血吸虫感染鼠血清SEAIC水平与肝脏病变关系的动态观察

采用分离纯化的兔抗ＳＥＡ－ＩｇＧ以生物素－亲和素放大系统，用ＣａｐｔｕｒｅＥＬＩＳＡ方法检测感染血吸虫鼠血清中抗ＳＥＡ循环免疫复合物（ＳＥＡＩＣ）水平在感染后各周的动态变化；并在观察肝脏病变的同时，采用图像分析技术，动态测定各周肝内虫卵肉芽肿的直径和面积。结果表明，血清ＳＥＡＩＣ在感染后４ｗｋ即可检出，６－７ｗｋ时达高峰，以后有所下降，但至实验观察结束时（１２ｗｋ）仍维持在较高水平。感染后４ｗｋ，肝组织内发现虫卵，但到５ｗｋ时尚未形成虫卵肉芽肿病变，至６ｗｋ时，肝内形成巨大的虫卵结节，其直径和面积于７ｗｋ时达高峰，此后逐渐下降，其动态变化与血清ＳＥＡＩＣ水平的动态变化相吻合，表明血清ＳＥＡＩＣ水平的高低可以作为反映肝脏病变程度的指标，并提示ＳＥＡＩＣ在日本血吸虫病的免疫发病机理中可能起重要作用。     

日本血吸虫(大陆株)14-3-3 epsilon同型信号转导蛋白诱导小鼠保护性免疫的研究

目的：探索日本血吸虫新的疫苗候选分子对小鼠的保护性免疫效果。方法：利用已构建的真核表达质粒pBK-Sj14-3-3在大肠杆菌ＢＬ２１内表达的日本血吸虫（大陆株）14－3－3epsilon同型融合蛋白质，免疫6周龄BALB／c雌性小鼠，免疫3次，每次间隔2周，第3次免疫后2周感染尾蚴。42d后剖杀小鼠，计算其减虫率和肝减卵率。结果：各免疫组与对照组相比，均获得了部分抗血吸虫保护性免疫力，第1、2、3各免疫组的减虫率分别为32．7％（P＜0．05）、30．7％（P＜0．05）、27．5％（P＜0．05）；其肝减卵率分别是48．5％（P＜0．05）、43．1％（P＜0．05）、28．2％（P＜0．05）。结论：首次证明日本血吸虫14－3－3epsilon同型重组融合蛋白可诱导小鼠抗血吸虫感染的部分保护性免疫力。     

日本血吸虫卵在粪便中分布特点的研究

本文采用Kato－Katz法，首次对日本血吸虫病患者粪便的内、外层及混匀样本各作50张涂片定量检查。结果各感染度患者粪便虫卵平均数均以外层显著高于内层，混匀后虫卵数居两者之间；每视野虫卵平均数亦均以外层高于内层，混匀后居中。各感染度粪便的内、外层均以前段粪便虫卵平均数多，中段次之，尾段明显减少。虫卵在低感染度粪便内、外层的分布一般为poisson分布。这一特点为Kato－Katz法的取样和准确定量感染度提供了参考依据。     

McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA检测尿中循环抗原诊断日本血吸虫病的研究

通过建立的冰冻—加热浓缩法,将尿样浓缩20倍。应用 McAb-RIHA 和 McAb-Dot-ELISA 平行对比检测了83份急性血吸虫病患者和110例慢性血吸虫病尿样。前者两法的阳性检出率分别为78.31%和65.06%。后者两法的阳性检出率分别为20%和10%。检测101份健康人尿样。两法的假阳性率分别为14.85%和0%。应用 McAb-RIHA 和 McAb-Dot-ELISA对比检查55份华枝睾吸虫病患者和49份钩虫病患者尿样,前者出现的交叉反应率分别为16.36%和14.28%。后者出现的交叉反应率均为0%。12例尿路感染病人中5例含有蛋白的尿样加热前 McAb-Dot-ELISA 检测均阳性,而经76℃2h 加热后均为阴性。     

日本血吸虫性别特异性候选基因的生物信息学分析

目的运用生物信息学方法对日本血吸虫性别特异性候选基因SJCHGCD6309（登录号为AY813032）进行分析,为该基因的进一步研究奠定基础。方法利用“数据库消减杂交”（DigitalDifferentialDisplay,DDD）方法筛选出在日本血吸虫雄虫中特异表达的候选基因AY813032,使用生物信息学软件分析该基因的开放阅读框（ORF）,细胞定位、蛋白序列等特征,并预测该基因的结构和功能。结果AY813032蛋白由287个氨基酸编码,属于Cwfl5／Cwcl5结构域家族,定位于细胞核,有8个磷酸化位点,理论等电点（pI）为5．10,分子量为32．17kDa,该蛋白在日本与曼氏血吸虫之间具有较高保守性。结论AY813032基因为日本血吸虫性别特异性候选基因,可能与日本血吸虫性别发育相关。     

Three new Lycopodium alkaloids from Lycopodium japonicum

Three new Lycopodium alkaloids (1–3), together with 15 known alkaloids, were isolated from club moss Lycopodium japonicum. Their structures were determined by extensive spectroscopic analysis, including 1D and 2D NMR spectra. Compound 1 has an unusual β-oriented methyl group substituted at C-15 and an α-hydroxy cyclopentenone moiety. All new alkaloids were evaluated for the inhibition of T-type calcium channel.     

基于ITS序列PCR-RFLP鉴别大蓟药材及饮片中掺伪飞廉、魁蓟的方法研究

[目的]利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）,建立快速鉴别大蓟混伪品飞廉和魁蓟的方法。[方法]通过比对ITS基因序列,分别筛选飞廉、魁蓟的限制性内切酶位点并设计鉴别引物。考察PCR反应的退火温度、循环数及不同酶的适用性,对酶切反应时间和酶切底物量进行优化。同时对该方法适应性及掺伪比例的专属性、稳定性进行考察。[结果]当退火温度为58～60℃、循环数为30个时,样品均能扩增出一条379 bp的DNA条带。底物为8μL、酶切温度为37℃、酶切反应120 min时,ZraI酶将飞廉切割成120 bp和259 bp两条DNA条带;DNA底物为8μL、酶切温度为37℃、酶切反应60 min时,ApaLI酶将魁蓟切割成126 bp和253 bp两条DNA条带。[结论]试验建立的PCR-RFLP方法能够准确地鉴别大蓟混伪品飞廉、魁蓟,避免此类药材的混用,以保证临床用药安全。     

Effect of Aqueous Cinnamon Extract on the Postprandial Glycemia Levels in Patients with Type 2 Diabetes Mellitus: A Randomized Controlled Trial

Cinnamon is a spice used in traditional cuisine that has been investigated due to hypoglycemic properties. The objective of this study was to investigate the effect of aqueous cinnamon extract on postprandial glycemia levels in type 2 diabetes mellitus (DM2) adults. This clinical trial enrolled 36 adults with DM2, randomly allocated in two groups: the control group (n = 18) took only an oral glucose tolerance test (OGTT) and the intervention group (n = 18) took OGTT immediately followed by aqueous cinnamon extract (6 g/100 mL) ingestion. Blood glucose levels were measured on fasting and after 30, 60, 90 and 120 min in both groups. The chemical analysis of the aqueous cinnamon extract included total phenols content determination and antioxidant activity assessment through FRAP and DPPH methods. The data reveal that aqueous cinnamon extract ingestion did not show a significant difference in the incremental area under the curve (p = 0.834), maximum glucose concentration (p = 0.527) and glucose concentration variation (p = 0.873) compared with the control group. Cinnamon extract possess a total phenol content of 1554.9 mg/L gallic acid equivalent and a strong antioxidant capacity, revealed by the DPPH (5125.0 µmol Trolox/L) and FRAP (3658.8 µmol Trolox/L) tests. Aqueous cinnamon extract did not significantly influence postprandial glucose response in diabetic patients during an OGTT.     

日本血吸虫双价DNA疫苗体内外表达及持续时间的初步研究

目的观察日本血吸虫双价DNA疫苗在体内外表达及体内表达的持续时间。方法将构建的共表达日本血吸虫双价核酸疫苗pVIVO2-SjFABP/Sj23瞬时转染HEK-293细胞,通过逆转录(RT-PCR)和间接免疫荧光试验(IFAT)检测真核细胞中SjFABP和Sj23基因及蛋白的表达。质粒经股四头肌注射免疫BALB/c小鼠12只,每月眼眶采血,并活体灌流小鼠2只,IFAT检测重组蛋白的原位表达,Westernblot法检测血清中特异性抗体,持续观察6个月。结果RT-PCR和IFAT证明质粒pVIVO2-SjFABP/Sj23能在体外表达。免疫后连续6个月,IFAT均检测到小鼠骨骼肌注射部位重组蛋白的原位表达,但Westernblot未检测到血清中特异性抗体的存在。结论日本血吸虫双价DNA疫苗在HEK-293细胞和小鼠骨骼肌中均能够正确地表达,体内表达持续时间至少在6个月以上。     

日本血吸虫重组线粒体相关蛋白免疫学活性鉴定

分子筛进一步纯化并复性的融合蛋白均能刺激家兔产生特异性抗体 ,粗提包涵体蛋白免疫家兔 ,血清抗体滴度为 1∶2 5 6 0 0 ,复性蛋白及经分子筛纯化的蛋白免疫的家兔血清抗体滴度均为 1∶5 12 0 0 ,Westernblot结果显示 ,粗提包涵体蛋白、复性蛋白及经过分子筛进一步纯化并复性的蛋白均能被重感染兔血清和rSj338/2 6GST特异性免疫兔血清所识别。攻击实验中 ,粗提包涵体蛋白和经分子筛纯化的蛋白分别可诱导小鼠产生 2 7.8% (P <0 .0 1)和 30 .4 % (P <0 .0 1)的减虫率 ,4 0 .4 % (P <0 .0 1)和 4 3.5 % (P <0 .0 1)肝总减卵率。粗提包涵体蛋白中rSj338和经分子筛纯化的蛋白中rSj338分别可诱导小鼠产生 13.9% (P <0 .0 5 )和 2 0 .0 % (P <0 .0 5 )的减虫率 ,30 .0 % (P <0 .0 1)和 4 1.7% (P <0 .0 1)肝总减卵率。结论　获得的日本血吸虫线粒体相关的重组融合蛋白(rSj338/2 6GST)具有良好的免疫学活性 ,重组融合蛋白 (rSj338/2 6GST)及rSj338均可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力。