Chicken nucleated blood cells as a cellular model for genotoxicity testing using the comet assay.

Mycotoxins can frequently occur in animal feed and human food. T-2 toxin, as the most toxic trichothecene, has been implicated as the causative agent in a variety of animal diseases and is associated with some human diseases. The comet assay was performed as a test for detection of DNA damage caused by T-2 toxin in peripheral blood cells of chicken. The suitability of the comet assay as a biomarker for genotoxic analysis has been applied in studies using human white blood cells. It can be applied to any tissue from which a single cell suspension can be obtained. The method has already been applied to chicken as a foodstuff for detection of irradiation of food containing DNA. However, application of the method on chicken blood cells has not been set up yet. The aim of this research was to develop a protocol for detection of DNA damage induced by T-2 toxin in chicken blood cells. Chickens were administered orally with T-2 toxin and the samples of whole blood were collected at 24 h post treatment. The DNA damage was determined by an increase in the comet parameters in tested animals. Our results show that T-2 toxin had induced significant DNA damage in treated chicken as compared with control animals, indicating that the assay can be used for the assessment of primary DNA damage caused by mycotoxins.     

湖北麦冬及其近缘药用植物的随机扩增引物DNA分析

目的 探讨湖北麦冬及其近缘药用植物的亲缘关系和遗传多样性。方法 对不同栽培措施处理的湖北麦冬、湖北麦冬组培苗、山麦冬、恩施麦冬、杭麦冬和川麦冬的22种材料进行随机扩增引物DNA（RAPD）法分析,用SPSS软件中的Jaccd和Dice两种方法对扩增片断的相关性进行聚类分析。结果 从S系列100个随机引物中筛选出10个扩增条带清晰、稳定、重现性好和多态性明显的引物,10个引物共扩增出75个条带,其中多态性条带58个,占总扩增条带的77.3%。湖北麦冬不同栽培条件和组织培养植株的相关系数均接近1。湖北麦冬与山麦冬的相关系数在0.74～0.88之间。麦冬（杭麦冬和川麦冬）与湖北麦冬和与山麦冬之间的相关系数分别为0.41～0.66和0.48～0.69。杭麦冬与川麦冬的相关系数为0.74,介于湖北麦冬与山麦冬之间。不同的山麦冬样品相关系数均>0.8。结论 22种麦冬类药用植物之间的亲缘关系与形态分类结果基本一致,组织培养和栽培措施对遗传关系影响不大。但产于不同地区的川、杭、恩施麦冬具有一定的遗传差异.     

喜树碱多相脂质体对肿瘤细胞动力学及分子药理学研究

喜树碱多相脂质体对肝癌细胞具有抑制增殖的效应,明显损伤S期细胞,对于G_0期细胞亦有轻度损伤,G_2期细胞进入M期也受到一定抑制。10mg/kg静注后肝癌组织中cAMP水平明显增加,而肝癌组织中DNA和蛋白质含量显著下降,cAMP与cGMP比值大幅度提高。喜树碱多相脂质体对肝癌细胞DNA合成的最高抑制率为73.7%,后作用约4小时,对癌细胞RNA合成的抑制率达82.9%。     

皱瘤海鞘乙醇提取物对HSV-2基因复制的影响

目的：研究皱瘤海鞘乙醇提取物对HSV-2 DNA复制的影响;方法：以Vero细胞为模型,应用CPE法,MTT法、real-time PCR与反向PCR检测皱瘤海鞘乙醇提取物对HSV-2DNA合成的抑制作用。结果：皱瘤海鞘乙醇提取物显著抑制HSV-2所致的CPE;皱瘤海鞘乙醇提取物在HSV-2生物合成早期(-2,0,2小时)时干预,对HSV-2的生物合成抑制效果较好,病毒抑制率达65%以上;皱瘤海鞘乙醇提取物能够显著抑制HSV-2 DNA拷贝数,与病毒对照组比较具有显著差异(P＜0.01),并能下调HSV-2DNA聚合酶UL30基因的表达。结论：皱瘤海鞘对HSV-2DNA复制具有抑制作用,其作用靶点之一是HSV-2DNA聚合酶UL30基因。     

补中益气汤治疗慢性乙型肝炎的临床与实验研究

通过对补中益气汤及西药治疗慢性乙型肝炎临床疗效的对比研究,发现补中益气汤能较快改善慢性乙型肝炎的临床症状及体征,改善肝功能,促使乙型肝炎病毒血清学标志好转(HBsAg、HBeAg转阴或滴度下降,抗-HBe或抗-HBs转为阳性),与西药治疗对照组比较有显著性差异(P<0.05)。动物实验观察了补中益气汤对小鼠肝组织DNA、RNA、蛋白质合成的影响,结果表明,补中益气汤对三者的合成均有明显的促进作用。其抗肝炎的作用机制可能与该方增强肝脏蛋白质的合成,促进肝组织的修复,改善机体整体的抗病机能有关。     

基于ISSR标记的麻花艽遗传多样性分析

目的探讨秦艽基原植物之一麻花艽Gentiana straminea的遗传多样性,并构建DNA指纹谱。方法在其自然分布区广泛取样,共涉及西藏、青海、甘肃及四川等地28个居群83份样本,应用ISSR分子标记技术,POPGEN软件分析遗传信息参数,NTSYS软件构建亲缘关系UPGMA聚类图。结果从100条引物中筛出7条多态性好、条带清晰的引物用于ISSR分析。共检测到95个条带,其中多态性条带88个,多态性条带百分率(PPL)为92.63%;麻花艽居群间的期望杂合度(H_e)为0.288 2,多样性信息指数(I_m)为0.437 1,种群间基因分化系数(G_(st))为0.678 3,基因流(N_m)为0.237 1,遗传距离为0.074 3~0.490 0。UPGMA树将麻花艽居群主要分为2大支。结论麻花艽种群遗传多样性水平较高,居群间遗传多样性水平高于居群内;其遗传变异主要存在于居群间;遗传特性与地理分布具有一定相关性。该工作可为麻花艽品种鉴定、物种就地保护、探讨环境等因素对于遗传分化的影响及药材道地性研究提供基础资料。     

基于COI基因的龟甲及其混伪品的DNA条形码研究

目的:利用COI基因对乌龟及常见混伪品进行分子鉴定,探讨快速、准确鉴定龟甲及其混伪品的方法.方法:在全国范围内收集龟甲的正品及其混伪品8种,共22份样品,提取DNA,得到其COI序列.用Contig Express,Dnaman,Edit Sequence,Mega 5等软件进行变异位点分析,并构建正品龟甲其混伪品的N-J树.结果:龟甲的正品来源乌龟与其混伪品种间存在较多变异位点.由所构建的系统聚类树图可以看出,同属聚在一起,且各物种又形成相对独立的支.结论:基于COI序列的DNA条形码技术可以很好地鉴定龟甲及其混伪品.     

通督调神针刺联合小续命汤加减治疗气虚血瘀型中风临床研究

目的:观察通督调神针刺联合小续命汤加减治疗气虚血瘀型中风患者的临床疗效.方法:将符合纳入标准的70例气虚血瘀型脑卒中患者,采用随机数字表法分为对照组和治疗组各35例.对照组根据缺血性和出血性脑卒中相关指南予以对症处理,结合通督调神针刺;治疗组在对照组基础上联合服用小续命汤加减.两组均连续治疗3周,观察美国国立卫生院卒中...     

三七精准煮散饮片的研制——质量均一性分析

目的:饮片质量均一性是中药临床疗效稳定的基础,利用化学指纹图谱结合DNA分子鉴定技术考察三七精准煮散饮片与市售原饮片质量的均一性。方法:应用第二内转录间隔区(ITS2)序列DNA条形码对三七饮片进行分子鉴定;对比三七市售原饮片及精准煮散饮片的干膏收率;采用HPLC-DAD检测3批三七饮片混合粉碎前后的质量均一性和指纹图谱相似度。结果:三七煮散饮片出膏率显著高于原饮片出膏率;不同批次原饮片间指标成分三七皂苷R_1,人参皂苷Rg_1及Rb_1溶出量有明显的差异性,RSD分别为13.1%,32.7%及24.5%,混合制成煮散饮片后溶出量差异减小,RSD分别为3.6%,2.6%及3.5%;精准煮散饮片提取液中化学成分溶出量较原饮片高。混合粉碎后指纹图谱相似度提高,标定了共有峰14个,峰面积均有提高。结论:三七精准煮散饮片与市售原饮片基本属性相一致,但煮散饮片的浸出、有效成分溶出及质量均一性均有明显提高,提示煮散饮片可提高临床用药的精准性。     

不同种源银柴胡及其伪品的ITS2序列分析与鉴别

目的：采用基于内转录间隔区2 (ITS2)序列的分子鉴定法分别对17份不同种源银柴胡和6种伪品基原植物进行分析和鉴别。方法：对植物样品进行DNA提取、扩增、测序,并检索GenBank数据库,获取17份不同种源银柴胡及6种伪品的ITS2序列。采用ITS2数据库进行注释,去除5.8S和28S片段,获得完整的ITS2序列,利用MEGA 8.0软件进行序列比对、计算K2P遗传距离、构建邻接（NJ）系统发育树,采用美国国家生物技术信息中心（NCBI）数据库和“中药材DNA条形码鉴定系统”进行BLAST分析和物种鉴定,并利用ITS2数据库预测二级结构。结果：17份银柴胡样品共得到3个单倍型ITS2序列（YCH1、YCH2和YCH3）,经与银柴胡标准ITS2序列比对,发现YCH1和YCH2与标准序列一致,但YCH3有4处碱基缺失,表现出0.936的遗传距离,在系统发育树中被单独聚为一个分支,并具有不同的二级结构;6种伪品的ITS2序列在长度、鸟嘌呤+胞嘧啶占比、变异位点、遗传距离、NJ系统发育树和二级结构上均与银柴胡ITS2序列表现出明显的差异。结论：基于ITS2序列的分子鉴定方法可以有效鉴别银柴胡...