全文获取类型
收费全文 | 31851篇 |
免费 | 1436篇 |
国内免费 | 2333篇 |
专业分类
耳鼻咽喉 | 185篇 |
儿科学 | 293篇 |
妇产科学 | 379篇 |
基础医学 | 4323篇 |
口腔科学 | 513篇 |
临床医学 | 3016篇 |
内科学 | 4031篇 |
皮肤病学 | 339篇 |
神经病学 | 711篇 |
特种医学 | 791篇 |
外国民族医学 | 62篇 |
外科学 | 2225篇 |
综合类 | 10030篇 |
预防医学 | 1596篇 |
眼科学 | 354篇 |
药学 | 2629篇 |
27篇 | |
中国医学 | 1481篇 |
肿瘤学 | 2635篇 |
出版年
2024年 | 153篇 |
2023年 | 489篇 |
2022年 | 615篇 |
2021年 | 769篇 |
2020年 | 520篇 |
2019年 | 531篇 |
2018年 | 280篇 |
2017年 | 476篇 |
2016年 | 577篇 |
2015年 | 562篇 |
2014年 | 983篇 |
2013年 | 1083篇 |
2012年 | 1650篇 |
2011年 | 1848篇 |
2010年 | 1549篇 |
2009年 | 1467篇 |
2008年 | 4215篇 |
2007年 | 2123篇 |
2006年 | 1710篇 |
2005年 | 3407篇 |
2004年 | 2890篇 |
2003年 | 2259篇 |
2002年 | 1527篇 |
2001年 | 1057篇 |
2000年 | 804篇 |
1999年 | 596篇 |
1998年 | 420篇 |
1997年 | 320篇 |
1996年 | 213篇 |
1995年 | 200篇 |
1994年 | 117篇 |
1993年 | 48篇 |
1992年 | 44篇 |
1991年 | 36篇 |
1990年 | 38篇 |
1989年 | 39篇 |
1988年 | 3篇 |
1987年 | 1篇 |
1976年 | 1篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 0 毫秒
101.
目的研究CD54和LFA-1的相互作用在6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制的Jurkat细胞(AS)的黏附性增强中的作用。方法用细胞凝集试验确证AS细胞间黏附的增强,用细胞与细胞间黏附分子-1-人IgG的Fc片段(ICAM-1-Fc)的黏附试验和阻断性抗CD11a抗体的阻断试验研究CD54-LFA-1的作用,用单克隆抗体MEM-148检测As细胞LFA-1亲和力的变化,用单克隆抗体NKI-L16检测AS细胞LFA-1亲合力的变化,用鬼笔环肽染色细胞骨架,用Jurkat-Raji细胞间的作用作模型研究6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对T和B细胞间黏附的影响,用ConA结合试验检测细胞中蛋白质N-糖基化的变化。结果(1)AS细胞间的黏附性增强主要与CD54及CD11a表达的增强相关,也与LFA-1亲和力的增高相关;(2)AS细胞的细胞骨架发生重排;(3)As细胞与Raji细胞间的黏附也增强;(4)ConA与AS细胞的结合增强。结论CD54和LFA-1的相互作用在AS Jurkat T细胞的黏附性增强中起重要作用。细胞骨架重排也可能起作用。As细胞的蛋白质发生了N-糖基化修饰。 相似文献
102.
将人工合成的恶性疟原虫杂合74肽抗原基因克隆到表达载体pWR450-1中,获得了重组质粒pWRC,将其先转化到减毒伤寒沙门氏菌LB5000修饰后,再转化到SL3261,得到重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261(pWRC)。pWRC在SL3261中以β-半乳糖苷酶-杂合多肽抗原C融合蛋白(GZ-C)形式表达,表达量约占菌体蛋白总量的11.3%.Westernblot及免疫双扩散显示GZ-C可与兔抗GZ-C抗原的免疫血清发生特异反应。GZ-C识别兔抗GZ-C及鼠抗恶性疟原虫抗血清的ELISA滴度分别为1:3200及1:5120。初步结果表明SL3261(pWRC)表达的GZ-C具有抗原性。连续传代SL3261(pWRC)未见质粒pWRC丢失及对宿主有明显的毒性。 相似文献
103.
目的:鉴定并研究半夏AP2/ERF转录因子的功能,为推进半夏品种的遗传改良提供理论依据。方法:该文基于半夏三代转录组数据鉴定了半夏中AP2/ERF家族成员,并对其进行系统的生物信息学分析,同时利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测半夏AP2/ERF在不同组织及不同胁迫条件下的表达情况。结果:通过转录组数据共筛选出8个全长AP2/ERF转录因子家族成员,归为AP2、ERF和DREB 3个亚家族;半夏AP2/ERF的氨基酸数目为251~512个,等电点为5.29~11.72,不稳定指数为45.90~82.41,且主要定位于细胞核中;半夏AP2/ERF基因的结构域和Motifs相对保守。组织特异性表达模式分析显示,半夏AP2/ERF基因在不同组织部位中具有不同的表达模式,且主要在叶中表达。逆境胁迫应答分析表明,PtERF1主要响应NaCl的胁迫诱导;PtERF2和PtERF4在低温和聚乙二醇(PEG)胁迫下表达量均有较大幅度的上调;PtERF3同时响应低温和NaCl两种逆境的诱导;PtERF5同时响应高温、低温、NaCl、PEG胁迫诱导;PtERF7在高温胁迫下表达... 相似文献
104.
目的:探讨慢性乙型肝炎患者肝组织中FasL表达与血清可溶性FasL水平的关系。方法:用免疫组化方法检测60例慢性乙型肝炎患者肝穿组织FasL的表达,同时用酶联免疫吸附试验检测血清可溶性FasL。结果:重度慢性乙型肝炎患者血清中sFasL水平>中度>轻度,各组间差异有显著意义(P<0.01);慢性乙型肝炎患者肝组织FasL表达的程度和血清sFasL水平与肝组织病变的活动性一致。结论:(1)肝组织炎症程度加重,肝组织FasL抗原的表达增强,同时血清中sFasL水平升高;(2)Fas介导的肝细胞凋亡在慢性乙型肝炎的发病机制中起重要作用,抑制肝细胞Fas表达有助于减轻肝细胞损伤程度。 相似文献
105.
目的:以鸭γ-干扰素(DuIFN-γ)基因为目的基因,研究同一启动子调控下,不同拷贝数的目的基因的表达状况。方法:采用基因重组技术构建含DuIFN-γcDNA单拷贝和双拷贝重组质粒并转入真核细胞COS-7中进行表达。DuIFN-γ活性采用Griess试剂检测。结果:双拷贝重组质粒和单拷贝重组质粒50%最大活性稀释度分别为1:320和1:160。双拷贝重组质粒转染上清稀释10240倍后,仍保留DuIFN-γ活性,而单拷贝重组质粒转染上清经1280倍稀释后,即丧失活性。结论:在同一启动子作用下,顺式插入双拷贝目的基因可明显增强目的基因在真核细胞中的表达量。 相似文献
106.
目的:以鸭γ-干扰素(DuIFN-γ)基因为目的基因,研究同一启动子调控下,不同拷贝数的目的基因的表达状况.方法:采用基因重组技术构建含DuIFN-γcDNA单拷贝和双拷贝重组质粒并转入真核细胞COS-7中进行表达.DuIFN-γ活性采用Griess试剂检测.结果:双拷贝重组质粒和单拷贝重组质粒50%最大活性稀释度分别为1:320和1:160.双拷贝重组质粒转染上清稀释10240倍后,仍保留DuIFN-γ活性,而单拷贝重组质粒转染上清经1280倍稀释后,即丧失活性.结论:在同一启动子作用下,顺式插入双拷贝目的基因可明显增强目的基因在真核细胞中的表达量. 相似文献
107.
乙肝基因疫苗系列质粒的构建及其在真核细胞中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 构建一系列乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白的真核细胞表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法 采用常规PCR法扩增S、前S2-S、前S1-前S2-S片断,利用重叠PCR法扩增出前S1-S片断后,分别插入Rc/CMV及pSG5UTPL/Flag载体质粒中,并在其ATG起始密码前加入KOZAK序列后转染SP2/0细胞,Western-Blot杂交检测所表达蛋白,并用核酸自动分析仪分析所插入片断的核酸序列。结果 插入片断的核苷酸序列与相应的大、中、小蛋白和前S1-S蛋白的编码基因一致,Western-Blot杂交检测出了相应的目的蛋白。结论 获得了8个能高效表达乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白和前S1-S蛋白的真核细胞表达质粒。 相似文献
108.
尖锐湿疣Fas、bcl—2、Ki—67的表达与细胞凋亡的关系 总被引:13,自引:1,他引:12
OBJECTIVE: This study inquired into the significance and relationship of apoptosis to the regulation and proliferation of condyloma acuminatum(CA). METHODS: Apoptotic cells were detected in situ by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated-dUTP nick end labeling (TUNEL). The detection of Fas, bcl-2 and Ki-67 expression was performed using immunohistochemical staining in 28 specimens of CA. RESULTS: Apoptotic cells were found in 24 cases (85.7%) in keratinocytes. All of the in 28 cases(100%) had Fas and Ki-67 positive expressions, but only 8 cases (28.6%) had bcl-2 mild or moderate expression. The disease severity (serious, moderate and mild) groups did not significantly differ in apoptotic index (AI), Fas, bcl-2 and Ki-67 positive expression (P > 0.05). There was positive correlation between AI and Fas(r = 0.866, P = 0.000). bcl-2 and Ki-67 were negatively correlated with AI (r = -0.416, P = 0.018; r = -0.475, P = 0.006). CONCLUSION: It is suggested that apoptosis in keratinocytes may play an important role in inhibiting the proliferation of virus, that Fas may be an upregulative factor and bcl-2 may be an inhibition factor to apoptosis, and that excessive Ki-67 expression may be associated with the acceleration of cell cycle. 相似文献
109.
《国际生物医学工程杂志》2023,(3):220-220
在统计学方法的表达中,当P<0.05(或P<0.01)时,应说对比组之间的差异具有统计学意义,而不应说对比组之间具有显著性(或非显著性)差异;应写明所用统计学方法的具体名称(如:成组设计资料的t检验、两因素析因设计资料的方差分析、多个均数之间两两比较的q检验等);在用不等式表示P值时,一般情况下选用P>0.05、P<0.05和P<0.01三种表达方式即可满足需要,无需再细分为P<0.001或P<0.0001。 相似文献
110.
《中华预防医学杂志》2022,(6):824-830
目的获得纯化的GTV-rNP蛋白抗原, 并建立快速准确检测GTV抗体的ELISA法。方法人工合成密码子优化的 GTV-NP 编码基因, 克隆至 pET32a(+)载体, 构建重组表达质粒, 转化至 BL21(DE3)。将优化表达获得的蛋白经Ni柱纯化后用SDS-PAGE和Western blot鉴定。以纯化蛋白为抗原, 建立并优化GTV IgG抗体间接ELISA检测方法, 并对其进行评价和初步应用。结果成功构建原核表达质粒pET32a-NP, 重组蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达, 大小约为44 kD, Western blot结果表明重组蛋白与GTV阳性血清具有良好的抗原性。建立的ELISA法特异性强、敏感性高、批内和批间的变异系数均小于10%具有较好的重复性;检测结果与IFA检测结果符合率达到92.77%。结论建立的GTV NP 抗体检测ELISA方法的敏感性、重复性和特异性均较好。 相似文献