汉防己甲素联合屈洛昔芬对K562细胞bcr/abl表达的影响

为了研究汉防己甲素(Tet)联合屈洛昔芬(DRL)对K562细胞株凋亡相关因子bcr／abl mRNA及蛋白表达的影响，Tet(1μmol／L)和DRL(5μmol／L)单用及联合应用于K562细胞一定时间后，分别采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)和Western blot方法检测K562细胞bcr／abl mRNA和蛋白表达的变化。结果表明：Tet和DRL单独应用对K562细胞bcr／abl mRNA及蛋白表达均无影响，两药联合应用于48小时K562细胞bcr／abl mRNA表达开始下调，K562细胞P^210 BCR／ABL蛋白表达于72小时开始下调。结论：Tet和DRL联合应用可下调K562细胞bcr／abl的表达，这可能是两药联用逆转耐药的机制之一。     

PLK1基因缄默在K562细胞凋亡中的作用

目的观察缄默PLK1基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对K562细胞内PLK1表达和细胞凋亡的影响,探讨PLK1在白血病发病中的作用,寻找更为有效的白血病治疗途径。方法设计合成针对PLK1基因1416~1436位点的shRNA片段,并将其克隆于绿色荧光蛋白的表达载体pEGFP-H1中,命名为pEGFP-H1/PLK1。通过电穿孔转染法将其导入K562细胞中,分为对照组、pEGFP-H1空载体转染组和pEGFP-H1/PLK1shRNA重组质粒转染组,转染后24,48h,分别通过RT-PCR和Western blot检测各组细胞PLK1基因和蛋白水平的变化,以MTT方法测各组细胞的增殖活性,比色法检测各组细胞的半胱天冬酶3(caspase-3)蛋白酶活性,并通过流式细胞仪检测各组细胞的凋亡和G2/M期转变情况。结果PLK1mRNA相对水平(与内参的灰度比值)对照组为1.25±0.07,空载体转染24,48h组分别为1.21±0.08和1.23±0.09,shRNA重组质粒转染24,48h组分别为0.52±0.04和0.25±0.02,shRNA重组质粒转染组较其他两组明显降低(P<0.01)。各组细胞PLK1的蛋白水平变化趋势与PLK1mRNA表达相似。相应地,对照组、空载体转染48h组、shRNA重组质粒转染24,48h组的凋亡率分别为(8.3±0.6)%、(8.7±0.7)%、(49.7±3.8)%和(82.3±6.9)%,后两者与前两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。此外,与对照组和空载体转染组相比,shRNA重组质粒转染组的细胞增殖能力明显下降(P<0.05),且位于G2/M期的细胞较对照组和空载体转染组显著增加。以上结果均于转染后48h时较明显(P<0.05)。结论构建的shRNA能明显抑制转染细胞PLK1的表达和增殖,并可促进转染细胞的凋亡,并使停留于G2/M期的细胞显著增加。     

汉防己甲素联合屈洛昔芬逆转K562/A02细胞耐药与诱导凋亡相关性的研究

本研究旨在探讨汉防己甲素(tetrandrine，Tet)联合屈洛昔芬(droloxifene，DRL)对耐药细胞系K562／A02的逆转作用与诱导凋亡有无相关性。采用Annexin V/PI法测定耐药调节剂汉防己甲素、屈洛昔芬单独或联合应用后细胞凋亡的情况。结果发现0.62ug/ml汉防己甲素或1/94ug/ml屈洛昔芬单独作用于K562细胞48小时后均可诱导一定比例的细胞凋亡，作用呈时间依赖性，两者联合应用作用增强。0.62ug/ml汉防己甲素或1.94ug/ml屈洛昔芬单独作用于K562／A02细胞均不能诱导细胞凋亡，两者联合应用72小时可诱导小部分细胞凋亡。结论：汉防己甲素，屈洛昔芬逆转耐药的机理与诱导K562／A02细胞凋亡无关。     

伊马替尼耐药的K562细胞系的建立及其生物学特性研究

目的　体外建立一株对伊马替尼 (imatinib)耐药的白血病细胞并阐明其生物学特性。方法　以药物浓度递增的方法诱导人白血病细胞株K5 6 2对伊马替尼产生耐药性 ,以MTT法确定其耐药倍数及抗药谱。用RT PCR和Westernblot方法检测耐药细胞中bcr/abl及mdr1基因及其蛋白BCR/ABL和P gp的表达。用免疫共沉淀法检测耐药细胞中BCR/ABL的磷酸化活性。用双色荧光原位杂交法检测细胞中融合基因bcr/abl拷贝数。结果　建立了针对伊马替尼的人白血病耐药细胞系K5 6 2 /G0 1,耐药倍数为 (15 .2± 3.0 )倍 ,其对阿霉素、三尖杉酯碱和鬼臼乙叉甙具有不同程度的交叉耐药性。主要的耐药机制为上调bcr/abl融合基因及其融合蛋白BCR/ABL表达 ,增强BCR/ABL磷酸化活性。此外 ,多药耐药相关基因mdr1及其蛋白产物P gp高表达也参与了耐药性的形成。 结论　建立了我国第一株对伊马替尼耐药的人白血病细胞系K5 6 2 /G0 1,并阐明了部分耐药机制。     

苦参碱诱导K562细胞分化早期的基因表达分析

目的　比较苦参碱诱导K5 6 2细胞前后的基因表达谱 ,寻找与肿瘤细胞分化相关的基因。方法　 0 .1mg/ml苦参碱作用K5 6 2细胞 3h后 ,采用基因芯片技术测定并分析对照组与苦参碱处理组间的基因表达谱差异。结果　在 84 6 5个候选基因中 ,筛选出 30个差异表达基因 ,苦参碱处理组与对照组比较 ,表达上调的基因有 12个 ,主要涉及代谢相关蛋白基因、细胞受体等 ;表达下调的有18个 ,包括抑癌基因、原癌基因、DNA结合与转录因子、代谢相关蛋白基因、细胞信号转导基因等。结论　肿瘤细胞诱导分化是多基因作用的综合结果 ,筛选的基因对了解肿瘤发生、发展与逆转分化 ,以及寻找潜在的药物作用靶点可能有意义。     

姜黄素对K562细胞STAT5信号分子的影响

目的　了解姜黄素对信号分子的影响 ,探讨其抗白血病的分子机制。方法　用MTT比色法检测细胞增殖活性。用原位杂交法检测细胞STAT5mRNA的表达。用免疫印迹法 (Westernblot ting)检测细胞STAT5蛋白的表达。结果　①姜黄素抑制K5 6 2细胞增殖与作用时间及姜黄素浓度分别呈依赖关系 ,最适作用时间为 12h ,最适作用浓度为 2 5 μmol L。②姜黄素组K5 6 2细胞STAT5mRNA表达的阳性率为 19% ,与K5 6 2细胞组 (31% )相比明显减少 (P <0 .0 1)。③姜黄素组K5 6 2细胞STAT5蛋白的表达 (A值为 15 2 6 6± 76 9)与K5 6 2细胞组 (A值为 2 5 781± 12 4 0 )相比明显减低 (P <0 .0 1)。结论　姜黄素能抑制K5 6 2细胞STAT5信号分子的活化及表达 ,进一步抑制白血病细胞的增殖。     

人骨髓间充质干细胞对K562细胞增殖和化疗敏感性的影响

本研究比较K562细胞与正常人骨髓间充质干细胞（MSC）黏附培养前后细胞增殖、化疗敏感性及MDR1变化，以寻找白血病耐药与造血微环境的关系。对悬浮培养和与MSC黏附培养的K562细胞绘制细胞生长曲线；用流式细胞术测定细胞周期并观察化学药物对细胞存活率和凋亡的影响；用RT-PCR技术检测MDR1基因表达。结果表明：与悬浮培养比较，黏附培养K562细胞增殖受抑，G0／G1期细胞比例增加（P〈0．05），S期细胞比例下降（P〈0．05），G2／M期细胞比例增加（P〈0．01）。在柔红霉素（DNR）诱导的凋亡中，黏附培养组K562细胞凋亡受阻（P〈0．05）。黏附培养未诱导K562细胞MDR1基因表达，也未使K562／ADM细胞的MDR1基因表达发生改变。结论：K562细胞与MSC黏附接触共培养，可导致K562细胞生长抑制，并产生化疗耐药，其机制可能与MDR1无关。     

黄瓜香含药血清对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察黄瓜香含药血清在体外对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响.方法:采用血清药理学方法制备黄瓜香含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用MTT比色法观察黄瓜香含药血清对K562细胞增殖的影响,采用wright-Giemsa染色观察肿瘤细胞形态学变化.采用caspase-3活性检测试剂盒检测K562细胞内caspase-3的酶活力水平.结果:不同浓度黄瓜香含药血清对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈剂童依赖关系.高剂量黄瓜香含药血清对K562细胞形态学有明显的影响.在黄瓜香含药血清处理K562细胞24 h后,caspase-3活性均显著增加,随黄瓜香含药血清浓度的升高呈现较好的剂量依赖性.结论:黄瓜香含药血清具有抑制K562白血病细胞增殖及诱导凋亡的作用,其作用强度与时间一浓度呈正相关.其作用机理可能与其直接细胞毒作用及提高caspage-3酶的活性有关.     

灵芪胶囊含药血清对人红白血病K562细胞增殖抑制作用的影响

目的：观察灵芪胶囊（LQC）含药血清在体外对K562白血病细胞增殖抑制作用的影响。方法：采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,并测定抑制率、分裂指数以及克隆形成能力,观察灵芪胶囊含药血清对肿瘤细胞的抑制作用;用W right-G iemsa染色方法观察肿瘤细胞形态的变化。结果：不同浓度灵芪胶囊含药血清对K562细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系;灵芪胶囊含药血清对肿瘤细胞的分裂指数和克隆形成能力均具有显著的降低作用,在一定的时间内与剂量呈正相关,同时亦使肿瘤细胞的形态结构发生改变。结论：灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞具有细胞毒作用,其直接杀伤和破坏肿瘤细胞的作用是灵芪胶囊抗肿瘤的主要机理之一。     

索拉非尼联合柔红霉素对K562细胞株协同作用的研究

本研究探讨索拉非尼(sorafenib,SOR)联合柔红霉素(daunorubicin,DNR)对K562细胞株的增殖活性及凋亡的影响。采用MTT法检测K562细胞株在索拉非尼单药及联合柔红霉素作用下增殖的抑制效应,根据两药相互作用指数(coefficient of drug interaction,CDI)评价两药相互作用性质,并用Hoechst33258荧光染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果表明:索拉非尼单药及联合柔红霉素对K562细胞株有显著的抑制效应,而且两药联合应用具有协同作用,联合组凋亡细胞增加。结论:柔红霉素和索拉非尼联合作用于白血病细胞株K562呈现明显的协同抑制作用。