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21.
流行性乙型脑炎病毒结构蛋白编码基因的重组构建 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:建立流行性乙型脑炎病毒(JEV)C、prME,E等结构蛋白编码基因克隆.方法:病毒感染C6/36细胞,RT-PCR法依次获取该病毒结构蛋白基因并进行DNA测序分析,PCR克隆法将PCR产物分别构建于真核表达载体pcDNA 3.1的BamHI与EcoRI酶切位点并依次命名为pJC、pJME与pJE,通过DNA测序、电泳以及限制性内切酶分析加以鉴定.结果:JEV C、prME与E基因片段分别为380、2001以及1 500bp,各基因测序结果与发表的JEV JaGAr-01株相对应序列相一致,从重组质粒释出的插入子分别与各基因大小相符合.结论:pJC、pJME与pJE重组质粒分别含有C、prME与E蛋白编码基因. 相似文献
22.
目的构建表皮胶原蛋白基因X21的原核表达载体pET28-X21ex,诱导其表达胶原蛋白。方法应用PCR技术扩增目的基因X21,纯化后将其克隆入表达载体pET28a,重组质粒经酶切鉴定后,转入大肠杆菌DE3诱导表达,利用SDS-PAGE检测胶原蛋白的表达效果。结果利用DNA重组技术构建了表皮胶原蛋白基因X21的原核表达载体pET28-X21ex,转化大肠杆菌后经诱导表达了30kDa的融合蛋白,以诱导3h的表达量最高,在35%以上。结论旋毛虫表皮胶原蛋白基因X21在大肠杆菌中能够高效表达,为进一步研究旋毛虫表皮胶原蛋白的结构与功能奠定了基础。 相似文献
23.
24.
本实验将赖型钩端螺旋体(简称钩体)DNA基因库的克隆pCX7制备成 ̄(32)P-重组DNA探针,对8个不同血清群的17株问号状钩体、双曲钩体PatocⅠ株以及细螺旋体3055株DNA进行打点杂交;同时用15种DNA片断进行限制性内切酶谱分析。结果表明,该重组DNA具有问号状钩体种(Species)特异性,但与不同问号状钩体之间的同源性程度有差别;限制性内切酶谱分析发现pCX7重组DNA片段长约1.7kb,具有1个Bg1Ⅱ识别位点和3个BstB1识别位点。 相似文献
25.
26.
细粒棘球蚴95抗原基因的克隆及原核表达质粒的构建 总被引:9,自引:2,他引:7
目的:克隆细粒棘球蚴95(Eg95)抗原基因,构建携带目的基因的原核表达载体,为细粒棘球蚴抗原的免疫保护机制研究提供材料。方法:应用PCR方法从细粒棘球蚴cDNA文库中克隆获得Eg95抗原基因,将其克隆至pUCm-T载体,测序确定其正确性。利用定向克隆技术将Eg95抗原基因片段克隆至原核表达质粒pET28上,根据选择标记的卡那霉素抗性基因筛选到阳性克隆,通过酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序确定序列。结果:测序表明所有pET28-Eg95阳性克隆均为正确连接95抗原基因的重组质粒。结论:pET28-Eg95可以进一步用于重组蛋白的表达及抗细粒棘球蚴感染的实验研究。 相似文献
27.
Expression of human immunodeficiency virus type 1gag gene using genetically engineered herpes simplex virus type 1 recombinants 总被引:1,自引:0,他引:1
Angela Rösen-Wolff Karl Raab Lothar Zöller Gholamreza Darai Josef Eberle Friedrich Deinhardt 《Virus genes》1990,4(4):325-337
Infectious herpes simplex virus type 1 (HSV-1) recombinants were constructed by inserting the cDNA sequence of the human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1)gag gene (from nucleotide position 675 [SacI] to 3859 [Asp 718] of the cDNA sequences of HIV-1 strain BH-10) within the DNA sequences of theBamHI DNA fragment B of the genome of an apathogenic HSV-1 strain HFEM. This HSV-1 strain possesses a 4.1-kbp deletion within theBamHI DNA fragment B between 0.762 and 0.789 map units of the viral genome, which allows the insertion of at least 4 kbp of foreign genetic material into this particular region. The DNA sequences of the immediate early promoter (IE4) of HSV-1 that were inserted upstream from thegag gene were used as a promoter. The screening of 205 virus stocks derived from individual plaques revealed that 46 recombinant viruses harbor HIV-1gag-specific DNA sequences. However, it was found that only six of the recombinant viruses are able to express thegag gene product of HIV-1. This indicates that the ratio of the positive recombination events is about 2.9%. 相似文献
28.
目的 本工作旨在检测精神分裂症(Schizophrenia)患者外周淋巴细胞中G72基因的表达情况,进而探讨G72基因的表达与精神分裂症的相关关系。 方法 工作在56例精神分裂症患者和84名年龄性别相匹配的对照中进行,在新鲜外周血样本中抽提总RNA,反转录成cDNA,基因表达量的检测在ABI Prism7900HT型序列监测系统上进行,采用TaqMan的方法对患者及对照组样本的mRNA进行定量,采集的荧光数据经SDS2.1软件自动处理,每个样本作三次平行检测,取平均值作为该样本的最终定量。数据应用SPSS统计软件进行处理,对组间基因表达水平的差异采用独立样本的T检验,调用本实验室G72基因单核苷酸多态性(SNPs)资料,用单因素方差分析的方法分析SNP与基因表达水平的关联性。结果 1.检测得到G72基因在对照组中的表达量为0.0586±0.0114amol/ng cDNA, 在精神分裂症患者组中的表达量为0.0498±0.0121amol/ng cDNA。2.经显著性检验, G72基因的表达水平在病例和对照组间差异无统计学意义,t=-0.512,df138,P=0.609,95%CI:-4.258~2.506。3.单因素方差分析结果显示,rs947267位置上的SNP与该基因的表达水平无相关,F=0.355,df2,χ2=0.703;而rs2181953位置上的SNP与G72基因表达水平相关联,F=6.275,df2,χ2=0.004。A/A基因型的患者基因表达水平显著高于其他基因型。结论:精神分裂症患者G72基因的表达量总体上较正常人并无显著变化,但rs2181953位置上的基因型会影响精神分裂症患者该基因的表达。 相似文献
29.
Summary The glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (gpd) gene of Podospora anserina has been isolated from a genomic library by heterologous hybridization with the corresponding gene of Curvularia lunata. The coding region consists of 1014 nucleotides and is interrupted by a single intron. The amino-acid sequence encoded by the gpd gene shows a high degree of sequence identity with the corresponding gene products of various fungi. Multiple alignments of all fungal GPD sequences so far available resulted in the construction of a phylogenetic tree. The evolutionary relationships of the various fungi belonging to different taxa will be discussed on the basis of these data. Sequence analysis of 1.9 kbp of the 5 non-coding region revealed the presence of typical fungal promoter elements. Utilizing different parts of the 5 regulatory sequence of the Podospora gpd gene, expression vectors containing a dominant selectable marker gene (hygromycin B phosphotransferase) have been constructed for the transformation of P. anserina protoplasts. The use of these homologous gpd regulatory sequences resulted in a significant increase in transformation efficiencies compared to those obtained with vectors in which the selectable marker gene is under the control of the corresponding heterologous promoter of Aspergillus nidulans. 相似文献
30.
目的 观察登革 3型病毒的prM E和NS1基因重组质粒DNA混合免疫对免疫原性的增强作用 ,为登革DNA疫苗混合免疫提供实验依据。方法 将登革 3型病毒的prM E和NS1基因重组质粒DNA分别混合及单独免疫BALB/c小鼠 ,采用中和试验及MTT法检测免疫小鼠血清中和抗体及脾细胞特异性CTL(cytotoxicT lymphocytes)杀伤率。结果 混合重组质粒DNA免疫组与单一prM E基因重组质粒DNA免疫组均在末次免疫后第 14天检测到中和抗体 ,在第 33天达到高峰 ,为 1∶32。在末次免疫后第 4 1天 ,当效靶比为 4 0∶1时 ,混合重组质粒DNA免疫组的特异性CTL杀伤率为 15 % ,而 2个单质粒DNA组分别为 10 .9%和 12 .4 %。结论 重组质粒DNA混合免疫可同时诱发小鼠产生体液免疫和细胞免疫 ,而且细胞免疫应答具有一定的增强作用 ,但没有出现特异性CTL杀伤率的协同增强效果。 相似文献