刺五加GAPDH基因组DNA的克隆与分析

目的克隆刺五加GAPDH基因的DNA及启动子序列,并进行生物信息学分析。方法以刺五加的基因组DNA为模板,采用PCR和TAIL-PCR技术克隆GAPDH基因的全长DNA序列及5’端上游启动子序列,并对其进行生物信息学分析。结果克隆到长4 103 bp的刺五加GAPDH基因全长DNA及启动子序列。该基因共包含12个外显子和11个内含子,其剪切均符合GT-AG原则。刺五加GAPDH的启动子片段长1 304 bp,转录起始位点A位于起始密码子ATG上游61 bp处。启动子除含有TATA-box、CAAT-box等基本元件外,还有诸多与激素应答、光响应和胁迫信号等有关的顺式作用调控元件。结论首次克隆到刺五加GAPDH基因的全长DNA及启动子序列,为深入研究GAPDH基因结构特征与功能奠定基础。     

刺五加叶中金丝桃苷的薄层鉴别和含量测定

目的：以金丝桃苷为指标成分,建立刺五加叶的薄层定性和含量测定的方法。方法：采用薄层色谱法对刺五加叶中金丝桃苷进行定性鉴别,并用高效液相色谱法进行含量测定,色谱柱：Kromasil 100-5C18色谱柱（4.6mm×250mm）;流动相：甲醇-0.1％冰醋酸水溶液(35：65);流速：0.8mL/min;检测波长：360nm;柱温：30℃;进样量：10μL。结果：刺五加叶金丝桃苷的薄层鉴别特征明显,金丝桃苷在0.13～0.78μg范围内具有良好线性关系,r=0.9994,平均回收率为98.17％,RSD为1.02％（n=5）。结论：此方法简便、快速、准确,可用于刺五加叶的质量控制。     

刺五加组织培养与细胞工程进展

综述了国内外对刺五加组织培养与细胞工程研究的现状。分别从体细胞胚胎发生的影响因素外植体的发育程度和类型、培养基、植物生长调节剂的种类和浓度以及作用特点、体细胞胚胎的形态发生过程与解剖学和人工种子的包埋与萌发;茎尖外植体的离体培养与快速繁殖;根癌农杆菌和发根农杆菌对愈伤组织和新生体胚的遗化转化;毛状根培养生产刺五加次生代谢产物的研究现状进行了评述,并进一步分析了其中存在的问题,提出了一些建议。     

中药五加皮抗肿瘤作用体内外实验研究

目的：分离中药五加皮抗肿瘤活性物质,研究五加皮提取物在体内外的抗肿瘤细胞作用,为五加皮抗肿瘤新药开发、研制提供依据。经皮下注射肿瘤细胞建立荷瘤小鼠动物模型,通过灌胃给药检测五加皮提取物的体内抗肿瘤作用。方法：用^3H—TdR掺入法测定了肿瘤细胞增殖反应;用凝胶层析法初步分离、纯化了五加皮抗肿瘤成分。结果：五加皮提取物对多种组织来源的肿瘤细胞增殖有较强的抑制作用(P<0．01),而且有较好的量效关系。五加皮提取物经口投入荷瘤小鼠后,实验组小鼠一般情况较对照组小鼠好,肿瘤生长较慢,生存期明显延长(P<0．01)。经凝胶层析分析,分离得到一种对肿瘤细胞增殖反应有抑制作用的蛋白质成分,分子量为64kda。结论：中药五加皮不仅在体外对多种肿瘤细胞增殖有抑制作用,在体内也有较好的抗肿瘤效果。其抗肿瘤活性与一种分子量为64kda的蛋白质成分有关,该成分的进一步分离、纯化和作用机理研究,对五加皮抗肿瘤作用的临床应用和新药开发提供科学依据。     

刺五加提取液对慢性疲劳模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的调节作用

目的：观察刺五加提取液对慢性疲劳（chronic fatigue,CF）大鼠的行为和下丘脑-垂体-肾上腺（HPA）轴的影响,探讨其抗疲劳机制。方法：30只大鼠随机分为5组：对照组,CF组,刺五加提取液50、100、200 mg/kg组。除对照组6只大鼠外,其余24只大鼠用跑台训练法建立CF模型。各组大鼠分别灌胃给予生理盐水,生理盐水,刺五加提取液50、100、200 mg/kg,每天给药1次,共21 d。测定各组大鼠给药后力竭时间;放射免疫分析法（RIA）检测促肾上腺皮质激素释放素（CRH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质酮的血浓度,实时（real-time）PCR法检测下丘脑促皮质素释放激素受体1（CRHR1）mRNA表达。结果：刺五加提取液100、200 mg/kg大鼠跑台致力竭时间比CF组明显延长（P＜0.01）。CF模型大鼠CRH、ACTH和皮质酮的血浓度显著升高（P＜0.01）,下丘脑CRHR1 mRNA表达上调（P＜0.01）。刺五加提取液50、100、200 mg/kg可部分逆转由CF引起的CRH、ACTH及皮质酮血清浓度升高（P＜0.05,P＜0.01）和CRHR1 mRNA表达的上调（P＜0.05,P＜0.01）。结论：刺五加提取液的抗疲劳作用可能与抑制HPA轴功能亢进,改善CRHR1偶联的信号通路有关。     

刺五加总黄酮对小鼠红细胞膜流动性的影响

目的 观察刺五加提取物中总黄酮的含量及其对红细胞膜流动性的影响。方法 采用分光光度法测定刺五加总黄酮的含量，采用荧光偏振法测定红细胞膜流动性和微粘度。结果 刺五加提取物与刺五加注射液的总黄酮含量相近，两组溶液均可增加红细胞膜流动性，降低微粘度，其中刺五加注射液的作用更为显著。结论 刺五加总黄酮可以增加红细胞膜流动性，从而降低血液粘度，改善血液流变学指标。     

刺五加注射液治疗冠心病心绞痛随机对照试验的Meta分析

目的 应用Meta分析系统评价剌五加注射液治疗冠心病心绞痛的临床疗效及安全性.方法 检索有关刺五加注射液治疗冠心病心绞痛随机对照试验文献,筛选合格研究,应用Jadad评分法进行质量评价,运用异质性检验、Meta分析、漏斗图分析、敏感性分析等方法统计相关数据.结果 有4项研究符合纳入标准,Meta分析结果显示总有效率比较的合并OR=4.21,95%的可信区间（CI值）为（2.29,7.75）.结论 Meta分析结果显示刺五加注射液对冠心痛心绞痛有一定疗效,且无可靠证据显示该药会提高不良事件发生率,但由于现有研究质量较差,尚需要设计严格、大样本的随机对照试验加以证实.     

体外培养刺五加生产刺五加苷B、E的研究

目的 探讨2,4-D和培养基对刺五加愈伤组织和体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的影响,建立有利于刺五加苷B、E积累的刺五加体外培养体系.方法 将来自同一外植体的刺五加愈伤组织和体细胞胚胎分别诱导增殖或产生次级体胚,HPLC法测定培养物中刺五加苷B、E含量和培养物质量,考察培养物类型、培养基种类和激素对刺五加苷B、E生产的影响.结果 体细胞胚胎的质量虽略低于愈伤组织的质量,但体细胞胚胎生产刺五加苷B、E的能力优于愈伤组织.2,4-D对刺五加苷B、E含量影响较小,仅改变了培养物的质量.MS培养基处理中培养物的刺五加苷B、E产量优于1/2MS培养基.结论 刺五加体外培养物可以生产刺五加苷B、E,其产量取决于培养物类型、培养基种类和2,4-D浓度.     

复方刺五加糖浆治疗心脾两虚型更年期妇女不寐的研究

目的观察复方刺五加糖浆治疗心脾两虚型更年期妇女不寐的疗效。方法将60例心脾两虚型更年期妇女失眠患者随机分为2组。治疗组30例采用复方刺五加糖浆治疗,口服20 mL,每日早晚各1次;对照组30例口服舒乐安定片。10 d为1个疗程,2个疗程后观察2组患者的临床综合疗效、中医证候疗效、睡眠质量改善情况及不良反应。结果治疗组临床综合疗效优于对照组(P<0.05),中医证候疗效明显优于对照组(P<0.01),睡眠质量改善情况优于对照组(P<0.05),且无不良反应。结论复方刺五加糖浆治疗心脾两虚型更年期妇女不寐临床疗效较好,可有效改善睡眠深度和质量。     

机械化学法辅助提取刺五加总黄酮的工艺研究

目的研究机械化学法辅助提取刺五加总黄酮的最佳工艺。方法以总黄酮提取率为考察指标,通过单因素及正交实验考察机械化学法辅助提取刺五加总黄酮的主要影响因素,确定最佳工艺条件;采用分光光度法测定总黄酮含量。结果最佳工艺条件为:Na2CO3/Na2B4O7助剂用量4%(W/W),物料粒度D95≤37μm,乙醇浓度为20%(V/V),料液比为1∶60(g∶ml)。该工艺条件下,总黄酮提取率比热回流法提高13.2%。结论机械化学法辅助提取具有提取率高,时间短,无需加热,乙醇用量少等特点,是提取刺五加总黄酮的一种有效方法。