反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化。结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.86±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用。     

DNA甲基转移酶1和CD11a基因在SLE患者中的表达

目的检测SLE患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中DNA甲基转移酶1(DNA methylatransferase1,DNMT1)和CD11a基因的表达水平,探讨DNMT1表达异常在SLE发病中的作用。方法提取8例SLE患者及12例正常人外周血单核细胞,以RT-PCR法检测DNMT1和CD11a基因的转录水平,采用两样本均数t检验比较分析SLE患者与正常人之间DNMT1与CD11a基因表达的差异;统计分析两种基因表达的相关性。结果正常人PBMC中DNMT1表达的均值为0.289±0.092,CD11a基因表达的均值为0.430±0.143;SLE患者PBMC中DNMT1表达均值为0.167±0.046,CD11a表达均值为0.875±0.331。SLE患者PBMC中DN-MT1表达水平明显低于正常人(T=3.479,P=0.003);CD11a基因表达水平明显高于正常人(T=4.196,P=0.001)。在正常人PBMC中,DNMT1与CD11a基因的表达没有相关性;在SLE患者PBMC中DNMT1与CD11a基因表达呈负相关性(r=-0.714 53,P=0.046 4),DNMT1表达下降与CD11a表达增加有相关性。结论SLE患者PBMC中DNMT1表达降低可能是造成DNA低甲基化的一个重要原因,因而与CD11a基因的过度表达有重要关系,进而导致SLE的发病。因此可以推测DNMT1可能是SLE发病机制中一个重要的内源性因素。     

survivin及caspase-3基因在非小细胞肺癌中的表达和相关性

恶性肿瘤的发生是一个长期的多因素形成的分阶段的过程。包括癌基因的激活,肿瘤抑制基因的失活,以及凋亡调节和DNA修复基因的改变,其中对细胞的凋亡调节是分子肿瘤学中备受瞩目的课题,也对肿瘤的临床诊断治疗和预后有一定的指导意义。本文综述了凋亡基因caspase-3与凋亡抑制基因survivin在非小细胞肺癌中的表达及相关性。1Survivin1.1survivin基因的发现及结构:耶鲁大学的Altieri DC[1]利用效应细胞蛋白酶受体-1(effector cell protease receptor1,1,EPR1)cDNA在人类基因组库中筛选分离出来,survivin,序列分析表明:该基因位于染色体17…     

细胞核DNA图像分析及PSA检测在前列腺癌诊断中的应用

目的:探讨DNA图像分析技术及血清前列腺特异性抗原(PSA)水平检测在前列腺癌(PC)诊断中的应用价值。方法:应用计算机图像分析技术测定5例正常前列腺(NP)和30例PC的标本DNA倍体;应用ELISA方法检测30例PC患者血清中PSA。结果:5例NP中均为整倍体(2C和3-4C),30例PC中有23例出现非整倍体,并且随着PC分级的增高,其倍体率也增大;25例前列腺癌患者血清PSA值高于正常值。7例整倍体患者6例血清PSA不正常,5例PSA正常者中4例为非整倍体。结论:细胞核DNA含量和倍体及血清PSA的测定是反映前列腺癌细胞增殖分化能力的重要生物学指标,为正确诊断恶性肿瘤提供依据。     

乙型肝炎血清标志物和HBV-DNA定量关系探讨

为进一步探讨乙肝血清标志物HBV—M和HBV—DNA的相关性及临床价值，对我院收住的300例乙肝病人的乙肝血清标志物和HBV—DNA进行检测分析。 资料与方法 1 研究对象 选择本院2002年9月至2003年10月门诊及住院患者300例。其中，男性213例，女性87例，年龄8～63岁。就诊前未服用任何抗病毒药物，于就诊后当日抽取病人空腹静脉血分离血清后同时进行HBV—M和HBV—DNA的检测。     

精制冠心方水提部分工艺研究

目的筛选精制冠心方水提部分的最佳提取工艺。方法采用正交试验法,以出膏率、丹酚酸B、芍药苷的含量3个指标综合优选提取工艺中的加水量、煎煮次数、煎煮时间等因素。结果优化的提取工艺为每次加8倍量的水,浸泡0.3h,煎煮3次,每次2h。结论利用最佳工艺可尽可能多地提取出药材中的有效成分。     

喉癌遗传学研究现状

喉癌（1aryngeal carcinoma）是一种常见的上呼吸道恶性肿瘤。据JEMAL等报道，每4例头颈部肿瘤患者中就有1例是喉癌。肿瘤的发生是一个多因素参与的复杂过程。目前已知，在喉癌的发生演进过程中，除致癌环境这一外源性因素外，原癌基因的扩增、抑癌基因的失活或突变、错配修复基因的功能丧失等也起着重要的作用。本文将对喉癌的遗传学研究现状加以综述。     

外周血DNA提取方法的比较及改良

目的 对3种提取外周血的实验方法进行了比较，并建立一种简便、快速、有效的外周血基因组DNA的提取方法。方法 采用常规酚／氯仿提取法、碘化钾法和外周血液DNA提取法。结果 外周血液DNA提取方法提取外周血基因组DNA的纯度高，通过电泳图明显可见。结论 外周血液DNA提取简便、快速、有效适用于临床标本的研究。     

更年安胶囊提取工艺研究

目的:探讨更年安胶囊组方中部分中药的提取工艺。方法:采用正交设计,观察不同加水量(10倍,8倍,6倍)、煎煮次数(1次,2次,3次)、水煮提取时间(1h,2h,3h)对地黄、麦冬、丹参、茯苓、仙茅的干膏量的影响,和不同浓度乙醇(50％,60％,70％)、乙醇量(4倍,6倍,8倍)、渗漉速度(1mL／min,3ml／min, 5ml／min)对泽泻、牡丹皮、五味子、钩藤、首乌藤、何首乌的固形物量及大黄素含量的影响。结果:水煮提取时对干膏量的影响因素水平为煎者次数>加水量>煎煮时间,渗漉提取时对固形物量及大黄素含量的影响因素水平为乙醇浓度>乙醇量>渗漉速度。结论:综合各因素水平,确定地黄等6味中药水煮提取工艺是加10倍量水煎煮2次(第1次3h,第2次2h);何首乌等6味中药渗漉提取工艺是加8倍量60％乙醇以3ml／min的流速进行渗漉。     

焦炉工苯并(a)芘暴露水平及DNA遗传损伤特征分析

目的探讨焦炉作业工人苯并(a)芘暴露与外周血淋巴细胞DNA损伤的关系及其特征。方法选取343名焦炉工人和40名对照,应用彗星试验检测外周血淋巴细胞DNA损伤。分别采用定点采样和个体采样方法,使用高效液相色谱法测定环境苯并(a)芘浓度。利用调查表收集研究对象年龄、工龄、从事现工种时间、吸烟、饮酒、职业史等信息。结果定点采样,苯并(a)芘浓度呈现炉顶>炉侧>炉底>对照的趋势,分别为(1.26±0.65),(0.11±0.38),(0.02±0.003),0.01μg/m3。个体采样苯并(a)芘浓度呈现炉侧拦焦侧>炉顶>炉侧推焦侧>炉底>辅助工区>对照的趋势,分别为(1.43±0.06),(0.35±0.02),0.10,(0.05±0.007),(0.04±0.01),0.02μg/m3。焦炉工人外周血淋巴细胞慧星尾长(几何均数)分别为(16.94±2.59),(17.52±2.39),(10.78±2.48),(6.89±1.90),olive尾矩(几何均数)分别为(4.60±1.29),(4.57±1.17),(2.79±1.11),(1.61±0.56),炉顶工、炉侧工、炉底及辅助工均显著高于对照组,差异有显著性(P<0.05),炉顶工与炉侧工之间差异不显著(P>0.05),但均显著高于炉底及辅助工,差异有显著差异(P<0.05)。炉顶工、炉侧工、炉底及辅助工与对照相比,外周血淋巴细胞慧星尾长和olive尾矩阳性的危险度OR值分别为29.66,28.90,9.97和27.24,26.04,9.32,有随个体外暴露苯并(a)芘浓度增高而增高的趋势。结论焦炉工外周血淋巴细胞DNA遗传损伤与个体苯并(a)芘暴露趋势一致。环境个体采样及彗星试验可作为焦炉工人PAHS暴露和细胞遗传损伤的监测指标。