过敏性紫癜发病中树突状细胞与T辅助细胞分化失衡的关系

目的探讨树突状细胞(dendritic cells,DC)调控信号的异常与过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura,HSP)发病中T辅助细胞分化失衡的关系。方法分别采用散射比浊法、ELISA和流式细胞技术,检测50例HSP患儿和20例健康儿童血浆中免疫球蛋白、血浆IL-4、INF-γ和DC培养上清IL-12、IL-10水平及DC表面CD86、CD80、CD83、HLA-DR、CD-209的表达情况。结果与对照组(健康儿童,n=20)比较,HSP组患儿:血浆免疫球蛋白IgA及IgE水平升高;血浆中Th2类细胞因子IL-4升高,Th1类细胞因子INF-γ降低;DC培养上清中IL-10升高,IL-12降低;DC表达CD86、CD83、HLA-DR水平升高,表达CD80水平降低(P<0.05)。CD-209在两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论DC的抗原特异性信号、协同刺激信号和分化或极化信号3种调控信号的异常,与HSP患儿Th1/Th2失衡、免疫球蛋白合成异常密切相关。     

A timeline of oligodendrocyte death and proliferation following experimental subarachnoid hemorrhage

AimsWhite matter (WM) injury is a critical factor associated with worse outcomes following subarachnoid hemorrhage (SAH). However, the detailed pathological changes are not completely understood. This study investigates temporal changes in the corpus callosum (CC), including WM edema and oligodendrocyte death after SAH, and the role of lipocalin‐2 (LCN2) in those changes.MethodsSubarachnoid hemorrhage was induced in adult wild‐type or LCN2 knockout mice via endovascular perforation. Magnetic resonance imaging was performed 4 hours, 1 day, and 8 days after SAH, and T2 hyperintensity changes within the CC were quantified to represent WM edema. Immunofluorescence staining was performed to evaluate oligodendrocyte death and proliferation.ResultsSubarachnoid hemorrhage induced significant CC T2 hyperintensity at 4 hours and 1 day that diminished significantly by 8 days post‐procedure. Comparing changes between the 4 hours and 1 day, each individual mouse had an increase in CC T2 hyperintensity volume. Oligodendrocyte death was observed at 4 hours, 1 day, and 8 days after SAH induction, and there was progressive loss of mature oligodendrocytes, while immature oligodendrocytes/oligodendrocyte precursor cells (OPCs) proliferated back to baseline by Day 8 after SAH. Moreover, LCN2 knockout attenuated WM edema and oligodendrocyte death at 24 hours after SAH.ConclusionsSubarachnoid hemorrhage leads to T2 hyperintensity change within the CC, which indicates WM edema. Oligodendrocyte death was observed in the CC within 1 day of SAH, with a partial recovery by Day 8. SAH‐induced WM injury was alleviated in an LCN2 knockout mouse model.     

DCE序列在前列腺癌磁共振诊断中的补充价值探讨

目的：分析DCE序列在前列腺癌磁共振诊断方面的补充价值。方法：纳入2019年1月～2020年12月在本院行前列腺常规磁共振+增强扫描,并有穿刺活检结果进行比对的76例男性患者为观察对象,回顾分析所有患者磁共振检查的相关资料。结果：76例患者经穿刺活检证实47例为前列腺癌,29例为良性前列腺增生病变。前列腺癌患者表观弥散系数（ADC）小于前列腺增生患者（P<0.05）,有统计学意义;T2WI+DWI+DCE较T2WI对前列腺癌诊断准确率、特异性与灵敏度更高,有统计学意义（P<0.05）。结论：前列腺癌在磁共振检查常规扫描序列基础上应用DCE序列可提高诊断效能,为患者综合干预提供依据。     

GCF低表达宫颈癌HeLa细胞系的构建及辐射对其调控IER5基因表达的初步探究

目的 构建GCF低表达的宫颈癌HeLa细胞系,在⁶⁰Co γ射线照射下初步探究其细胞增殖以及调控宫颈癌放射敏感基因IER5的表达。 方法 经带有荧光标记的GCF低表达的质粒稳定转染HeLa细胞, G418筛选,蛋白印迹法、实时定量PCR法鉴定得到GCF-shRNA-HeLa单克隆细胞系。倒置显微镜观察细胞形态变化,CCK-8法探究不同剂量照射后的细胞增殖情况,在不同照射剂量下用蛋白印迹法检测GCF-shRNA-HeLa及对照细胞中IER5蛋白的表达情况。 结果 成功构建稳定表达的GCF-shRNA-HeLa单克隆细胞系,显微镜下观察GCF-shRNA-HeLa细胞比正常HeLa细胞体积小,细胞间隙较大,其中梭形细胞较多。蛋白印迹法及实时定量PCR验证了GCF-shRNA-HeLa的蛋白表达及mRNA转录水平均低于对照组(P<0.05)。辐射情况下实验结果显示在同一照射剂量、同一时间下GCF-shRNA-HeLa细胞比control对照细胞增殖缓慢(P=0.014)。不同剂量照射情况下蛋白印迹法检测HeLa细胞、control-shRNA-HeLa与GCF-shRNA-HeLa细胞IER5蛋白表达情况,结果同一辐照剂量下GCF沉默的细胞系中IER5的表达量比对照细胞高, 4Gy照射的GCF-shRNA-HeLa的IER5表达量最高(P<0.05)。 结论 本实验构建了低表达GCF的HeLa细胞系,初步探讨GCF作为IER5基因抑制性转录因子的作用。结合临床基因靶向治疗,可寻求可以降低GCF表达的方式,通过上调IER5表达这一双效途径来加速宫颈癌细胞凋亡。     

补肾解毒法对多发性硬化小鼠CD4+ T细胞的作用

目的 研究补肾解毒法对多发性硬化小鼠中枢神经炎症及外周血CD4+ T细胞亚群（Th1、Th2、Th17、Treg细胞）的影响。方法 以实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE）模型作为多发性硬化动物模型,以C57BL/6小鼠皮下多点注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein 35-55,MOG35-55)的方法复制EAE模型。将小鼠随机分为正常组,模型组,泼尼松组,中药高、中、低剂量组,每组8只小鼠。模型复制后第30天取小鼠脊髓,光镜下观察各组小鼠脊髓炎性细胞浸润和脱髓鞘等病理改变,流式细胞仪检测小鼠脾脏Th1、Th2、Th17、Treg细胞亚群,ELISA法检测脾脏细胞培养上清液中干扰素-γ（interferon gamma, IFN-γ）、白细胞介素-4（interleukin-4, IL-4）、白细胞介素-10（interleukin-10, IL-10）、白细胞介素-17A（interleukin-17A, IL-17A）水平。结果 中药高剂量组、泼尼松组炎症评分和脱髓鞘评分明显低于模型组（P<0.05)。与模型组比较,中药高剂量组、泼尼松组脾细胞培养后上清液中致炎因子IFN-γ、IL-17A降低明显,而抑炎因子IL-4、IL-10升高明显,Treg比例明显升高,Th1和Th17比例明显降低,差异均具有统计学意义（P<0.05)。结论 补肾解毒法能够调节EAE小鼠失衡的CD4+ T细胞亚群,显著抑制EAE模型的炎性反应。     

单纯性肾病综合征病儿血清sIL-2R的变化

①目的探讨单纯性肾病综合征（ＳＮＳ）病儿血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）的变化特点及其临床意义。②方法采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法和单克隆抗体间接免疫荧光法，检测２４例ＳＮＳ病儿活动期、近期和远期缓解期及２２例健康儿童血清ｓＩＬ－２Ｒ水平和Ｔ细胞亚群。③结果ＳＮＳ病儿活动期血清ｓＩＬ－２Ｒ水平明显高于近期和远期缓解期及正常对照组（ｔ＝５．６８１～６．３６１，Ｐ＜０．０１），而其他各组间差异无显著性（ｔ＝０．２３３～０．６０１，Ｐ＞０．０５）；活动期血清ｓＩＬ－２Ｒ增高与ＣＤ４细胞百分率和ＣＤ４／ＣＤ８细胞比值呈负相关（ｒ＝－０．４９８，－０．６２５，Ｐ＜０．０５，０．０１），而与ＣＤ８细胞百分率呈正相关（ｒ＝０．５１７，Ｐ＜０．０１）；激素敏感组活动期血清ｓＩＬ－２Ｒ水平明显低于低敏感组（ｔ＝２．２７６，Ｐ＜０．０５），活动期血清ｓＩＬ－２Ｒ水平与尿蛋白阴转时间呈低度正相关（ｒ＝０．４３３，Ｐ＜０．０５）。④结论ＳＮＳ病儿活动期血清ｓＩＬ－２Ｒ水平明显增高，此与Ｔ细胞功能紊乱和ＳＮＳ发病机制密切相关；活动期血清ｓＩＬ－２Ｒ水平可作为判断激素近期疗效的指标。     

甘精、地特、人胰岛素对3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响

目的探讨甘精、地特、人胰岛素对3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA表达的影响。方法体外培养3T3-L1脂肪细胞,诱导分化成熟后加入含有1nmol／L、10nmol／L、100nmol／L、1000nmol／L甘精、地特、人胰岛素的基础培养基培养24h,并设立基础培养基组为空白对照组,培养24h,RT-PCR方法检测脂肪细胞脂联素mRNA水平。结果100nmol／L、1000nmol／L甘精、地特、人胰岛素均抑制脂联素mRNA的表达中,1000nmol／L胰岛素的抑制作用强于100nmol／L胰岛素。地特胰岛素的抑制作用弱于人胰岛素及甘精胰岛素。甘精胰岛素的抑制作用弱于人胰岛素。结论高浓度甘精、地特、人胰岛素均不同程度抑制3T3-L1脂肪细胞脂联素mRNA的表达。     

系统性红斑狼疮患者Th0、Th1和Th2细胞水平检测

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血辅助性T淋巴细胞（Th）亚群在SLE发病中的作用。方法采用流式细胞术对SLE患者和正常人外周血中T淋巴细胞内细胞因子（IFN-γ、IL-4）和表面抗原（CD4）进行分析;记录患者临床资料,根据临床表现及系统性红斑狼疮活动指数（SLE-DAI）分组。结果与正常对照组比较,SLE患者外周血中Th2细胞百分比升高（P〈0．05）,Th1／Th2比值降低（P〈0．05）。Th1、Th2细胞百分比在SLE组与正常对照组之间差异无显著性（P〉0．05）。SLE患者SLEDAI〉10组Th1／Th2比值低于SLEDAI≤10组和正常组（P〈0．05）。Th2细胞百分比在SLEDAI〉10组显著升高（P〈0．05）。与阴性对照组比较,伴有口腔溃疡SLE组其Th1细胞百分数降低,有关节炎组其Th2细胞百分数升高。Th1／Th2比值与SLEDAI积分成负相关;Th0与血清补体C3成正相关。24h尿蛋白定量、白细胞数、血小板数与Th1、Th2、Th0及Th1／Th2比值无相关性。结论SLE患者体内存在Th2优势活化状态,活动期SLE患者Th1／Th2失衡尤其突出;Th亚群细胞失衡在SLE发病中有着重要作用。     

雷公藤甲素通过抑制逆转录病毒HERV-K Np9基因转录诱导人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡

目的探讨雷公藤甲素诱导人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡分子机制。方法MTT检测雷公藤甲素对Jurkat细
胞的增殖抑制作用,然后用OriginPro8计算出IC50。按照0、2、4、8、16 nmol/L浓度雷公藤甲素处理Jurkat细胞48 h,然后用流式
细胞仪检测细胞凋亡变化。用半定量RT-PCR法检测加药处理后各组Np9基因mRNA的表达水平变化并用Kodak 1D 3.6软件
对条带进行定量分析。采用统计软件分析Np9转录抑制与细胞凋亡的相关性。Western Blotting检测Np9下游信号分子c-myc,
β-catenin,ERK,AKT和Notch1蛋白的变化。结果雷公藤甲素呈剂量依赖性抑制Jurkat细胞的增殖,其IC50为12.7 nmol/L。雷公
藤甲素呈剂量依赖诱导Jurkat细胞凋亡。进一步实验研究结果显示,雷公藤甲素呈剂量依赖方式抑制Jurkat细胞中Np9基因的
mRNA的转录水平。经统计分析发现Np9转录抑制与细胞凋亡之间具有显著的相关性（R2=0.907）。Western Blotting方法结果
发现雷公藤甲素在抑制Np9 mRNA转录同时伴有其下游信号分子c-myc,β-catenin,ERK,AKT和Notch1蛋白表达水平降低。
结论下调HERV-K Np9 mRNA及其下游信号分子c-myc,β-catenin,ERK,AKT和Notch1蛋白水平是雷公藤甲素诱导人急性T
淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡的重要分子机制之一。
     

中国上海汉族人群NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与脑卒中相关性

目的:研究NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T基因多态性与脑卒中的相关性?方法:收集118例脑出血患者?125例脑梗死患者和147例正常对照组,研究对象均来自上海地区汉族人群,3组在年龄?性别构成比?体质指数(BMI)等基线指标均没有明显差异,分别进行血糖?血脂等各项指标的测定,用聚合酶链反应?限制性片段长度多态性分析(PCR－RFLP)和基因测序方法比较其在不同人群中的基因突变频率?结果:脑出血组?脑梗死组CT + TT基因型(9.3%?9.6%)和T等位基因(4.7%?5.2%),均明显高于对照组(2.0%和1.0%,P < 0.05),脑梗死组中发现1例TT基因型,出血组与正常对照组均未发现TT基因型,与基因测序结果一致?采用二分类Logistic回归分析p22phox亚基C242T基因多态性与脑出血的相关性(β = 1.712,OR = 5.537,95%CI:1.120~27.381,P = 0.036),与脑梗死的相关性(β = 1.432,OR = 4.187,95%CI:0.934~18.774,P = 0.061),表明C242T基因多态性可能是脑出血?脑梗死的危险因素?结论:NAD(P)H氧化酶p22phox亚基C242T多态性与脑出血?脑梗死均有一定的相关性,可能是脑卒中的一个危险因素?但与高血压和饮酒等传统危险因素相比,C242T多态性对脑梗死的影响并不显著?