骨化三醇对高糖诱导的肾小管上皮细胞肾素高表达的影响

目的探讨骨化三醇对高糖状态下肾小管上皮细胞肾素表达的影响及其机制。方法按随机数字表法将24只6~8周龄Wistar大鼠随机分为对照组、糖尿病组、骨化三醇组(0.03μg·kg~(-1)·d~(-1)),各组8只。16周后处死各组大鼠,检测尿蛋白、尿肌酐、内生肌酐清除率(endogenous creatinine clearance rate,CCr),并应用实时荧光定量法(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测肾脏组织肾素及磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellularsignal-regulated kinase,p-ERK)/细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulated kinase,ERK)表达情况。NRK-52E细胞分组:①正常对照组;②高糖组(糖浓度为25 mmol/L,不同时间点);③高糖+骨化三醇(10~8 mol/L、10~9 mol/L、10~10 mol/L)组;④高糖+ERK抑制剂(FR18020410~5 mol/L)组。RT-PCR法检测肾素mRNA表达,Western印记法检测肾素蛋白、p-ERK/ERK蛋白表达。结果与对照组比较,糖尿病组大鼠尿β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)、尿白蛋白/尿肌酐升高(P0.05),CCr降低(P0.05);与糖尿病组比较,骨化三醇组大鼠尿β2-MG、尿白蛋白/肌酐降低(P0.05),CCr升高(P0.05)。与对照组比较,糖尿病组大鼠肾组织肾素、p-ERK/总ERK表达均明显升高,骨化三醇能显著减轻糖尿病大鼠上述蛋白的高表达(P0.05)。高糖可诱导NRK-52E细胞ERK蛋白磷酸化(P0.05),诱导肾素mRNA及蛋白表达上调,并呈时间依赖性(P0.05)。骨化三醇可浓度依赖性地降低高糖诱导的NRK-52E细胞ERK蛋白磷酸化及肾素mRNA、蛋白的高表达(P0.05)。ERK抑制剂能部分抑制高糖诱导的肾素蛋白高表达(P0.05)。结论骨化三醇降低糖尿病大鼠蛋白尿,具有肾脏保护作用,其机制可能与抑制ERK通路降低高糖诱导的肾素高表达有关。     

骨化三醇对人牙周膜细胞维生素D受体、RANKL和骨保护因子表达的调节

目的 探讨骨化三醇(又称1α,25-二羟维生素D3,以下简称VD3)对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand,RANKL)和骨保护因子(osteoprotegerin,OPG)表达的调节作用及相关机制.方法 原代培养12个供体来源的hPDLC群,传代培养至第3代,分别以10-8 mol/L VD3(VD,组)和0.1%无水乙醇处理(对照组),6 d后用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测VDR、RANKL和OPG mRNA的表达水平.分析12个细胞群RANKL基因转录起始位点上游调控区DNA碱基序列.结果 VD3组与对照组相比,VDR mRNA表达水平显著上调(P=0.003),为对照组的(3.04±1.06)倍;RANKL mRNA表达水平显著升高(P=0.001),为对照组的9.82(0.75～119.18)倍;OPG mRNA表达水平为对照组的(94.48±39.15)%,P=0.136;OPG/RANKL比值显著下调(P=0.003),为对照组的10.36%(1.01%～138.00%).未发现RANKL基因上游调控区序列突变位点;-1832(m7984870,C/G)多态性位点基因型与RANKL mRNA的表达和调节之间无显著相关性.结论 在hPDLC中,VD3可以促进VDR mRNA的表达;VD3可显著上调RANKL mRNA的表达从而降低OPG/RANKL比值,而对OPG mRNA的表达水平影响较小.在VD3作用下,细胞群间RANKL mRNA表达的差异性可能与RANKL基因上游调控区碱基序列无关.     

不同剂量骨化三醇对继发性甲状旁腺功能亢进症的远期疗效

目的 观察继发性甲状旁腺功能亢进症患者给予不同剂量骨化三醇治疗的远期疗效。方法 选择2018年3月至2019年3月就诊于我院的92例继发性甲状旁腺功能亢进症患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和观察组,每组各46例,其中对照组给予常规剂量骨化三醇治疗,0.25μg/次,1次/d,观察组给予骨化三醇冲击治疗,血透日给药2μg/次,3次/周,两组患者均治疗3个月后进行为期1年的随访观察,对比两组患者治疗前后症状改善情况、血钙、血磷、钙磷乘积、甲状旁腺激素(PTH)水平。结果 观察组患者症状改善率为91.30%,显著高于对照组的71.74%,差异有统计学意义(P0.05);两组治疗前、治疗后6个月、12个月血钙、血磷、钙磷乘积水平比较,差异无统计学意义(P0.05),两组治疗后6个月、12个月血钙、血磷、钙磷乘积水平均较治疗前升高,差异有统计学意义(P0.05);观察组治疗后6个月、12个月PTH水平均低于治疗前,且明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 继发性甲状旁腺功能亢进症患者给予不同剂量骨化三醇均可导致血钙、血磷代谢受到影响,但采用骨化三醇冲击治疗的患者可以有效改善临床症状,纠正PTH水平,疗效值得肯定。     

骨化三醇对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素转换酶与血管紧张素转换酶2的影响

目的观察血管紧张素转换酶（angiotensinconvertingenzyme,ACE）和血管紧张素转换酶2（angiotensinconvertingenzyme2,ACE2）在糖尿病大鼠肾脏的表达及骨化三醇对其的影响。方法6～8周龄Wistar大鼠被随机分为3组,分别为对照组、糖尿病组、骨化三醇组（O．03μg·kg-1·d-1）。16周后处死各组大鼠,留取标本。放射免疫法检测尿胆微球蛋白（p2-microglobulin,p2-MG）、尿白蛋白（urinaryalbumin,Alb）、血全段甲状旁腺素（intactparathyrin,iPTH）;分光光度法检测尿肌酐（urinecreatinine,UCr）;苦味酸法检测血肌酐（serumcreatinine,SCr）;全自动生化仪检测血钙（Ca）和血磷（P）。PAS染色观察肾脏病理改变并进行半定量统计学分析。实时定量基因扩增荧光（quan—titativepolymerasechainreaction,QPCR）检测肾脏中ACE和ACE2mRNA表达。免疫组织化学法检测肾脏中ACE和ACE2蛋白表达。结果与糖尿病组相比,骨化三醇组尿陀一MG、尿Alb／UCr降低（P〈0．05）,内生肌酐清除率（endogenouscreatinineclearancerate,CCr）升高（P〈O．05）。各组大鼠血Ca、血P及iPTH差异无统计学意义（P〉0．05）。PAS病理染色及半定量分析结果提示,与糖尿病组相比,骨化三醇组大鼠肾脏肾小球硬化程度及肾小管间质纤维化程度有所减轻（P〈0．05）。与对照组比较,糖尿病组大鼠肾脏ACE与ACE2mRNA和蛋白表达均升高（P〈O．05）,ACE／ACE2升高（P〈0．05）。与糖尿病组比较,骨化三醇组大鼠肾脏ACEmRNA和蛋白的表达降低（P〈O．05）,ACE2mRNA和蛋白的表达升高（P〈（）．05）,ACE／ACE2降低（P〈0．05）。相关分析结果显示,尿82-MG、Alb／ucr与ACE／AcE2呈正相关（P〈0．05）,CCr与ACE／ACE2呈负相关（P〈0．05）。结论骨化三醇降低糖尿病大鼠蛋白尿、升高CCr,改善病理损伤,其肾脏保护作用可能与调节ACE和ACE2的表达有关。     

慢性肾脏病甲状旁腺素与贫血的相关性研究

目的：探讨慢性肾脏病（ CKD ）甲状旁腺素（ PTH ）与肾性贫血的关系。方法测定126例CKD3～5期患者血PTH、血红蛋白（ Hb）、红细胞比容（ Hct）、尿素氮（ BUN）、肌酐（ Cr）水平及维持性血液透析（MHD）患者42例经重组人促红细胞生成素（rhEPO）、骨化三醇-1．25（OH）2D3治疗3个月后变化。结果CKD3期PTH明显升高,CKD4期、CKD5期升高更显著;血PTH与BUN、Cr呈线性正相关（P＜0．01）,与内生肌酐清除率（Ccr）、Hb呈线性负相关（P＜0．01）。 MHD患者经rhEPO、1．25（OH）2D3治疗3个月后,根据Hct变化,治疗有效73．8％,无效26．2％。有效组与无效组比较PTH、Hb、Hct差异均有统计学意义（P＜0．01）,且PTH下降,Hb、Hct升高。结论 CKD患者随着肾功能下降,血PTH升高。高PTH血症加重肾性贫血且使EPO疗效差,1．25（OH）2D3能降低高PTH血症,随高PTH血症的纠正,肾性贫血得到改善。     

Evaluation of the first Ergocalciferol-derived, non hypercalcemic anti-cancer agent MT19c in ovarian cancer SKOV-3 cell lines

Objective

In human trials calcitriol and its analogs displayed unacceptable systemic toxicities including hypercalcemia. This study was designed to evaluate a novel non-hypercalcemic vitamin-D derivative (MT19c) and its anticancer effects in cultured ovarian cancer cell model.

Methods

We modified the Ergocalciferol structure to generate MT19c, a heterocyclic vitamin-D derivative. Hypercalcemic liabilities of MT19c were assessed by estimating the blood calcium levels in drug treated animals. VDR agonistic or antagonistic properties of MT19c were determined via a VDR-coactivator binding assay. The anticancer effects of MT19c were evaluated by (i) cytotoxicity studies in cancer cell lines and the National Cancer Institute (NCI₆₀) cell lines, (ii) identification of apoptosis markers by microscopy and western blots, (iii) cell cycle analysis, and (iv) by studying the insulin receptor substrate-1/2 (IRS1/2) signaling in ovarian cancer cells (SKOV-3) by western blotting.

Results

MT19c treatment did not cause hypercalcemia in mice and showed minor VDR antagonistic activity. In a NCI₆₀ screen MT19c revealed cell-type specific growth inhibition. MT19c displayed superior cytotoxicity to cisplatin, calcitriol, EB1089 and Iressa in SKOV-3 cell-lines and was comparable to Taxol in our in vitro assays. In SKOV-3 cells MT19c showed caspase dependent apoptosis, DNA fragmentation and cell cycle arrest. MT19c did not alter VDR but downregulated the IGFR/IRS-1/2-MEK-ras-ERK1/2-pathway via activated TNFα-receptor/SAPK/JNK component.

Conclusion

Our results demonstrate how structural optimization of the vitamin-D scaffold leads to identification of a non-hypercalcemic compound MT19c which exerts cytotoxicity in vitro based on a VDR-independent signaling pathway and displays potent anti-cancer activity in ovarian cancer cell models.     

骨化三醇联合贝那普利治疗膜性肾病的疗效观察

目的研究骨化三醇联合贝那普利治疗膜性肾病的临床效果。方法选取2014年3月—2015年2月在石家庄市第一医院肾内科接受治疗的膜性肾病患者80例,随机分为对照组和治疗组,每组各40例。对照组口服盐酸贝那普利片,10 mg/次,1次/d,若疗效不佳,可增加至20 mg。治疗组在对照组治疗基础上口服骨化三醇胶丸,0.25μg/次,1次/d。两组均连续治疗8周。观察两组的临床疗效,同时比较两组治疗前后血清白蛋白、24 h尿蛋白、血浆纤维蛋白原、收缩压、舒张压的变化情况。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为77.5%、90.0%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,两组24 h尿蛋白、血浆纤维蛋白原、收缩压、舒张压均显著降低,血清白蛋白显著升高,同组治疗前后差异有统计学意义(P0.05);治疗后治疗组这些观察指标的改善程度优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论骨化三醇联合贝那普利治疗膜性肾病具有较好的临床疗效,可降低患者的尿蛋白和血压,提高血清白蛋白,具有一定的临床推广应用价值。     

骨化三醇治疗甲亢性骨质疏松症50例临床分析

目的观察骨化三醇治疗甲亢性骨质疏松症的临床疗效。方法应用骨化三醇对50例甲亢性骨质疏松症患者进行治疗,观察治疗前后患者骨密度（BMD）、疼痛指数及Barthel指数的变化情况。结果经治疗后,所有患者BMD、疼痛指数及Barthel指数均较治疗前明显好转,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论骨化三醇治疗甲亢性骨质疏松症疗效肯定。     

胃癌及其癌旁黏膜中维生素D受体的表达

目的探讨胃癌组织中维生素D受体(VDR)的表达,并与癌旁正常胃黏膜组织比较。方法采用免疫组化方法,检测75例胃癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中VDR表达。结果胃癌组织中VDR表达显著低于正常胃黏膜(P<0.05)。癌组织中VDR的表达在不同年龄、性别、TNM分期、组织学分型、浸润深度、淋巴结转移之间差异无统计学意义。VDR表达与癌组织分化程度有关,高、中、低分化3组VDR表达依次降低,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 VDR表达可以作为判断胃癌分化程度的依据之一。     

骨化三醇对1～2期慢性肾脏病患者微炎症状态的影响

目的探讨慢性肾脏病1～2期患者是否存在微炎症状态以及骨化三醇对其影响。方法选取诊断明确的门诊或住院的1～2期慢性肾脏病患者78例,按照随机数字表分为对照组和观察组,对照组采用常规药物治疗,观察组在常规药物治疗的基础上加用骨化三醇治疗,0.5μg/次,1次/d,疗程均为12周;另选择体检中心20例健康者作为正常组,治疗前后比较3组受检者的血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及营养学指标(血清清蛋白、前清蛋白、血红蛋白)及24 h尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮、钙离子、甲状旁腺激素(PTH)水平的变化。结果与正常组比较,1～2期慢性肾脏病患者(观察组和对照组)血清hs-CRP、IL-6、TNF-α水平均明显升高,而营养学指标(血清清蛋白、血红蛋白)降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。经骨化三醇治疗后,观察组患者的hs-CRP、IL-6、TNF-α水平与治疗前及对照组治疗后相比,均明显降低,血清清蛋白、前清蛋白升高,差异均有统计学意义(P<0.05),而对照组患者治疗前后上述各指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。3组受检者的血肌酐、血红蛋白、PTH水平治疗前、治疗后比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论慢性肾脏病1～2期患者存在微炎症状态,骨化三醇治疗可以显著改善其微炎症状态和营养状态、降低尿蛋白量。