我国仙茅属植物遗传关系的RAPD分析

目的从分子水平研究我国仙茅属(Curculigo Gaertn.)植物的遗传关系。方法对我国仙茅属植物7个国产种30个单株进行RAPD分析。运用Popgene Version1.31软件计算相关参数,采用UPGMA聚类法进行聚类分析。结果 11个RAPD引物共扩增出157条带,其中有145条呈多态性。我国仙茅属植物的遗传多样性极为丰富,在物种水平上,多态位点百分率(PPB)为92.36%,平均每个位点的有效等位基因数(Ne)为1.493 7,Nei’s基因多样性指数(H)为0.300 1,Shannon’s多样性信息指数Hsp为0.457 7。在种内水平上,PPB=5.09%,Ne=1.036 6,H=0.020 4,种内Shannon’s多样性信息指数(Hpop)为0.029 8。Nei’s基因多样性指数计算的种间遗传分化系数(Gst=0.931 3)与Shannon’s分化系数(0.934 9)基本一致,均说明大部分遗传变异存在于种间。种间基因流(Nm)为0.036 9,说明种间基因流动较少,遗传分化程度较高。两种间的Nei’s遗传一致度(I)的范围为0.520 8～0.823 7。根据Nei’s遗传距离进行UPGMA聚类,基于RAPD分子标记的聚类结果与传统分类一致。结论我国仙茅属植物的遗传多样性十分丰富,且种间的遗传差异大于种内的遗传差异。     

仙茅补肾壮阳有效成分的初步研究及仙茅素A的含量测定

目的 初步研究仙茅补肾壮阳的有效成分,并测定其有效成分仙茅素A的含量.方法 采用大孔吸附树脂及反复常压硅胶柱层析分离纯化仙茅乙醇提取物,根据化合物的理化性质和光谱数据进行结构鉴定;采用HPLC法测定药材中仙茅素A的含量,色谱柱为Agilent C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-1%磷酸(21:79),流速1.0 ml·min-1,检测波长285 nm.结果 从仙茅中分得4个已知化合物,分别为仙茅苷、仙茅苷乙、仙茅素A及2,6-二甲氧基苯甲酸;仙茅索A的含量为0.0084%.结论 所用方法简便、可靠,可用于仙茅药材的质量控制.     

苔黑酚葡萄糖苷对L02细胞肝药酶CYP3A的调控作用研究

目的 观察苔黑酚葡萄糖苷对体外培养的正常肝细胞株L02中CYP3A的影响,探讨苔黑酚葡萄糖苷是否通过cAMP-PKA信号通路调控CYP3A的活性。方法 分别用cAMP-PKA信号通路中蛋白激酶A（PKA）激动剂环腺苷酸（cAMP）类似物8-溴-环腺苷酸（8-Br-cAMP）及其抑制剂H-89、苔黑酚葡萄糖苷干预L02细胞,MTT法检测细胞活力,完整细胞免疫组化法检测PKA蛋白表达,红霉素-N-脱甲基法检测CYP3A活性,Western blotting检测细胞中孕烷X受体（PXR）蛋白表达。结果 与对照组（加入不含药的无血清培养基）相比,苔黑酚葡萄糖苷处理后的细胞CYP3A的活性增强,PKA、PXR蛋白表达增强,与8-Br-cAMP的作用相似。结论 苔黑酚葡萄糖苷可通过cAMP-PKA信号通路调控CYP3A的表达,表明其可能是仙茅表现出辛热药性的主要成分之一。     

仙茅苯甲酸酯类酚苷对去卵巢骨质疏松大鼠的作用

目的：评价仙茅苯甲酸酯类酚苷（benzylbenzoate glucosides from Curculigo orchioides,COBG）对去卵巢大鼠的抗骨质疏松作用。方法：70只3月龄的Sprague-Dawley大鼠被随机分为正常对照组和去卵巢组。再将去卵巢大鼠分为6组,连续12周分别灌胃给予蒸馏水,1mg／kg尼尔雌醇,6、18和54mg／kgCOBG,3．0g／kg仙茅乙醇提取物。用双能X线吸收仪测定骨密度,并制备胫骨切片进行骨形态计量分析,采用试剂盒测定血清和尿的生化指标。结果：去卵巢大鼠骨质流失和骨组织结构退化显著,其血清碱性磷酸酶活性升高,尿钙排出增加,血清抗氧化物水平降低（P〈0．05,P〈0．01〉。6、18和54mg／kgCOBG使去卵巢大鼠骨密度显著增加,骨组织微结构得到改善,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的损耗减少,并抑制氧化产物丙二醛的增加,减少尿钙排出（P〈0．05,P〈0．01）。结论：COBG通过改善去卵巢大鼠的抗氧化状态防止骨丢失,COBG有可能成为防治绝经后骨质疏松的有效药物。     

高效液相色谱法测定金骨颗粒剂中仙茅苷的含量

目的 :高效液相色谱法测定金骨颗粒剂中仙茅苷的含量。方法 :本品以甲醇提取 ,提取物加水溶解后用醋酸乙酯萃取 ,萃取液进行高效液相色谱法分析。色谱柱AlltimaC1 8(5 μm ,4 6mm× 2 5 0mm) ,流动相为甲醇 -异丙醇 -水 (2 0∶5∶75 ) ,流速 :0 8mL·min- 1 ;柱温 :30℃ ;检测波长 :2 83nm。结果 :加样平均回收率为 98 6 8% ,RSD为 2 1% (n =5 )。结论 :实验结果表明 ,该法灵敏度高、专属性好、操作简便、重现性好。     

仙茅叶片的组织培养及其细胞学观察

目的通过对仙茅叶片组织培养的研究与细胞学观察,为仙茅的快速繁殖提供技术依据。方法将仙茅幼叶培养在MS培养基,通过设计不同的光照条件,附加不同的激素、水解酪蛋白和活性炭成分,调查出愈率和成苗率。细胞学观察采用石蜡切片法。结果对仙茅叶片的愈伤诱导,黑暗的效果好于光照;在所试验的培养基成分中,适宜的激素配比是2.0mg/L2,4-D或6-BA1.5mg/L 2,4-D2.5mg/L,并且附加300mg/L水解酪蛋白和0.2%活性炭,对于仙茅叶片的离体成苗较好;培养后,愈伤组织主要由叶片的中脉产生,位于中脉上表皮内侧的薄壁细胞首先启动分裂,随后维管束鞘薄壁细胞及其外侧的叶肉细胞也启动分裂,参与愈伤组织的形成。愈伤分化时,芽发生于愈伤组织的表面,根发生于愈伤组织的内部。结论可以通过仙茅幼叶的组织培养进行仙茅的快速繁殖。     

Norlignan derivatives from <Emphasis Type="Italic">Curculigo crassifolia</Emphasis> and their DPPH radical scavenging activity

A novel norlignan derivative, crassifogenin C (1), and a known compound, curcapital (2), were isolated from the ethanolic extract of the rhizomes of Curculigo crassifolia. Their structures were elucidated on the basis of spectroscopic evidence and comparisons with literature data. Curcapital (2) was isolated from this plant for the first time. The free radical scavenging activity of the isolated compounds along with crassifoside E (3) and crassifoside F (4), which were reported previously, was evaluated by the 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) assay. All compounds showed strong radical scavenging activity. The primary structure-activity relationship is also discussed.     

仙茅多糖对小鼠免疫功能影响的实验研究

目的 研究仙茅多糖对免疫功能的影响.方法 正常小鼠给予仙茅多糖30d,称重,处死,取其脾和胸腺,用滤纸吸干表面血污,称重,记录数据,分别测定脾指数、胸腺指数、24h足跖增厚及血清溶血素来评价仙茅多糖对小鼠的免疫功能的影响.结果 仙茅多糖能提高正常小鼠的脾指数级胸腺指数,增厚足跖厚度,增加血清血溶素.结论 仙茅多糖具有增...     

仙茅提取物对小鼠成骨细胞增殖的影响

目的观察仙茅对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖的影响。方法将稀释成不同梯度浓度的仙茅提取物与成骨样细胞MC3T3-E1共同体外培养,以四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞的增殖。结果仙茅低浓度组(1∶1500)增殖率为6.0%,对MC3T3-E1细胞增殖没有影响;中浓度组(1∶1000)增殖率21.7%,对细胞增殖影响明显(P<0.05);高浓度组(1∶500)增殖率是51.9%(P<0.05);极高浓度组(1∶250)增殖率是66.3%(P<0.01)。结论在体外,仙茅提取物能明显促进MC3T3-E1细胞的增殖。     

用D101大孔吸附树脂富集仙茅中苯甲酸酯类酚苷的工艺研究

目的:研究用D101大孔吸附树脂富集仙茅中苯甲酸酯类酚苷的纯化工艺。方法:以仙茅苷乙和仙茅苷的吸附量和解吸附率为指标,考察了D101大孔吸附树脂对仙茅中苯甲酸酯类酚苷的静态和动态吸附及解吸附性能。结果:D101大孔吸附树脂富集仙茅中苯甲酸酯类酚苷的最佳工艺条件如下:吸附时间为8h,药液pH值为6,洗脱溶剂pH值为8,上样吸附和洗脱均在室温下进行,药液中苯甲酸酯类酚苷浓度为0.22mg/ml为最佳上样浓度,吸附流速为2.5Bv/h,洗脱溶剂为30%乙醇,洗脱剂用量为12Bv,二次纯化样品中苯甲酸酯类酚苷浓度为0.17mg/ml。结论:本纯化工艺简单、稳定,能将仙茅中仙茅苷和仙茅苷乙的总含量从0.022%的平均含量提高到1.60%,经二次纯化含量能达到5.08%。