人肝癌细胞系HCC-9903的建立及生物学特性初步观察

我们以手术切除标本作原代培养 ,新建一株人肝癌细胞系 ,目前已维持培养 18个月 ,传代 12 0代 ,生长稳定 ,命名为ＨＣＣ 990 3(ＨｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒＣａｒｃｉｎｏｍａ 990 3)。现报告如下。一、材料与方法癌组织来源于山东大学齐鲁医院 1例肝细胞肝癌患者 ,男 ,5 0岁。于 1999年 3月 4日行肝癌切除术。原代培养采用组织块培养法。培养液为ＲＰＭＩ16 40。胰酶消化 ,1∶3传代。扫描及透射电镜观察其超微结构 ,绘制生长曲线 ,计算细胞倍增时间。行双层软琼脂培养及刀豆球蛋白凝集实验 ,以流式细胞仪检测细胞周期时相和ＤＮＡ合成 ,…     

抗创伤弧菌单克隆抗体细胞系的建立及其特性鉴定

创伤弧菌感染是海水养殖及野生海水鱼的重要疾病之一,可通过伤口和食物链感染人类,引起较严重的疾病,出现发热、寒战等症状,严重者可发生败血症,其死亡率高达 ５０％ ［１］。目前,尚缺乏对此种菌的快速检测及预防措施。我们采用杂交瘤技术,制备了抗创伤弧菌的单克隆抗体（ｍＡｂ）,以期为该菌的快速诊断及预防提供试剂。１材料和方法１．１材料创伤弧菌标准菌种由青岛海洋大学生命学院提供。 Ｂａｌｂ／ｃ小鼠（８ ｗｋ龄、雌性）由本校动物中心提供。小鼠骨髓瘤细胞Ｓｐ２／０由本室保存。１．２方法１．２． １ｍＡｂ的制备将创…     

基于网络药理学探讨扶正强筋片治疗重症肌无力的作用机制

目的：基于网络药理学探讨扶正强筋片治疗重症肌无力（MG）的潜在作用机制。方法：在中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）中筛选出扶正强筋片的活性成分,利用TCMSP的靶点预测模型来寻找中药活性成分的潜在生物学靶点。利用GeneCards数据库、DisGeNet数据库和TTD数据库获得重症肌无力的疾病相关靶点基因。利用韦恩图获得药物靶点和疾病靶点的交集基因。利用Cytoscape的Bisogenet模块对药物和疾病的共有基因进行蛋白质相互作用网络构建,获得扶正强筋片治疗重症肌无力的关键基因模块和相关靶点。使用Metascape数据库和DAVID数据库对药物和疾病交集基因进行GO和KEGG富集分析。使用实时定量基因扩增荧光检测系统（qPCR）检测扶正强筋片对成肌细胞靶点基因的影响。结果：通过生物信息学结合网络药理学分析,获得扶正强筋片中96个主要活性成分、263个药物靶点;疾病相关数据库筛选获得990个重症肌无力相关靶点,KEGG分析获得99条相关信号通路。扶正强筋片治疗重症肌无力的主要成分为槲皮素、山奈酚、木犀草素、豆甾醇等,关键的潜在靶点为TP53、EGFR、ESR1、Cullin...     

磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3对肝细胞癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶3(phosphofructokinase-2/fructose-2, 6-bisphosphatase 3, PFKFB3)表达对肝细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及调控机制。方法 对数生长期SMMC-7721细胞分为PFKFB3敲低组(转染shRNA-PFKFB3慢病毒)和对照组(转染shRNA-NC慢病毒)。转染后采用实时荧光定量PCR法检测细胞PFKFB3 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测细胞PFKFB3蛋白相对表达量,采用CCK-8实验检测0、24、48、72 h细胞增殖吸光度(optical density, OD)值,采用Transwell小室实验检测侵袭细胞数和迁移细胞数;采用基因芯片技术检测并分析2组细胞基因表达谱差异,GO和KEGG富集分析差异表达基因参与的生物学过程及信号通路;采用实时荧光定量PCR法检测受PFKFB3敲低影响较大的FoxO信号通路相关基因FoxO1、FoxO4、CCNB1、CCND1、CDKN1B、BCL6、GADD45A mRNA相对表达量,筛选出表达差异最明显的基因Fox...     

抗PML—RARα反义核酸对NB4细胞形态,PML—RARα mRNA及蛋白质？…

目的 探讨抗ＰＭＬ－ＲＡＲα反义核酸（ＦＵＡＳ）对ＮＢ４细胞的分化、ＰＭＬ－ＲＡＲα ｍＲＮＡ表达及ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白细胞内定位的影响。方法 以ＮＢ４细胞为研究对象,细胞形态观察采用Ｗｒｉｇｈｔ染以法;ＰＭＬ－ＲＡＲαｍＲＮＡ表达采用ＲＴ－ＰＣＲ法;ＰＭＬ／ＰＭＬ－ＲＡＲα蛋白细胞内定位采用免疫荧光技术。结果 ＦＵＡＳ处理后第５天,细胞出现部分分化。处理后２４,７２,１２０小时,ＰＭＬ－     

TGF-β1对MDPC-23细胞增殖和细胞周期的影响

目的：研究转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)对成牙本质细胞系MDPC—23增殖和细胞周期的影响。方法：细胞培养，MTT比色测定法和流式细胞仪(flow cytometry，FCM)分析技术。结果：TGF-β1能明显抑制MDPC—23细胞增殖，无剂量依赖性，但呈时间依赖性；FCM结果显示，TGF-β1作用后，MDPC—23细胞G1％升高，而S％显著降低，反映细胞增殖活性的增殖指数Prl值(S G2M)％增高。结论：TGF-β1抑制成牙本质细胞系MDPC—23细胞增殖和DNA合成。     

亚砷酸钠选择性诱导G2+M期NB4细胞凋亡

目的探讨亚砷酸钠诱导ＮＢ４细胞凋亡的作用机制。方法采用流式细胞术、ＤＮＡ电泳和免疫印迹法研究亚砷酸钠对ＮＢ４细胞的作用。结果①亚砷酸钠作用的ＮＢ４细胞先阻滞在Ｇ２＋Ｍ期,而后发生凋亡;②ｄＵＴＰＦＩＴＣ特异性地标记Ｇ２＋Ｍ期ＮＢ４细胞,而且发生在Ｇ２＋Ｍ期阻滞后;③亚砷酸钠处理ＮＢ４细胞,周期蛋白Ａ、Ｅ、Ｄ１、Ｄ２和Ｄ３无明显变化,周期蛋白Ｂ１表达随作用时间的增加而增加;④流式细胞仪分析显示在亚砷酸钠处理的早期（１６ｈ）,有部分Ｓ期细胞表达周期蛋白Ｂ１,晚期大部分高表达周期蛋白Ｂ１的细胞处于Ｇ２＋Ｍ期,有少量亚二倍体细胞高表达周期蛋白Ｂ１。结论结果提示亚砷酸钠选择性诱导Ｇ２＋Ｍ期ＮＢ４细胞凋亡时,伴周期蛋白Ｂ１表达的升高。     

rhGM—CSF对VP—16诱导的HL—60细胞凋亡的影响

为探讨ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞凋亡的影响,我们观察了预先应用ｒｈＧＭ－ＣＳＦ孵育的ＨＬ－６０细胞由ＶＰ－１６诱导的凋亡的过程及凋亡相关基因ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达变化,应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形 和超微结构变化,凝胶电泳检测ＤＮＡ的碎片,流式细胞术检测细胞凋亡率、ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达,实验结果显示,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可抑制ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞的凋亡,它加强了ＶＰ－１６对ｂｃｌ－２表达的下调作用,抑制了ＶＰ－１６对ｆａｓ表达的上调作用,由此推测,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可能是通过下调ｆａｓ表达降低ＨＬ－６０细胞对ＶＰ－１６的敏感性。     

奎宁与三种逆转剂联合对耐药细胞系K562／HHT多药耐药逆转作用的 …

目的：寻找有效的多药耐药联合逆转剂，方法：用ＭＴＴ法、联合效应分析和流式细胞测定技术研究奎宁分别与环孢菌素Ａ、他莫西酚、潘生丁（ＤＰＭ）联合逆转耐药细胞系Ｋ５６２／ＨＨＴ对柔红霉素（ＤＮＲ）和尖杉酯碱（ＨＨＴ）耐药。结果：逆转倍数是单用药的２－３倍，达到或超过单用２倍剂量的逆转效果，逆转 是有联合协同作用，其中Ｑｕｉｎ与ＤＰＭ或Ｔａｍ联合的协同作用大于Ｑｕｉｎ与ＣｓＡ联合，可增加细胞内ＤＮＲ浓度。     

红细胞生成素受体介导的白血病细胞5纱增殖信号传导的研究

目的 检测白血病细胞系红细胞生成素受体（ＥｐｏＲ）的表达并阐明ＥｐｏＲ介导的白血病细胞系ＫＯＣＬ－３３增殖信号传导途径。方法 用生物系酰基化Ｅｐｏ及流式细胞仪检测白血 纱ＫＯＣＬ－３３细胞中几种信号传导蛋白 酷氨酸磷酸化。结果 （１）除Ｔ淋巴细胞系外,其余细胞纱ＥｐｏＲ表达均为阳性,阳性率为１８％～９９％,均值５２％。不同类型的细胞系ＥｐｏＲ阳性率的差异没有统计学意义。（２）９株细胞中７株细胞因受