海藻糖对低温储存皮肤β-actin的mRNA转录水平及其蛋白表达的影响

目的:观察新型低温保护剂(cryoprotectant,CPA)海藻糖(trehalose)对皮肤骨架蛋白β-肌动蛋白(β-actin)表达及mRNA转录水平的调节作用,以了解在传统低温保护剂中添加海藻糖后是否优于单纯传统低温保护剂的作用。方法:实验将新鲜成人皮肤分为4组,分别经海藻糖-二甲基亚砜(T-D)、二甲基亚砜-丙二醇(D-P)、二甲基亚砜-去血清角质细胞培养液(D-K)、DMEM作为低温保护剂保存,-196℃液氮冻存7 d、14 d复温,设新鲜皮肤为对照组。采用免疫组织化学染色及W estern b lot方法观察β-actin蛋白表达、采用RT-PCR方法对不同低温保护剂保存后皮肤的β-actin基因水平进行深入的研究。结果:T-D组β-actin蛋白表达及基因转录与新鲜组相似(P>0.05),D-P作用其次,其余两组与新鲜组对比均降低明显(P<0.05)。结论:传统低温保护剂中添加海藻糖后对低温储存皮肤β-actin表达的保护作用优于单纯传统低温保护剂。     

超低温冻存对人骨髓基质干细胞生物学特性的影响

目的 观察超低温冻存对人骨髓基质干细胞(BMSC)生物学特性的影响. 方法 从正常献髓者髂骨采集骨髓,分离培养出BMSC,并对其进行成骨诱导培养.将第4代人BMSC经短期超低温冻存、复苏后,通过细胞活性率测定、形态学比较、细胞增殖功能、碱性磷酸酶(ALP)活性检测及体外矿化能力比较,观察超低温冻存对人BMSC生物学特性的影响.结果 第4代人BMSC冻存、复苏前后的两组细胞无论在细胞活性率、细胞形态、生长过程、ALP活性等方面均无显著性差异(P＞0.05).结论 短期的超低温冻存对人BMSC的生物活性无明显影响.     

缺氧对鼠胚大脑神经元c-Fos表达的影响及当归保护作用

目的:探讨宫内缺氧对胚胎大鼠大脑神经元内c-Fos表达的影响及当归注射液是否对缺氧鼠胚大脑神经元有保护作用。方法:将孕15d孕鼠采用低张性缺氧模型致鼠胚宫内缺氧,鼠胚大脑组织经c-Fos和神经元特异性标记物-神经元特异烯醇化酶(NSE)免疫组化双标染色后,进行图像分析。结果:三组鼠胚大脑中神经元特异烯醇化酶阳性细胞数量差异没有显著性;而缺氧组中c-Fos/NSE双染阳性细胞比对照组增多(P<0.05);当归组双染阳性细胞比缺氧组减少(P<0.05)。结论:缺氧可刺激鼠胚大脑神经元内c-Fos的表达。当归注射液对缺氧鼠胚大脑神经元可能有保护作用。     

体外受精周期中来源于单原核受精卵胚胎性染色体分析

目的：分析常规体外受精和单精子显微注射周期中来源于单原核受精卵胚胎性染色体的异常率。方法：应用FITC、Texas red标记的X/Y染色体着丝粒部位α卫星重复序列探针，对常规体外受精和单精子显微注射周期中来源于单原核受精卵的胚胎进行荧光原位杂交（fluorescent in situ hybridization,FISH）, 分析其性染色体的异常率和性染色体类型。结果：共分析来自常规体外受精和单精子显微注射周期中来源于单原核受精卵的胚胎111个。总胚胎固定率为92.80%，胚胎杂交率为95.15%。有杂交信号的常规体外受精后单原核受精卵发育来的胚胎中，胚胎性染色体二体率为54.35％，单体率为23.91％，嵌合体率为21.74％。有杂交信号的单精子显微注射后单原核受精卵发育来的胚胎中，胚胎性染色体二体率为34.62％，单体率为34.62％，嵌合体率为30.77％。结论：常规体外受精和单精子显微注射周期中来源于单原核受精卵的胚胎有高于正常的性染色体异常率，不利于进行胚胎移植；前者性染色体二体率显著高于后者。     

不同波段红外线对小鼠胚胎发育作用的实验研究

目的:研究不同波段红外线对小鼠胚胎的作用。方法:采用不同波段的红外线对正常孕鼠及环磷酰胺(CP)致毒孕鼠的照射,观察了受孕母鼠的体重变化,活胎率、死胎率、吸收胎率以及胎鼠的身长、尾长、体重等指标。结果:单纯红外线照射各组孕鼠的体重、胎鼠的体重、身长、尾长都有增加。其中中波红外线组与正常对照组相比有显著性差异(P<0.01)。阳性对照组(CP组)与正常对照组比较活胎率、死胎率、吸收胎率、胎鼠的体重、身长、尾长均有显著性的差异(P<0.01),CP可明显抑制胎鼠的发育及降低胎鼠的活胎率。红外线+CP各组与阳性对照组比较,活胎率、吸收胎率、死胎率、胎鼠的体重、身长、尾长均有显著性差异。结论:红外线特别是中波红外线能促进胚胎的生长并对CP引起的胚胎发育障碍有一定的缓解作用。     

胚胎移植后11天血β-hCG水平与妊娠结局关系的研究

目的:探讨体外受精-胚胎移植后11天单次血β-hCG水平的临床预测价值,分析其与不同妊娠结局的关系。方法:选取胚胎移植后11天测定血清β-hCG确定妊娠并继续妊娠至12周以上的患者192例,分为无效妊娠组(包括生化妊娠、异位妊娠和妊娠早期流产)和继续妊娠组(包括单胎妊娠、双胎妊娠和三胎妊娠),比较各组间的血清β-hCG水平,分析其与各妊娠结局的关系。结果:胚胎移植后11天,无效妊娠组的血β-hCG水平为81·43±73·15U/L明显低于继续妊娠组的323·75±315·29U/L,具有显著性差异(P<0·001);单胎妊娠组血β-hCG水平均明显低于双胎妊娠组和三胎妊娠组,差异亦具有显著性(P<0·001)。当血中β-hCG介于10~50U/L时,生化妊娠和异位妊娠的阳性预测价值为81·8%,阴性预测价值达94·4%;当血β-hCG≤100U/L时,早期流产的阳性预测价值为80·8%,阴性预测价值为77·8%;当血β-hCG>250U/L时,双胎、三胎妊娠的阳性预测价值为83·3%,阴性预测价值为74·4%。结论:胚胎移植后11天单次血清β-hCG水平能有效地预测体外受精-胚胎移植周期不同的妊娠结局,具有临床指导意义。     

两种冷冻保护剂玻璃化冷冻小鼠卵巢的比较研究

目的:探讨两种玻璃化冷冻保护剂对小鼠卵巢组织学和功能的影响。方法:将23只4周龄ICR雌鼠随机分为新鲜卵巢移植组(6只)、去势组(5只)、EG40组(6只)和ED20组(6只)。EG40组和ED20组分别应用乙二醇(EG)和联合应用EG与二甲基亚砜(DMSO)玻璃化冷冻小鼠卵巢组织,一周后解冻,将一部分复苏卵巢组织自体移植入小鼠肾被膜下,另一部分组织行组织学观察。移植术后5d开始观察所有小鼠的动情周期,一个月后处死小鼠,对存活的卵巢组织行组织学观察。结果:EG40组、ED20组和新鲜卵巢移植组小鼠动情周期出现率均为100%,出现动情周期的天数分别为10.2±1.2d、8.0±0.9d和6.8±1.0d,EG40组动情周期出现天数明显多于新鲜卵巢移植组(P<0.01);ED20组与新鲜卵巢移植组差异无显著性(P>0.05)。移植存活的卵巢组织内可见不同发育阶段的卵泡,形态正常,但冻融卵巢组织内卵泡数量比新鲜组织少。结论:联合应用玻璃化冷冻保护剂EG和DMSO对小鼠卵巢组织学和功能的影响较小。     

IVF-ET周期多囊卵巢综合征患者卵泡液及血清抵抗素水平的研究

目的:探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中多囊卵巢综合征(PCOS)患者的卵泡液及血清的抵抗素水平、抵抗素与PCOS表现型的相关关系,以及抵抗素对P-COS妇女的卵子发育与成熟及临床妊娠的影响。方法:选择IVF-ET治疗的不孕妇女82例分为3组:第1组为PCOS肥胖组(BMI>24kg/m2)32例,第2组为PCOS非肥胖组(BMI≤24kg/m2)30例,第3组为非PCOS不孕患者作为对照组20例。在超促排卵周期的取卵日留取外周血和卵泡液,离心(2000r/min,5min)后取上清密封保存于-20℃待测。采用ELISA方法检测血清及卵泡液内抵抗素的水平,分析抵抗素水平与PCOS及其表现型的相关关系,同时比较各组间的获卵数、卵裂数、受精率、植入率、临床妊娠率及流产率。结果:PCOS肥胖组血清抵抗素水平明显高于其它两组(P<0·001),3组的卵泡液内抵抗素水平无差异(P>0·05),3组中卵泡液内的抵抗素水平明显低于血清内的抵抗素水平(P<0·001);PCOS患者的临床妊娠结果与抵抗素无关;1、2组的获卵数、卵裂数明显高于对照组(P<0·05);PCOS组的受精率比非PCOS组低(P<0·05),但是1组与2组间无差异(P>0·05)。3组患者年龄、不孕年限、使用促性腺激素支数以及植入率、临床妊娠率、流产率等无明显差异(P>0·05)。结论:PCOS患者血清抵抗素水平高低与BMI呈正相关,而卵泡液中的抵抗素水平与BMI无明显相关性。抵抗素在PCOS患者的IVF-ET治疗周期及治疗结局中可能不起作用。     

不孕症患者种植窗期子宫内膜中L-选择素配体合成酶的表达及意义

目的检测不孕症患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)前种植窗期子宫内膜N-乙酰氨基葡萄糖-6-磺基转移酶(N-acetylglucosamine-6-O-sulfo trans ferase)的表达,比较受孕者和未受孕者的表达差异,探讨选择素与其配体相结合与胚泡的附植过程的关系及其发挥的作用。方法2004-07-2005-03南京医科大学第一附属医院生殖中心在进行IVF-ET治疗前,于黄体中期行宫腔镜检查的不孕症患者作为研究对象,受孕者14例作为研究组,未受孕者28例作为对照组,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测两组患者种植窗期的表达水平。结果不孕症患者受孕组种植窗期子宫内膜N-乙酰氨基葡萄糖-6-磺基转移酶的mRNA的表达水平(灰度值)平均为(0.65±0.33),未受孕组种植窗期子宫内膜N-乙酰氨基葡萄糖-6-磺基转移酶的mRNA的表达水平(灰度值)平均为(0.41±0.36),其N-乙酰氨基葡萄糖-6-磺基转移酶的mRNA的表达水平显著低于受孕组,P<0.05。结论选择素与其配体相结合的机制可能参与了胚泡的附植过程,并可能是子宫内膜对胚胎接受能力的重要参数之一。     

海藻糖在气管低温保存中的保护机制

目的探讨海藻糖在气管低温保存中的保护作用和机制。方法新鲜配制4组保存液，其中：Ⅰ组LPD；Ⅱ组LPD 10％DMSO；Ⅲ组LPD 0．15M海藻糖；Ⅳ组LPD 10％DMSO 0．15M海藻糖。切取SD大鼠气管后立即分别放入含上述4种溶液的冻存管，在程序降温仪降至-80℃后投入液氮中保存。20d后对气管标本进行HE染色和Bcl-2、Pax蛋白检测(免疫组化)，并将其异位移植到Wistar大鼠腹腔，15d后取出移植气管，观察组织学变化。结果4种保存液低温保存气管20d后，Ⅲ组和Ⅳ组气管结构完整，软骨细胞Pax蛋白表达较低，尤其Ⅳ组保存效果最好，同种异体异位移植后生长良好。各组Bcl-2蛋白表达无明显区别。结论在气管低温保存中海藻糖的保护作用主要是通过对软骨细胞的保护实现的，抑制软骨细胞Pax基因的表达是其中的保护机制之一。海藻糖和DMSO合用保护作用更好。