p53基因与肝癌

p53肿瘤抑制基因突变与多数恶性肿瘤的发生发展有关,包括肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)在内的人类恶性肿瘤中至少有50%发生了p53基因改变。因此,以正常p53基因治疗肿瘤就成了研究热点,随着介入放射学(inter-ventional radiology)向纵深发展,经介入放射方法进行肝癌的基因治疗令人关注。本文介绍了p53基因的结构与功能,其与肝癌的病理联系以及在肝癌治疗中的应用。     

变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗对唾液变形链球菌和牙菌斑的影响

目的　了解变形链球菌表面蛋白和葡糖基转移酶基因疫苗单独及联合免疫对定菌鼠唾液变链菌和牙面菌斑的影响。方法　 2 8d龄 Wistar大鼠 3 6只 ,随机分为 pc DNA3 - pac组、pc DNA3 - gtf B组、pc DNA3 - pac联合pc DNA 3 - gtf B组、变形链球菌灭活全菌组、pc DNA3空载体组和 PBS液组 ,进行三次双侧颌下腺腺周注射免疫 ,建立定菌鼠模型 ,作诱龋实验 3个月。唾液变链菌计数和菌斑计分。结果　唾液变链菌菌落计数和牙面菌斑计分在 pc D-NA3与 PBS组最高 ,其次为单基因疫苗免疫组 ,联合基因疫苗和灭活全菌细胞免疫组最低 ,各组间有显著性差异 ( P<0 .0 5 )。结论　 pc DNA3 - gtf B和 pc DNA3 - pac具有明显的免疫抑菌作用 ,联合基因疫苗免疫优于单基因疫苗     

聚合酶链反应单链构象多态性检测乳腺癌中P53基因突变

应用聚合酶链反应单链构象多态性方法，对２４例原发性乳腺癌肿瘤组织基因组ＤＮＡ进行了分析，结果表明：其中７例存在Ｐ５３基因的突变，突变频率约为３０％。同时对其中１０例进行Ｓｏｕｔｅｒｎｂｌｏｔ分析，有２例在ｃｈｒ１７Ｐ上存在等位基因的缺失，而其另一等位基因上均存在基因突变。     

HBV前C/C基因与绿色荧光蛋白基因融合表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

目的 :构建含HBV前C C基因与绿色荧光蛋白基因的融合表达载体 ,并在真核细胞中表达。方法 :用PCR法扩增含 1.3倍HBVayw型全基因组真核表达载体pHBV1.3的前C C基因片断 ,应用含绿色荧光蛋白基因的真核表达质粒构建融合表达载体 ,采用脂质体介导方法将其转染到HEK2 93细胞 ,并用荧光显微镜及ELISA法检测融合蛋白的表达。结果 :经PCR及酶切鉴定 ,证实成功构建了含HBV前C C基因的真核表达重组体pEGFP -HB VC ,显微镜下观察及ELISA法证实在HEK2 93细胞中表达了相应融合蛋白。结论 :构建的重组表达载体能在真核细胞中表达目的蛋白与GFP的双功能融合蛋白 ,适合于针对HBV前C C区的相关研究。     

重组人肿瘤坏死因子诱导HL－60白血病细胞分化及调控原癌基因表达的作用

采用２０～２００Ｕ／ｍｌ的重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ－α）处理体外液相培养的人早幼粒白血病细胞珠ＨＬ－６０，观察到５０～２００Ｕ／ｍｌ的小剂量ＴＮＦ具有诱导其向单核－巨噬细胞途径分化及抑制其增殖的效应。采用细胞总ＲＮＡ打点杂交技术检测１～１００Ｕ／ｍｌＴＮＦ诱导ＨＬ－６０细胞早期（１２小时内）对其ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达的影响，发现ＴＮＦ可抑制ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ水平及ｃ－ｆｏｓ短暂性表达增高。结果表明此小剂量ｒｈＴＮＦ－α具有诱导白血病细胞分化的效应及调控多癌基因表达的作用。     

人PD-L2基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 克隆人PD-L2基因并构建PD-L2胞外区的原核表达载体，在大肠杆菌中进行表达。方法 以RT-PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD-L2基因的cDNA，构建PD-L2胞外区的原核表达载体，在大肠杆菌BL21(ED3)中进行表达并鉴定。结果 克隆到PD-L2基因cDNA编码区全长序列，经DNA测序证明其与已报道的序列一致。进而构建了PD-L2胞外区的原核表达载体，并在大肠杆菌表达，免疫印迹分析表明在IPTG诱导后表达PD-L2胞外区蛋白，相对分子质量Mr为22000，与理论值大小相符。结论 成功克隆PD-L2基因，其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达，为进一步研究PD-L2功能提供了条件。     

Discovering genes: the use of microarrays and laser capture microdissection in pain research

The DNA microarray is a powerful, high throughput technique for assessing gene expression on a system-wide genomic scale. It has great potential in pain research for determining the network of gene regulation in different pain conditions, and also for producing detailed gene expression maps in anatomical areas that process nociceptive stimuli. However, for the potential of this high throughput technology to be realised in pain research, microarrays need to be combined with other technologies. Laser capture microdissection is capable of isolating small populations of homogenous cells, allowing distinct areas involved in nociceptive processing to be examined. In combination with sophisticated PCR-based amplification protocols this technique provides sufficient amounts of messenger RNA (mRNA) for application to microarrays. Aside from the technological issues, a difficult task in any microarray study is the analysis of the resulting enormous data set to reveal the key genes, whose regulation is central to the phenotypic changes observed. For this to be achieved, the methods of data analysis, pattern searching and feature recognition, and bioinformatics have to be properly deployed all within the context of an appropriate statistical design. These issues are especially relevant to pain research where interindividual and interpopulation variation is likely to be high, and where polymorphisms can greatly affect nociceptive sensitivity and susceptibility to pain conditions. Methods for assessing the function of new candidate genes identified in microarray screening experiments are also discussed.     

慢性乙型病毒性肝炎治疗新方法

就当前慢性乙肝治疗的新方法、新进展作一综述。     

转化生长因子β对人颈椎关节突关节软骨细胞基质金属蛋白酶13基因表达的调节作用及意义

目的 探讨转化生长因子β（TGF-β）对人的颈椎关节突关节透明软骨细胞基质金属蛋白酶13（MMP-13）基因表达的作用，旨在阐明颈椎退行性变的相关发生机理。方法 应用逆转录方法PCR及实时荧光定量方法，检测不同浓度TGF-β作用传代培养人的透明软骨细胞MMP-13mRNA的含量。另外3种不同浓度分别与10ng／ml IL-1β组成联合作用组，共计6个实验组及1个正常对照组。结果 正常对照组中透明软骨细胞仅见MMP-13mRNA扩增产物，实验组TGF-β1、10和100ng／ml作用12h后，MMP-13mRNA表达逐渐增强；而联合作用组中，随着TGF-β1浓度的升高，MMP-13mRNA表达逐渐降低，并且各组之间存在明显的差异（P〈0．05）。结论 TGF-β可按剂量依赖方式调节颈椎关节突关节软骨细胞MMP-13mRNA的表达。     

短发卡RNA对人胃癌细胞STAT3基因的沉默作用

目的:探讨STAT3基因小发夹RNA（shRNA）表达质粒对胃癌MKN-45细胞STAT3基因的干扰作用。方法:根据STAT3 mRNA 编码序列，设计RNA干扰靶点，构建STAT3基因的特异性小RNA干扰质粒（psiRNA-H1/STAT3），使用脂质体转染人胃癌细胞系（MKN-45细胞）。实验分为对照（A）组，psiRNA-H1转染（B）组和psiRNA-H1/STAT3转染（C）组。通过RT-PCR和Western Blot检测STAT3特异性小RNA干扰基因对胃癌细胞STAT3基因mRNA和蛋白表达的影响。结果:psiRNA-H1/STAT3经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确，并经测序证实。将其成功转染MKN-45细胞后，该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05)。 结论:将成功构建的针对STAT3基因的shRNA表达载体转染MKN-45细胞，能有效抑制该细胞的STAT3 mRNA和蛋白表达，为STAT3基因靶向治疗提供一定的实验依据。