何首乌扩增长度多态性反应及银染体系的建立

目的 通过对各主要影响因素的研究,建立适于何首乌扩增长度多态性（AFLP）反应体系及银染体系. 方法 采用改进的CTAB提取方法从何首乌的嫩叶中提取获得总DNA;从酶切DNA的量、时间等考察酶切体系,并设计正交实验进行预扩体系和选扩体系的优化. 结果 酶切体系DNA的适用量为400 ng,37 ℃酶切5 h;用较优的预扩增体系和选择性扩增得到的选择性扩增产物在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳,得到清晰的指纹图谱. 结论 所建立的反应体系可有效地应用于何首乌的分类鉴定和道地性鉴定.     

天麻不同种质的AFLP和SSR分析

目的:研究天麻不同种质DNA指纹图谱,探讨扩增酶切片段长度多态性(AFLP)、简单序列重复(SSR)分子遗传标记技术在天麻遗传变异分析上的应用。方法:采用AFLP、SSR及其聚类树对24份不同天麻种质材料的遗传多样性等进行分析,并对这2种分子标记进行比较。结果:检测到AFLP多态性44%-89%、SSR多态性15%-69%;AFLP聚类相似性系数0.56-0.98,SSR聚类相似性系数0.13-1.00。2种分子标记将天麻变型种质聚类划分的结果相近,但SSR能将野生天麻聚在一类。结论:天麻不同种质AFLP多态性高于天麻SSR,SSR对野生天麻有较强的区分能力。     

忍冬种质资源遗传多样性的AFLP分析

目的:研究国内主产区忍冬种质资源的遗传多样性,探讨它们之间的亲缘关系,并为新品种选育提供参考。方法:选用6对引物组合对13个忍冬种质进行AFLP分析,利用DPS V3.01软件计算各品种的遗传距离,按UPGMA法进行聚类分析。结果:共获得435条扩增带,其中191条具有多态性,平均多态检出率为43.9%。聚类结果表明,同一道地产区的栽培品种亲缘关系较近,山东种质基于AFLP标记的分类结果与形态特征基本一致。结论:AFLP分子标记揭示出忍冬种内存在丰富的遗传多样性,为忍冬种质资源的合理利用及品种选育提供了分子水平的理论依据。     

辽宁地区伤寒沙门菌的扩增片段长度多态性分析

目的：分析辽宁省不同城市和大连地区2000～2004年伤寒沙门菌的同源性以及在遗传学上的关系。方法：实验采用EcoRI／MseⅠ型限制性内切酶、选择7种引物组合对25株不同地区和不同时间的伤寒沙门菌菌株进行AFLP分型。结果：25株伤寒沙门菌分为16个基因类型，不同来源的菌株呈现多态性分布；大连地区不同年份的15株菌存在多达14个多态型性；而其他3个城市共10株菌仅存在2个多态性，且遗传距离非常相近。结论：AFLP可以通过对内切酶组合的选择和特异性引物上选择性碱基组合的设计优化实验条件；AFLP是伤寒沙门菌的分子流行病学研究中一种十分有效的手段。     

陕西秦岭地区三叶木通遗传多样性的AFLP分析

目的利用扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术对陕西秦岭地区6个天然居群的三叶木通种质进行遗传多样性分析。方法利用10对引物组合对111份三叶木通种质进行AFLP扩增,并评估遗传多样性。结果 AFLP扩增结果共产生221条清晰的条带,其中多态性条带132条,占59.7%。6个三叶木通居群间遗传分化系数为0.505,基因多态性指数为0.185。在Nei’s遗传距离0.13处,6个天然居群被聚为4个类群。结论陕西秦岭地区三叶木通天然居群遗传多样性水平较低,居群内与居群间的遗传变异程度基本相同。     

贵州野生天麻遗传多样性的AFLP指纹分析

目的 研究野生天麻的遗传多样性,为合理利用野生天麻种质资源、为天麻的进一步系统选育研究提供一定的理论依据.方法 利用AFLP技术,采用8对M+3和P+3引物组合对23份贵州野生天麻品种进行了总基因组DNA水平上的多态性检测,用NTSYSpc-2.10s 软件的UPGMA 方法 对检测结果 进行聚类.结果 共获得552条可统计的条带,其中396条呈多态性,多态性带百分率约72%.UPGMA聚类可以将贵州不同产地的野生天麻很好地区分开来.结论 该实验揭示了贵州野生天麻种质丰富的遗传多样性,聚类分析结果 表明多数来源地相同的天麻种质表现出较为密切的亲缘关系.     

云南青阳参遗传多样性的AFLP研究

目的探讨云南青阳参居群内、居群间和种子间的遗传多样性。方法利用AFLP分子标记技术检测云南不同生态环境中青阳参居群间、居群内及不同植株间和同一植株不同双生蓇葖果的不同种子间遗传多样性。结果居群内遗传多样性比居群间遗传多样性丰富,居群间有效基因等位数(Ne)、Nei’s基因多样性(H)、Shannon’s指数(I)分别为1.172、0.105、0.161,居群内最高为1.217、0.121、0.177;种子之间遗传多样性H值为0.095,I值为0.145)高于双生蓇葖果间(H值为0.121,I值为0.182)。结论云南青阳参遗传多样性较低,需要进行保护;在云南3个生态环境中,楚雄的青阳参遗传多样性较其他地区丰富,AFLP图谱中也出现与该生态环境相一致的特异条带。     

半夏不同种质资源AFLP指纹系谱分析及其应用

目的:获得更多半夏DNA指纹信息,验证AFLP与其他方法是否一致,为半夏及其他中药材道地性研究、种质资源鉴定、亲缘关系研究、品种选育和引种栽培提供分子水平生物学依据。方法:选择全国10个主要产地的野生或栽培半夏为材料,采用扩增酶切片段多态性AFLP方法研究,用NTSYSpc 2.1软件包利用UPGMA法进行聚类分析,构建遗传系统树。结果:筛选12对引物,共扩增出1 673条带。进行聚类分析,结果与利用总生物碱含量差异结果相吻合。结论:本研究所获得的特征带和缺失带体现了AFLP的高特异分辨率在中药半夏品种鉴定上的潜力,绘制的系统进化树不同种源之间遗传关系的远近与其总生物碱含量差异趋势一致。     

中国红花遗传多样性的AFLP分子标记

目的考察红花的种内变异，为进一步进行红花种质资源选育和筛选品质相关基因奠定基础。方法采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术，研究中国红花28个不同栽培居群在DNA水平的多态性。采用UPGMA构建系统树图进行聚类分析和计算遗传距离。结果筛选得到的12对引物的扩增片段具有丰富的多态性。各居群间的遗传相似系数在0.48～0.96。聚类分析显示它们分为3大主要类群和一个中间类群。结论红花种内存在一定的遗传多样性。基于AFLP条带统计的聚类结果和表型特征并不完全一致,可能是基因型和环境共同作用于表型的结果。     

石斛属4种植物的AFLP分析

目的 研究石斛属植物DNA指纹图谱,初步探讨AFLP分子标记技术在石斛地道性鉴别上的应用。方法采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对石斛属内石斛组4个种和一个外类群种进行基因组DNA多态性分析。结果从64对引物组合中选出5对引物组合构建了5个种的DNA指纹图谱。通过聚类分析,石斛属4种植物聚成一个大类,彼此关系得到了很好的分辨,并获得bootstrap校验的有力支持。结论AFLP技术可用于药用石斛DNA指纹图谱研究。