基于UPLC-Q-TOF-MS/MS和网络药理学方法探讨短梗五加改善失眠的潜在药效成分及作用机制

目的:研究短梗五加改善失眠的药效物质基础及潜在的作用机制。方法:运用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术,结合文献,对短梗五加化学成分进行分析鉴定,使用SwissADME对成分进行筛选,通过 Swiss Target Prediction数据库预测活性成分潜在靶点,GeneCards、DRUGBANK、OMIM和DisGeNET数据库搜集疾病靶点,使用VENNY软件收集成分-靶点交集,Cytoscape软件构建靶点蛋白相互作用网络,利用DAVID数据库进行GO和KEGG富集,使用微生信平台进行可视化分析。随后利用Cytoscape构建成分-靶点-通路图,运用AutoDock Vina和Pymol软件进行分子对接。进一步建立斑马鱼睡眠剥夺模型对活性成分进行验证。结果:异嗪皮啶、金合欢素、东莨菪碱内酯、丁香酸、川芎哚等16个成分为短梗五加改善睡眠药效成分,可能作用于ESR1、AKT1、EGFR、PTGS2和PPARG等靶点,成分与靶点结合能小于-4.25kJ·mol^-1的占总数94%,显示良好的结合活性。短梗五加通过雌激素、PI3K-Akt、ErbB、HIF-1等信号通路改善失眠。总提物、金合欢素、异嗪皮啶和东莨菪碱内酯均可改善失眠并具有一定的镇静作用(P＜0.01,P＜0.05)。结论:短梗五加改善失眠可能是通过多靶点、多成分起作用,本研究为产品的质量评价及深度开发提供科学依据。     

刺五加愈伤组织的诱导及愈伤组织状态调控

目的获得适宜悬浮培养的刺五加愈伤组织。方法利用植物组织和细胞培养技术,考察3种诱导培养基及9种继代培养基对刺五加愈伤组织的诱导及愈伤组织状态的影响。结果以α-萘乙酸(α-Naphthaleneacetic acid)2.0 mg.L-1+6-苄氨基嘌呤[N-(phenylmethyl)-1H-purin-6-amine,6-BA]2.0 mg.L-1诱导出的愈伤组织适于悬浮培养,叶和叶柄的诱导率分别为93.3%和100%;筛选出最佳固体继代培养的外源激素配比为NAA1.0 mg.L-1+6-BA1.0 mg.L-1,在此激素配比下,愈伤组织生长代谢迅速,性状稳定,呈易分散的颗粒状,易于分散,适合下一步的悬浮培养。结论以刺五加嫩叶为外植体,NAA2.0 mg.L-1+6-BA2.0 mg.L-1为诱导培养基,NAA1.0 mg.L-1+6-BA1.0 mg.L-1为继代培养基可以获得适宜悬浮培养的愈伤组织。     

胶束电动毛细管电泳同时检测刺五加中紫丁香苷及绿原酸的含量

 目的建立简单、快速且能同时分离测定刺五加中紫丁香苷、绿原酸含量的胶束电动毛细管电泳法。方法采用胶束电动毛细管电泳法,缓冲体系为100mmol·L^-1 NaH₂PO₄-100mmol·L^-1 Borax-100mmol·L^-1 SDS-双蒸水(6.25∶43.75∶37.5∶12.5,pH9.25),熔融石英毛细管柱(25μm×45cm),分离电压为16kV,检测波长为254nm,进样时间为25s,进样高度10cm。结果紫丁香苷、绿原酸在0.0625～2.0000,0.2500～8.0000g·L^-1与峰面积线性关系良好,线性方程依次为:Y=112904ρ+1645.1(r=0.9999),Y=98191ρ-165.11(r=0.9999);样品回收率分别为100.78%和99.56%;两种成分含量以刺五加根中最高。结论该方法简单、快速、准确、重现性好,可用于刺五加药材的质量控制,不同部位两成分均存在一定的差异。     

不同性别类型刺五加根茎和茎有效成分季节积累规律的研究

目的评价不同性别类型刺五加根茎和茎有效成分季节积累规律,从而确定出优质药材性别类型和最佳采收期。方法采用RP-HPLC色谱法检测刺五加苷B、绿原酸及刺五加苷E和异嗪皮啶含量。结果不同性别类型刺五加的有效成分含量季节积累规律相似。长花丝刺五加中刺五加苷B、刺五加苷E和绿原酸含量大于短花丝刺五加,特别在花期前(7月中旬)表现更加明显。异嗪皮啶的含量相反,短花丝类型高于长花丝类型。结论长花丝刺五加优于短花丝刺五加,春季和秋季活性成分含量较高。     

刺五加提取物的总黄酮含量测定及其对血液流变学的影响

目的 测定刺五加提取物的总黄酮含量并观察刺五加对血液流变学的影响。方法 采用分光光度法测定刺五加总黄酮的含量。利用血细胞分析仪进行血液成分测定,采用荧光偏振法测定红细胞膜流动性和微黏度。结果 刺五加提取物与刺五加注射液的总黄酮含量相近。2组溶液对小鼠白细胞数量、红细胞数量、平均血细胞容积、血红蛋白含量以及血小板数量均无显著影响;2组溶液均可增加红细胞膜流动性,降低微黏度,其中刺五加注射液的作用更为显著。结论 刺五加提取物可以增加红细胞膜流动性,从而降低血液黏度,改善血液流变学指标。     

刺五加和五味子对老年大鼠脑单胺氧化酶及其同工酶活性的影响

用剌五加和五味子分别喂养老年大鼠二个月后,测定各脑区MAO—T及其同工酶MAO—A、MAO—B的活性。结果表明刺五加能使纹状体、中脑和延脑中MAO—B活性明显下降,但使下丘脑MAO—A活性上升22％。五味子组的下丘脑、纹状体和小脑等脑区MAO—A和MAO—B活性同时下降。提示刺五加和五味子可能是通过改变某些脑区MAO及其同工酶活性,影响单胺类介质水平而改善神经系统功能的。     

刺五加增强小鼠睡眠剥夺模型免疫功能和抗疲劳能力的实验研究

目的:探讨刺五加对小鼠睡眠剥夺模型免疫功能和抗疲劳能力的影响。方法:将小鼠随机分为正常对照组、模型组和刺五加低、高剂量组。刺五加低、高剂量组分别按照500,1 000 mg·kg-1的剂量ig,连续给药10 d,正常对照组和模型组每天ig等体积的蒸馏水。在第11 d,将模型组和刺五加低、高剂量组的小鼠采用单平台水环境法进行睡眠剥夺(sleepdeprivation,SD),在SD期间,继续给予实验药物。SD连续3 d后,采用炭粒廓清实验观察药物对SD小鼠免疫功能的影响,通过负重游泳实验和转棒疲劳实验观察药物对SD小鼠抗疲劳能力的影响。结果:炭粒廓清实验中,刺五加500,1 000 mg·kg-1的K值和α值为(0.021 4±0.008 3,0.030 7±0.005 9),(4.0±0.2,4.6±0.2),与SD组相比均显著增加;抗疲劳实验中,刺五加500,1 000 mg·kg-1的游泳时间和转棒时间为(828±83),(990±64)S,(330±63),(665±170)s,与SD组相比均显著延长。结论:刺五加具有增强睡眠剥夺小鼠免疫功能和抗疲劳能力的作用。     

Anti-oxidant activities of<Emphasis Type="Italic">acanthopanax senticosus</Emphasis> stems and their lignan components

The antioxidant activities of Acanthopanax senticosus stems were evaluated in CCl4-intoxicated rats. The n-butanol fraction from the water extract of the stems, when pretreated orally at 200 mg/kg/day for 7 consecutive days in rats, was demonstrated to exhibit significant increases in antioxidant enzyme activities such as hepatic cytosolic superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase by 30.31, 19.82 and 155%, respectively. The n-butanol fraction whereas showed a significant inhibition of serum GPT activity (65.79% inhibition) elevated with hepatic damage induced by CCl4-intoxication. Eleutheroside B, a lignan component, isolated from the n-butanol fraction was found to cause a moderate free radical scavenging effect on DPPH, its scavenging potency as indicated in IC50 value, being 58.5 microM. These results suggested that the stems of A. senticosus possess not only antioxidant but also hepatoprotective activities.     

刺五加叶中总黄酮的分离提取及抗氧化活性研究

对刺五加叶总黄酮提取工艺进行了研究,同时利用1,1-二苯基-2-苦基苯肼自由基(DPPH)法和羟基自由基(OH)法对刺五加叶总黄酮提取物进行了的抗氧化评价。结果表明:超声提取法对刺五加叶总黄酮提取效果最佳。超声提取正交试验结果表明,刺五加叶总黄酮的最佳提取工艺为:以50%乙醇溶液提取,提取时间为1.5h,提取次数为2次,溶媒倍量为20倍,提取率为5.192%。抗氧化活性结果表明,刺五加叶总黄酮对DPPH和.OH均有良好的清除作用,且随着其浓度的增加,清除能力增强。     

刺五加注射液对小鼠急性酒精性肝损伤的保护作用

目的：：观察刺五加注射液对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法：昆明种雄性小鼠60只(18~22 g),随机分为正常组、模型组、硫普罗宁阳性药对照组和刺五加高、中、低剂量组(200 mg/kg、100 mg/kg、50 mg/kg ),每组各10只。采用50%乙醇12 ml·kg-1·d-1连续灌胃10 d,制备小鼠酒精性肝损伤模型。测定血清中天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶及三酰甘油( TG)水平;肝组织丙二醛、还原型谷胱甘肽含量,计算肝脏指数,并观察肝脏病理变化。结果：小鼠酒精性肝损伤模型构建成功。除刺五加低剂量组TG水平与模型组差异无统计学意义(P>0.05)外,与模型组比较,刺五加注射液均能够降低血清中天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶和TG水平(P<0.05~P<0.01);抑制小鼠肝脏组织丙二醛含量的升高,提高肝脏中还原型谷胱甘肽含量(P<0.05~P<0.01);减轻肝脏病理组织损伤;刺五加高、中剂量组均能降低小鼠肝脏指数(P<0.05和P<0.01)。结论：刺五加注射液对小鼠酒精性肝损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制氧化应激有关。