 10% v/v of methanol, DMSO and acetone. Application of MSM PFIA technique to the analysis of surface water samples taken from lakes and rivers in Bavaria, and spiked with MSM at concentration of 50 w g r -1 , gave mean MSM recoveries of 108.6-110.8%.     

NS－1细胞载体的抗核抗体检测

本文应用小鼠（ＢＡＢ／Ｃ）骨髓瘤细胞（ＮＳ－１）细胞为抗原，采用间接免疫荧光技术检测了２５３例血清标本中的抗核抗体（ＡＮＡ），并与鼠肝细胞为载体法进行了比较。结果此法具有抗原处理易于控制，结果观察准确、灵敏、清楚等优点。     

乙型肝炎病毒感染者血清肝特异性自身抗体的检测及临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清肝特异性自身抗体的检出率及临床意义。方法采用间接免疫荧光法检测186例慢性HBV感染者血清肝特异性自身抗体,回顾性分析AST、ALT、ALP和GGT等生化指标与自身抗体检出率的相关性。结果在186例慢性HBV感染者中检出自身抗体阳性66例（35.5%）;在60例HBV携带者、74例慢性肝炎和52例肝硬化患者肝特异性抗核抗体（ANA）检出率分别为25.0%、24.3%和21.2%,明显高于30例健康对照人群（6.6%,P＜0.05）;自身抗体阳性者以低滴度为主,主要以抗核抗体（ANA）和类风湿因子（RF）阳性为主,免疫荧光模式以“均质型”和“颗粒型”为主;66例自身抗体阳性的HBV感染者血清ALT、AST、ALP和GGT分别为268.4±213.6u/L、241.5±21.3.0u/L、287.2±175.0u/L和168.9±54.7u/L,均显著高于120例自身抗体阴性者（分别为130.8±29.0u/L、118.2±27.3u/L、142.0±63.5u/L和36.5±17.2 u/L,P〈0.01）。结论慢性HBV感染可诱导自身免疫反应而有可能产生多种自身抗体,后者的检出率与肝功能指标显著相关,可能是感染HBV后肝组织损伤的重要因素。     

肌肉特异性受体酪氨酸激酶抗体阳性重症肌无力

目的 探讨不同血清抗体重症肌无力(MG)的临床特征.方法 用荧光免疫沉淀法(FIPA)和荧光免疫细胞染色法(CBA)检测119例MG患者血清乙酰胆碱受体抗体(AChR-Ab)和肌肉特异性受体酪氨酸激酶抗体(MuSK-Ab)水平.比较AChR-Ab阳性、MuSK-Ab阳性、血清抗体阴性MG的临床特征.结果 纳入119例患者中,90例AChR-Ab阳性(75.6%),29例阴性:其中5例MuSK-Ab阳性(17.2%),24例血清抗体阴性(82.8%).AChR-Ab阳性、MuSK-Ab阳性和血清抗体阴性MG 3组比较,男女比例和平均发病年龄差异均无统计学意义.3例MuSK-Ab阳性的患者主要表现为延髓肌受累;79.2%(19/24)的血清抗体阴性MG患者表现为美国MG协会(MGFA)Ⅰ型;2例MuSK-Ab阳性的患者MGFA≥Ⅲ型;MuSK-Ab滴度水平与患者病情严重程度相关(r=0.941,P=0.014);MuSK-Ab阳性的患者均未发现有胸腺的异常.结论 MuSK-Ab仅出现在AChR-Ab阴性患者的血清中.MuSK-Ab阳性的患者主要表现为延髓肌受累,病情较重且不伴有胸腺的病变.MuSK-Ab阳性的MG可能是不同于血清AChR-Ab阳性的MG的又一亚型.     

糖尿病足溃疡患者皮肤Ⅰ型胶原蛋白晚期糖化终末产物蓄积研究

背景　蓄积在皮肤Ⅰ型胶原蛋白上的晚期糖化终末产物（AGEs）是长期糖化和氧化应激“代谢记忆”的载体,对判断糖尿病代谢控制及预测糖尿病并发症具有重要作用。利用皮肤AGEs内在荧光特性研发的AGE ReaderTM无创获得的皮肤自体荧光（SAF）值可反映人体组织蓄积的各种AGEs总含量。而对于糖尿病足溃疡患者皮肤Ⅰ型胶原蛋白AGEs蓄积程度与反映皮肤组织中AGEs总含量的SAF值两者之间的相关性仍有待研究。目的　探讨糖尿病足溃疡患者皮肤Ⅰ型胶原蛋白AGEs蓄积程度及其与SAF值的相关性。方法　选取2014年6-8月上海中医药大学附属上海市中西医结合医院脉管科住院治疗的糖尿病足溃疡患者11例为糖尿病足溃疡组,同期上海交通大学医学院附属瑞金医院烧伤科住院治疗的小面积烧伤的非糖尿病患者8例为非糖尿病组。标本取材于患者下肢创口边缘或供皮区的皮肤全层组织,光镜下观察两组患者皮肤组织形态学特征,免疫荧光双标法分析皮肤Ⅰ型胶原蛋白AGEs蓄积程度,采用AGE ReaderTM检测患者前臂皮肤获得SAF值。结果　光镜下观察非糖尿病组患者皮肤结构清晰完整,糖尿病足溃疡组患者皮肤组织萎缩变薄,表皮层细胞层次欠清晰,真皮层胶原纤维萎缩、纤细,排列稀疏、松散杂乱,部分胶原纤维断裂、变性,炎性细胞浸润呈弥散分布,数量明显增多。糖尿病足溃疡组患者皮肤组织免疫荧光共表达（橙黄色）光密度总和高于非糖尿病组患者〔（10 900±2 973）与（6 910±1 048）,t=4.06,P<0.05〕。糖尿病足溃疡组患者SAF值高于非糖尿病组患者〔（2.68±0.22）AU与（2.18±0.27）AU,t=4.47,P<0.05〕。相关性分析显示,糖尿病足溃疡组患者皮肤Ⅰ型胶原蛋白AGEs蓄积程度与SAF呈正相关（r=0.65,P<0.05）;非糖尿病组患者皮肤Ⅰ型胶原蛋白AGEs蓄积程度与SAF呈正相关（r=0.76,P<0.05）。结论　糖尿病足溃疡患者皮肤Ⅰ型胶原蛋白AGEs蓄积明显增加,SAF值明显升高,同时皮肤Ⅰ型胶原蛋白AGEs蓄积程度与SAF值呈正相关,无创检测的SAF值或许可作为评估局部皮肤AGEs蓄积程度的简单方法。     

骨髓基质干细胞趋瘤性及神经分化潜能

目的:观察骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)向脑胶质瘤的趋向性及在荷瘤大鼠脑内的分化,初步探讨其机制。方法:培养BMSCs后,在体外应用显微镜直接观察及Transwell试验检测BMSCs向胶质瘤细胞及血管内皮细胞生长因子(VEGF)、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)、血小板源性生长因子(PDGF)等的迁移特性,免疫荧光方法检测其在颅内向脑胶质瘤迁移的情况。在体外诱导条件下,观察BMSCs的分化;BMSCs移植到脑荷瘤大鼠脑内15 d后,免疫荧光方法检测其在体内的分化。结果:骨髓基质干细胞在体外表现出明显的向胶质瘤细胞及PDGF、EGF的迁移特性,在体内表现了明显的向脑内胶质瘤迁移的特性,并可迁移到肿瘤卫星灶周围。在体外诱导条件下BMSCs可分化为神经前体细胞(8.4%±3.5%)、神经元(53.7%±7.4%)及胶质细胞(22.3%±5.2%);在移植到荷瘤鼠脑内后,也可分化为神经前体细胞(8.3%±3.6%)、神经元(15.7%±4.3%)及胶质细胞(32.5%±7.2%),两者向神经元分化的比例存在差异(P<0.05),向神经前体细胞及胶质细胞的分化比例相似(P>0.05)。结论:骨髓基质干细胞有明显的胶质瘤趋瘤性,其向神经细胞分化的方向可能与其局部微环境有关。     

淫羊藿素诱导小鼠胚胎干细胞体外定向分化为神经细胞

目的:采用淫羊藿素(icaritin,ICT)改变小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)体外培养微环境,论证ICT提高ES细胞体外定向分化为神经细胞的效应。方法:采用拟胚体培养法,评价ICT对ES细胞体外定向分化为神经细胞的诱导作用;并利用RT-PCR法和免疫荧光法鉴定神经细胞特异基因和蛋白表达谱。结果:ICT在10-7mol/L浓度时,对ES细胞定向分化为神经细胞表型呈现最佳诱导效应,在分化d8 8时,分化率高达80%(P<0.001),并呈良好的量效和时效关系。分化神经表型者表达神经元特异性微管蛋白(β-tubulin Ⅲ)基因和神经胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)基因,同时伴有神经前体细胞特异性标志蛋白(nestin)及β-tubulin Ⅲ和GFAP特异性蛋白阳性表达。结论:应用拟胚体培养微环境调控法,ICT可诱导小鼠ES细胞定向分化为神经细胞,并与神经发育依赖性特异基因和蛋白表达呈正相关。     

泰莱-Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析仪的应用评价

目的对广州丰华公司泰莱（TALENT-Ⅱ型）时间分辨荧光免疫分析仪定量实验方法及其主要性能指标进行评价。方法通过测定人血清中的甲胎蛋白（hAFP）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）含量，应用美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）文件及《临床实验室质量管理文件汇编》文件对TALENT-Ⅱ分析仪的偏差和不精密度进行评价。结果该系统与罗氏2010电化学发光检测系统的相关系数r〉0．99；hAFP和HCG高、中、低浓度的绝对偏差均在相应的允许偏差范围内；hAFP和HCG高、中浓度的总不精密度均小于10％。结论TALENT-Ⅱ型时间分辨荧光免疫分析系统与罗氏2010电化学发光检测系统有较好的相关性，同时具有较好的稳定性。     

异硫氰酸荧光素标记人血清白蛋白

目的：用异硫氰酸荧光素（FTTC）对人血清白（HSA）进行荧光标记。方法：采用直接标记法,并考查不同料比时的荧光素分子与蛋白分子的结合情况,荧光标记物（FTTC－HSA）的荧光光谱及荧光寿命情况,结果：FTTC－HSA的激发波长为500nm,荧光波长为530nm;其固态和液态低温保存时荧光寿命分别为一年和37天。