人肝细胞系生物功能筛选测定

生物人工肝利用原代肝细胞或人肝细胞系提供肝功能支持［１～４］。我国是世界上最早建立人肝细胞系的国家之一［５］。本研究收集国内的９株人肝细胞系,从中筛选出分化程度高者,测定其生物功能,以备作为人工肝的生物材料。材料与方法１．材料９株人肝细胞系由中国科学院上海细胞生物学研究所提供,编号为细胞系１～９（ＣＬ１～９）。原代肝细胞取自５月胎龄水囊引产的人胚胎肝组织。Ｌ－１５培养基为Ｇｉｂｃｏ产品。Ｌ－谷氨酰胺为Ｓｉｇｍａ产品。ＦＡＣＳ　４４０流式细胞仪为美国Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ公司产品。２．方…     

若参碱对K562细胞端粒酶hTERT—mRNA表达及其酶活性影响作用的研究

目的：观察苦参碱对K562细胞hTERT-mRNA表达及端粒酶活性的影响作用,并明确两者的相关性。方法：以0．1－2mg/ml苦参碱处理K562细胞48h后,RT－PCR检测其hTERT-mRNA表达,同时行TRAP－PCR－ELISA端粒酶活性检测。结果：K562细胞为一强端粒酶活必细胞株,在浓度分别为0．、0．5、1．0、2．0mg/ml苦参碱作用后,K562细胞hTERT-mRNA表达明显受抑,同时伴有端粒酶活性下降,抑制率分别为0．3％、13．0％、91．7％和98．6％。结论：苦参碱可降低K562细胞hTERT-mRNA表达,同时伴端粒酶活性下降;端粒酶活性强度与hTERT-mRNA表达有关。     

中药苏木提取物诱导K562细胞凋亡的研究

目的：探讨中药苏木提取诱导人类慢性髓性白细胞病K562细胞的凋亡作用。方法：采用MTT法检测苏木提取物对K562细胞增殖抑作用。荧光显微镜观察细胞形态变化,库尔特全自动颗粒粒度分析药物引起K562细胞体积大小的分布变化,琼脂糖凝胶是电泳测定DNAladder及流式细胞术检测细胞周期变化,结果：25μg/ml苏木浸膏能明显诱导K562细胞凋亡,产生凋亡细胞所具有的典型形态学及生化学特征,同时对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用呈一定的浓度依赖性,结论：中药苏木提取物能诱导细胞凋亡,抑制癌细胞增殖呈一定的浓度依赖关系。     

STAT1对人肾透明细胞癌放射敏感性的影响

目的 研究人肾透明细胞癌信号传递和转录活化因子1(STAT1)表达情况及抑制STAT1对该肿瘤细胞放射敏感性的影响.方法 采用免疫组织化学染色技术对比检测34例人肾透明细胞癌标本和12例正常肾组织标本的STAT1表达.用Western blotting法检测离体培养人肾透明细胞癌细胞(CRL-1932)、纤维母细胞(CCL-116)和wilm's瘤细胞(CRL-1441)的STAT1表达.用氟达拉滨和siRNA抑制CRL-1932细胞STAT1表达,并通过成克隆法和台盼蓝染色计数法研究抑制STAT1对CRL-1932细胞放射敏感性的影响.结果 人肾透明细胞癌标本的总STAT1和磷酸化STAT1表达均明显高于正常肾组织.Western blotting法显示CRL-1932细胞STAT1表达比CRL-1441、CCL-116细胞明显增高;药物氟达拉滨能显著抑制CRL-1932细胞磷酸化STAT1的表达,并显著增加CRL-1932细胞的放射敏感性,且放射增敏程度与药物浓度呈正相关.经STAT1 siRNA处理后CRL-1932细胞总STAT1和磷酸化STAT1的表达均被有效抑制,且细胞在照射后的存活分数显著下降.结论 肾透明细胞癌STAT1呈高表达,抑制STAT1对该细胞有放射增敏作用.     

利用人的天然抗体抗肿瘤

目的构建含D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因的重组逆转录病毒载体,初步观察DAAO基因的功能。方法利用重组DNA技术将DAAOcDNA亚克隆至逆转录病毒载体（pLDAAOSN）中,以磷酸钙沉淀法介导转染包装细胞ΦXNA,用NIH3T3细胞测定病毒滴度,将重组逆转录病毒感染K562白血病细胞,G418筛选出抗性克隆,命名为K     

三氧化二砷诱导A_(549)~(DDP)细胞株耐药基因表达的研究

目的：探讨三氧化二砷(As2O3）的耐药机制。方法：用四甲基偶氮唑蓝(MTT）法检测A_(549)~(DDP)细胞对As_2O_3的耐药性,用逆转录聚合酶链反应(RT－PCR）技术检测As_2O_3处理后A_(549)~(DDP) 细胞多药耐药基因(mdr1）及多药耐药相关蛋白(MRP）基因表达。结果：A_(549)~(DDP) 细胞对As_2O_3具有交叉耐药性。A_(549)和A_(549)~(DDP) 细胞中mdr1基因低表达,MRP基因呈较高水平表达。结论：A_(549)~(DDP) 细胞中MRP基因过度表达可能是As_2O_3耐药的主要机制之一。     

NGAL基因cDNA的克隆及其表达载体的构建

目的 :克隆NGAL基因的cDNA ,并构建其表达载体。方法 :应用RT PCR技术 ,从食管癌细胞系SHEEC中扩增出NGAL(neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因的cDNA ,并重组到中间载体pT Adv中 ,经测序和与NCBI数据库比较证实是NGAL基因的全编序列。然后把它分别插入到真核表达载体pcDNA 3和原核表达载体pGEX 4T 3中。结果 :获得了NGAL基因的cDNA全序列 ,构建了NGAL的正、反向真核表达载体pcDNA NGAL( - )和原核表达载体pGEX NGAL ,并在大肠埃希菌TOP10F′中成功地表达出NGAL融合蛋白。结论 :为研究NGAL基因的新功能和制备其抗体 ,进而阐明NGAL在食管癌等肿瘤中的生物学作用提供了有利工具。     

土槿甲酸对人红白血病细胞增殖抑制作用的体外研究

目的：研究土槿甲酸（PAA）对人红血血病（K562）细胞生长的抑制效应,探讨其抗癌作用机制,方法：用不同浓度的PAA加入体外培养的K562细胞中,观察加药后细胞生长和有丝分裂指数（MI）的变化,用MTT法检测其细胞毒作用;Hoechst 33342/P1荧光双染色方法检测细胞凋亡,结果：PAA明显抑制K562细胞生长,IC50值为50μmol/L,MI于药后24小时较对照组明显降低,凋亡细胞比例在用药后24小时达80％,结论：PAA可有效抑制人红白血病细胞的增殖。     

转人M受体亚型基因CHO细胞系在新药筛选中的应用

综述了转入M受体亚型基因CHO细胞系在M受体亚型选择性新筛选中的应用以及应用过程中应注意的问题。,并已筛选出的M受体亚型选择性激动剂和拮抗剂作简要介绍。     

喷昔洛韦对宫颈癌细胞系抑制作用的研究

目的喷昔洛韦9位取代鸟嘌呤化合物,在体内外对单纯疱疹病毒I型(HSV-I)、II型(HSV-II),带状疱疹病毒(VIV)有良好的抑制作用。我们从基础研究入手,在细胞水平上探讨喷昔洛韦对HPV(人乳头瘤病毒)相关细胞系的作用,为扩大此药的治疗适应症提供新的思路。方法采用不同来源的宫颈癌细胞系CaSki(HPV16型阳性的人宫颈鳞状上皮细胞系)、Hela(HPV18型阳性的人宫颈腺上皮细胞系)、N(由HPV16E6/E7基因和HSV的N片断共转染得到的恶性转化宫颈鳞状上皮细胞系)和2BS(人正常纤维细胞)及原代培养的正常人鳞状上皮细胞,加入不同浓度的喷昔洛韦,测定不同细胞在喷昔洛韦药物作用下的半数致死浓度(ED50),喷昔洛韦对上述细胞的ED50分别是2.5×10-3mol.L-1,7.5×10-3mg.L-1,2.5×10-3mg.L-1,5.0×10-3mg.L-1,15.0×10-3mg.L-1。选择合适的喷昔洛韦浓度加到各种细胞系中,在不同时间下,用倒置显微镜观察细胞的形态结构改变及测定了各种细胞的生长速度(生长曲线),用透射电子显微镜观察了细胞的超微结构变化。结果选择7.5×10-3mol.L-1喷昔洛韦作用于不同细胞,比较各自变化。作为阳性对照的N细胞24h后出现死亡,加药的第4d细胞几乎死亡殆尽,CaSki与N细胞的改变相近,表明喷昔洛韦药物对鳞状上皮细胞抑制作用最强;对HeLa细胞抑制程度相对较弱;对2BS细胞也有较强抑制作用;对正常人原代上皮细胞抑制作用不明显。生长受抑制的细胞在电镜观察下呈现不同程度的坏死改变。结论喷昔洛韦对HPV相关细胞系有一定的抑制作用,可以进一步探讨此药对HPV引起的组织病变的治疗作用。