成纤维细胞生长因子21对缺氧复氧心肌细胞的保护作用及机制研究

【摘要】 目的 探讨成纤维细胞生长因子21（FGF21）对缺氧复氧（H/R）心肌细胞的保护作用及对PI3K/AKT通路的影响。方法 重组腺病毒载体Ad FGF21诱导原代心肌细胞过表达FGF21。腺病毒转染心肌细胞后构建H/R损伤模型（3h缺氧联合3h复氧）。实验分为对照组（Con组）、H/R组、H/R+Ad GFP组、H/R+Ad FGF21组4组。心肌细胞存活率评估细胞损伤程度;SOD/MDA检测联合DHE荧光染色评估氧化应激反应（ROS）;流式细胞术评估细胞凋亡;Western blot检测相关蛋白水平。在机制探讨实验中给予PI3K/AKT抑制剂（LY294002）进行干预。结果 与Con组相比,H/R损伤后FGF21蛋白表达显著下调,并伴随心肌细胞活性降低、ROS与凋亡反应激活。腺病毒介导的心肌细胞过表达FGF21能够明显抑制H/R损伤,表现为细胞活力、ROS与凋亡反应均有不同程度改善。FGF21心肌细胞过表达能够增加PI3K/AKT磷酸化水平,而抑制PI3K/AKT通路后FGF21过表达介导的细胞保护功能被逆转。结论 FGF21主要通过PI3K/AKT依赖性途径改善心肌细胞H/R损伤。     

III期结直肠癌中NLRC3与预后和肿瘤免疫的关系

目的：探讨核苷酸寡聚化结构域样受体家族半胱天冬酶募集结构域蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family caspase recruitment domain containing 3,NLRC3)与III期结直肠癌的预后及肿瘤免疫相关指标 的关系。方法：回顾性收集中南大学湘雅医院2012年至2013年122例经手术根治切除的III期结直肠癌患者的相关资 料。利用免疫组织化学法分析NLRC3与CD8+ T细胞的表达情况,利用患者的术前临床资料计算中性粒细胞/淋巴细 胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR),并检测其微卫星稳定性。采用χ2检验分析NLRC3与临床病理因素之间的 关系,采用COX回归模型分析III期结直肠癌的独立预后因素。结果：在III期结直肠癌中,肿瘤组织CD8+ T细胞浸润 分期(χ2=27.79,P<0.01)、NLR值(χ2=6.35,P<0.05)、淋巴结转移分期(χ2=10.12,P<0.01)以及微卫星稳定性(χ2=6.05, P<0.05)与NLRC3的表达有关。NLRC3(OR=0.066,95% CI：0.020~0.218)、血管癌栓(OR=3.119,95% CI：1.547~6.286) 及NLR(OR=5.103,95% CI：2.465~10.563)对III期结直肠癌的5年总生存期(overall survival,OS)有影响(均P<0.05);另 外,NLRC3(OR=0.144,95% CI：0.055-0.377)、血管癌栓(OR=3.589,95% CI：1.859~6.932)及NLR(OR=2.939,95% CI： 1.509~5.723)对III期结直肠癌的无病生存期(disease free survival,DFS)同样有影响(均P<0.05)。结论：NLRC3,血管癌栓 和NLR是III期结直肠癌的独立预后因素。NLRC3通过抑制系统性炎症、促进局部抗肿瘤免疫而使III期结直肠癌患者 具有良好的预后。     

羟基红花黄色素A对卵巢癌细胞PI3K/Akt信号通路的影响

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人顺铂耐药的卵巢癌A2780/DDP细胞株顺铂耐药性的逆转作用及具体机制。方法培养A2780/DDP细胞,接种至20只BALB/C雌性裸鼠,按随机数字表法分为对照组、红花组、顺铂组和联合组,每组5只,均采用腹腔注射给药的方式,对照组予0.9%氯化钠溶液,顺铂组按3mg/kg剂量给予顺铂,红花组按1.1g/kg给予HSYA,联合组予HSYA(1.1g/kg)联合顺铂(3mg/kg),每3天给药1次,连续给药4周。第5周后处死小鼠,解剖取瘤记录瘤重并计算抑瘤率,HE染色观察各组肿瘤的病理改变,Western blot检测Akt、p-Akt蛋白表达。结果对照组瘤重(4.71±0.17)g,顺铂组瘤重(3.53±0.28)g,抑瘤率25.08%,红花组瘤重(4.54±0.25)g,抑瘤率3.61%,联合组瘤重(2.76±0.17)g,抑瘤率41.36%。与对照组和顺铂组相比,联合组的肿瘤质量下降(P0.05),抑瘤率明显增加(P0.05);HE染色显示,与顺铂组比较联合组肿瘤坏死程度更高;Western blot结果示,对照组Akt蛋白相对表达水平为(0.61±0.11),顺铂组为(0.62±0.09),红花组为(0.42±0.10),联合组为(0.44±0.07)。与对照组比较,顺铂组Akt、p-Akt蛋白表达无统计学差异(P0.05),与对照组与顺铂组比较,红花组与联合组的Akt、p-Akt蛋白表达较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HSYA可能通过下调PI3K/AKT通路的关键组分Akt、p-Akt蛋白,来增强A2780/DDP对顺铂的化疗敏感性,逆转顺铂耐药。     

3D打印技术对胫骨平台骨折关节面复位的应用价值及术后CT结果研究

目的探讨3D打印技术对胫骨平台骨折关节面复位的应用价值及术后CT结果。方法选择2015年1月～2018年12月我院收治的60例胫骨平台骨折患者,随机分为两组各30例,对照组实施传统切开复位内固定术,观察组在3D打印技术指导下行切开复位内固定术,比较两组手术情况、关节面复位情况、临床疗效、膝关节活动度、膝关节功能评分。结果 (1)观察组复位固定时间、手术时间均较对照组缩短(P均0.05)。(2)观察组的关节面最大阶梯高度、关节面复位满意度评分均较对照组更高(P均0.05)。(3)观察组的优良率较对照组更高,其治疗后的伸膝最大角度、屈膝最大角度、膝关节功能评分均较对照组更高(P均0.05)。结论应用3D打印技术指导胫骨平台骨折手术,可更快、更好地复位关节面,有利于提高疗效,改善膝关节功能。     

ω-3多不饱和脂肪酸对重型颅脑损伤患者术后免疫功能影响的研究

目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸对重型颅脑损伤患者术后营养状况及免疫功能的影响。方法采用随机数字法将2017年7月～2018年6月入住本院符合研究条件的82例重型颅脑损伤患者分为两组:常规肠内营养组(对照组,40例)和ω-3多不饱和脂肪酸组(ω-3组,42例)。对照组给予常规肠内营养制剂瑞代,ω-3组给予富含ω-3多不饱和脂肪酸的肠内营养制剂瑞能。分别检测患者第1天、第4天、第7天和第14天的血清白蛋白、前白蛋白、免疫球蛋白(IgG、IgA和IgM)水平,测定CRP的变化、GCS评分和感染的发生率。结果给予肠内营养支持后,两组患者的血清白蛋白和前白蛋白均有升高,第14天与第1天比较,差异有统计学意义(P0.05),组间比较差异无统计学意义(P0.05);与对照组相比,ω-3组免疫球蛋白的增加差异有统计学意义(P0.05);两组患者CRP比较差异有统计学意义(P0.05),ω-3组下降多于对照组,差异有统计学意义(P0.05);两组患者GCS评分均有改善,组间比较差异无统计学意义(P0.05);ω-3组肺部感染的发生率低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论ω-3多不饱和脂肪酸能够改善重型颅脑损伤患者的营养状况,促进免疫功能的恢复,减少患者术后肺部感染的发生率。     

不同比例n-6和n-3多不饱和脂肪酸调控NT-proBNP和hFABP保护急性心肌梗死后的心肌损伤

目的探讨不同比例的n-6和n-3多不饱和脂肪酸对急性心肌梗死大鼠心肌细胞的保护作用。方法采用连续注射异丙基肾上腺素的方法构建急性心梗大鼠模型。通过酶联免疫法检测大鼠血清中NT-proBNP、h FABP和cTn I的水平;TTC和TUNEL染色评估心肌梗死面积和心肌细胞凋亡程度。Western blot和QPCR检测心梗标记基因和凋亡因子的表达。通过向心脏注射干扰NT-proBNP、hFABP、cTn I的慢病毒,进一步检测AMI心肌细胞的凋亡情况。结果日粮中添加n-6/n-3多不饱和脂肪酸比例1∶5和1∶10导致AMI大鼠在心梗发生后0、4、8和12 h的NT-proBNP、hFABP和cTnI水平、心梗面积和心肌细胞凋亡均明显低于基础日粮饲喂的AMI大鼠;且1∶10比例的n-6/n-3多不饱和脂肪酸抑制效果最为明显。干扰AMI大鼠心肌NT-proBNP和hFABP导致cTn I、Bax表达降低,Bcl-2表达升高。结论日粮添加1∶10比例的n-6/n-3多不饱和脂肪酸能有效缓解急性心肌梗死的发生,且NT-pro BNP和hFABP的表达水平是参与心梗后心肌细胞凋亡的重要因子。     

AML1/ETO阳性急性髓系白血病患者galectin-3的表达及临床意义

目的 探讨AML1/ETO阳性急性髓系白血病（AML1/ETO+ AML）患者半乳凝集素3（galectin-3,gal-3）表达及其临床意义。方法 采用实时定量RT-PCR（RQ-PCR）法检测53例AML1/ETO+ AML患者骨髓单个核细胞中gal-3 mRNA表达水平,ELISA法检测患者外周血gal-3蛋白水平,分析gal-3 mRNA表达与疾病预后的相关性。结果 ①gal-3 mRNA及蛋白在初诊AML1/ETO+ AML患者中呈高表达（ P<0.001）,初诊患者gal-3 mRNA与蛋白表达呈正相关（r=0.732, P<0.001）,疾病完全缓解期外周血gal-3蛋白表达量下降（ P<0.001）;②初诊时gal-3 mRNA表达水平越高,患者白细胞数量越低（ P=0.014）,CD34表达和附加染色体异常的比例越高（ P=0.001, P=0.026）;③gal-3 mRNA高表达组与低表达组在完全缓解（CR）、部分缓解（PR）、诱导期死亡（即早期死亡）率上无明显差异（ P＞0.05）,但两组患者在复发率上差异有统计学意义（ P=0.029）;④gal-3 mRNA高表达组患者中位总生存率（OS）及无病生存率（DFS）均较低表达组缩短（ P=0.007, P=0.015）,累积复发率增高（ P=0.045）,但累积死亡率无明显差异（ P＞0.05）。Cox风险比例模型提示gal-3 mRNA是影响AML1/ETO+ AML患者OS及DFS的独立指标。结论 骨髓gal-3 mRNA有可能成为AML1/ETO+ AML患者评估预后及指导治疗的重要参考指标。     

电针不同穴组对功能性便秘大鼠结肠黏膜超微结构及AQP3、AQP8表达的影响

目的 探讨电针不同穴组治疗功能性便秘（FC）大鼠的作用机理。方法 FC动物模型采用0 ℃ 0.9%氯化钠溶液对SD大鼠灌胃复制,随机分为模型组、电针1组（EAⅠ组）、电针2组（EAⅡ组）和电针3组（EAⅢ组）,正常组采用SD大鼠。EAⅠ组取天枢、大肠俞（双侧）、EAⅡ组取曲池、上巨虚（双侧）、EAⅢ组取天枢、大肠俞、曲池、上巨虚（单侧）进行电针治疗。观测粪便性状和肠道炭末推进率评定大鼠肠动力,透射电镜检测大鼠结肠黏膜超微结构,Western blot检测大鼠结肠AQP3、AQP8蛋白表达,qPCR检测大鼠结肠AQP3、AQP8 mRNA表达。结果 EAⅡ组大鼠24 h粪便粒数、24 h粪便含水量和肠道炭末推进率均显著增加,首次黑便时间显著减少（P<0.05）,结肠黏膜超微结构经EAⅡ干预后显著改善,模型组大鼠结肠黏膜AQP3、AQP8蛋白和AQP3、AQP8 mRNA表达显著高于正常组（P<0.05）,经EAⅡ干预后表达显著降低,具有统计学意义（P<0.05）。结论 电针刺激曲池、上巨虚可能通过降低FC大鼠结肠黏膜AQP3、AQP8蛋白和AQP3、AQP8 mRNA表达,减少结肠水分重吸收,增加结肠粪便含水量,调节水分转运,改善结肠黏膜超微结构,增强肠动力,起到改善便秘症状的作用。