ras p21及p53基因的表达与胃癌生物学行为关系的探讨

应用SP免疫组化法检测1980～1989年存档的33例胃癌及其癌旁组织石蜡包埋标本的ras p21和p53基因表达情况,并与临床、病理和随访资料进行对比分析。结果显示:胃癌标本的ras p21阳性表达7例(21.21％),p53蛋白的阳性表达11例(33.33％)。ras p21的阳性表达与病理类型、性别、年龄、民族以及肿瘤部位无关,但肿瘤浸润深度及有无淋巴结转移与ras p21阳性表达之间显著相关。生存不足1年组的ras p21表达阳性率(50％)明显高于1～5年组(22.22％)和5年以上组,表明P21蛋白的表达与胃癌的浸润、进展和预后有关,提示ras p21的检测有可能成为胃癌预后指标,并有指导临床治疗的意义。p53蛋白的表达与患者的临床病理状况无显著相关,提示p53基因的改变可能主要发生在癌变早期,对胃癌的发生起关键作用,但并不影响胃癌细胞的生物学行为。p~53蛋白的表达与ras p~21蛋白表达之间无明显关系。     

Bcl-xL反义寡核苷酸对裸鼠人鼻咽癌移植瘤化疗药物敏感性的影响

目的观察Bcl-xL反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠人鼻咽癌移植瘤化疗药物顺铂敏感性的影响.方法建立裸鼠人鼻咽癌移植瘤模型,分为对照组、ASODN治疗组、顺铂(DDP)治疗组、ASODN DDP联合治疗组,观察裸鼠瘤体变化及组织形态学改变.结果单独应用ASODN和DDP治疗组的抑瘤率分别为14.2%和30.9%,而在相同条件下,联合用药组效果最明显,抑瘤率为52.2%,较ASODN、DDP单独应用差异有显著性.结论 ASODN与DDP联合化疗有协同作用,ASODN可以提高肿瘤细胞对顺铂的敏感性,具有增效作用.     

人白细胞介素2重组逆转录病毒载体的构建与表达

通过RT-PCR克隆到含有全部编码序列的人IL-2 cDNA,并经核苷酸测序加以证实。将其克隆至逆转录病毒载体pLXSN,构建成人IL-2的重组逆转录病毒表达载体pLXSN-hIL2,体外经CRIP细胞包装后病毒滴度达7.6×10~5CFU/ml。NIH3T3小鼠成纤维细胞感染hIL-2重组逆转录病毒后,分泌IL-2水平达118.2U/ml;PCR从其基因组DNA中扩增到NeoR基因片段,提示重组逆转录病毒载体己整合至宿主细胞的基因组DNA中。本研究为开展人IL-2基因治疗奠定了基础。     

胞苷脱氨酶基因对小鼠大剂量化疗的保护作用

Objective:To explore the feasibility of transfecting cytidine deaminase(CD)gene into mouse bone marrow cells in order to observe the drug resistance of high dose Ara-C and improve the tolerance of myelosuppression following combination chemotherapy.Methods:Human cytidine deaminase gene was transfected into mice bone marrow cells by retroviral vector.Resistant colony-forming unit granulocyte-macrophage(CFU-GM)assay was performed after the transfected mice bone marrow cells treated by the Ara-C.DNA was extracted from mice bone marrow cells.The drug resistant gene in mice bone marrow cells after transfection was detected by PCR.Results:Bone marrow cells of lhe donor mice cultured with lhe retroviral producer cells showed the drug resistant colonies and resistance to Ara-C,so did accept mice transplanted with the CD gene(CFU-GM of donor mice was 52%,X2=124.62,P＜0.01:accept mice was 54%,X2=126.26.P＜0.01,both compared with the contrast group).The animal survival rate was significantly higher in gene transfected group than that of the control(X2=7.42.P＜0.01).CD gene of transfected bone marrow cells was confirmed by PCR.Conclusion:CD gene can be transfected into bone marrow cells of mice efficiently and increase the drug resistance to Ara-C.     

双靶向组织特异性HSV-tk/GCV抗瘤系统的构建及体外效应研究

目的：构建高靶向性基因转移及表达系统，并研究其介导HSVtk/GCV自杀基因系统对肝癌细胞的体外杀伤作用。方法： 通过重组技术分别构建antiTfR ScFvGAL4融合蛋白表达载体ScFvGAL4pET28a及含AFP启动子、GAL4特异性识别序列（GAL4rec）的HSVtk真核表达载体pEBAF/tkGAL4rec。IPTG诱导后，利用受体介导内吞作用介导pEBAF/tkGAL4rec质粒转染表面均高表达TfR的人肿瘤细胞株HepG2，SMMC7721及A549。潮霉素筛选后，MTT法检测GCV对它们的杀伤作用。结果：双酶切鉴定、SDSPAGE电泳及测序分别证明antiTfR ScFvGAL4融合蛋白及重组pEBAF/tkGAL4rec真核表达质粒构建成功。体外杀伤实验中，高分泌AFP(845 ng/ml) 的HepG2/tk细胞对GCV很敏感，且抑制率与GCV浓度及作用时间呈正相关；而低分泌AFP(2 ng/ml)的SMMC7721/tk细胞对GCV低度敏感；不分泌AFP 的A549/tk细胞则不敏感。结论：双靶向组织特异性HSVtk/GCV抗瘤系统构建成功，并显示出很好的靶向性。     

Correlation analysis of intestinal flora and pathological process of type 2 diabetes mellitusOA

Objective: To observe the relationship between the different stages of type 2 diabetes mellitus(T2DM)and the intestinal flora and verify its underlying mechanism.Methods: T2DM rats were generated by high-fat diet(HFD) combined with intraperitoneal streptozotocin(STZ) injection. The rats were divided into four groups: the control group(fed with normal feed for1 month), the HFD group(fed with HFD for 1 month), the T2DM group(HFD combined with STZ and blood glucose ≥11.1 m M), and the unformed T2DM...     

骨形态发生蛋白-7真核表达载体的构建及其在MC3T3-E1细胞中的表达

目的构建一个能在MC3T3-E1细胞中表达骨形态发生蛋白-7（bmp-7）基因表达载体。方法采用RTPCR技术从人胚肾中扩增人bmp-7基因,将获得的基因定向插入pcDNA3.1（+）真核表达质粒中,测序正确后用脂质体将表达质粒转染入MC3T3-E1细胞,转染后72 h提取细胞全蛋白,采用Western blot检测BMP-7蛋白表达。结果通过基因测序表明获得的bmp-7与GeneBank登录的序列一致,构建的质粒为bmp-7/pcDNA3.1（+）质粒,Westernblot检测结果表明bmp-7基因转染MC3T3-E1后能在细胞中表达。结论成功构建能在MC3T3-E1细胞中表达BMP-7的真核表达载体。     

人参皂甙Rb1对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1,GRb1)对大鼠脑缺血再灌注时神经细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响,探讨GRbl的神经保护作用机制。方法阻塞大鼠大脑中动脉2 h制备脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为缺血再灌注组(I/R组)和GRbl给药组(GRb1组),GRb1组大鼠在再灌注后立即腹腔注射GRb1(40 mg/kg)。两组再按不同的再灌注时间(3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和10 d,每时间点4只)分为7个亚组。分别用HE染色、TUNEL染色和免疫组化染色观察神经组织病理改变、细胞凋亡、Bcl-2和Bax的表达。结果与I/R组相比,GRb1能减轻缺血侧脑组织的病理改变,减少神经细胞凋亡数(12 h、1 d、2 d和3 d时P<0.05),上调Bcl-2阳性细胞数(12 h、1 d、3d、5 d和10 d时P<0.05)和降低Bax阳性细胞数(3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和10 d时P<0.05)。结论GRbl对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制与抑制神经元凋亡、促进Bcl-2表达和抑制Bax表达有关。     

载脂蛋白A5基因-1131T/C多态性与2型糖尿病血脂及其颈动脉内膜中层厚度相关性研究

目的 探讨载脂蛋白A5基因(ApoA5)-1131T/C多态性与成都地区汉族人群2型糖尿病(T2DM)患者血脂及其颈动脉内膜中层厚度(IMT)的关系.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术,分析154例T2DM患者和206例正常对照者ApoA5基因一1131T/C多态性.酶法测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C).颈动脉超声多普勒检查T2DM患者的颈动脉内膜中层厚度.结果 ApoA5基因一1131T/C多态位点T、C等位基因频率在T2DM组和正常对照组分别为0.721、0.279和0.760、0.240.基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律.ApoA5基因-1131T/C位点基因型频率和T、C等位基因频率在T2DM组和正常对照组间比较差异无统计学意义(P>0.05).CC纯合子患T2DM风险是TT纯合子的2.432倍(95%CI:1.081～5.473).T2DM组ApoA5基因一1131T/C位点C等位基因携带者(TC)基因型和CC基因型的血清TG水平和TG/HDL-C比值均高于竹基因型携带者(P<0.05).正常对照组TC基因型携带者的血清TG水平和TG/HDL-C比值较TT基因型携带者升高(P<0.05).T2DM组颈动脉IMT ApoA5基因-1131T/C位点CC基因型亚组较TT基因型亚组有增加趋势(P=0.08).结论 ApoA5基因-1131T/C多态性与T2DM的发生无相关性,但CC基因型患T2DM的风险增加.ApDA5基因-1131T/C多态性与正常对照及T2DM患者的血清TG水平和TG/HDL-C比值增高有关,但与T2DM患者颈动脉IMT的相关性需进一步研究.     

Slc4a11基因缺失在CHED发病中的作用

目的　探讨Slc4a11缺失在先天性遗传性角膜内皮营养不良（congenital hereditary endothelial dystrophy, CHED）发病中的作用及其与自噬信号通路的潜在调控关系。方法　利用CRISPR/Cas9技术构建Slc4a11基因敲除小鼠模型。以野生型小鼠（wild type, WT）和Slc4a11基因敲除小鼠（knockout, KO）为实验对象,通过Western印迹法、RT-qPCR、茜素红染色、H-E染色、透射电镜评估KO小鼠角膜表型特征的变化。通过Western印迹法和RT-qPCR检测自噬标志物LC3、beclin1、p62在角膜内皮的表达量。透射电镜观察两组小鼠角膜内皮细胞自噬情况。结果　Slc4a11基因敲除小鼠角膜显示与CHED相似的表型特征,包括角膜厚度增加;角膜内皮细胞体积增大,密度减小;后弹力层增厚;角膜内皮空泡形成。KO小鼠与WT小鼠相比,LC3、beclin1的mRNA和蛋白的相对表达量上升,差异有统计学意义（P<005）,而p62的mRNA和蛋白的相对表达量下降,差异有统计学意义（P<005）。KO小鼠角膜内皮细胞内自噬体明显多于WT小鼠。结论　利用CRISPR/Cas9技术构建的Slc4a11基因敲除小鼠角膜显示CHED特征的表型。同时Slc4a11缺失通过增强自噬信号通路参与CHED的发病机制。