转染甲氨蝶呤阿糖胞苷双耐药基因的小鼠骨髓细胞对大剂量化学治疗的保护作用

目的探讨同时导入人双突变的二氢叶酸还原酶基因（DHFR）和胞苷脱氨基酶基因（CD）小鼠骨髓细胞对大剂量甲氨蝶呤（MTX）和阿糖胞苷（Ara-C）的耐受性及骨髓耐受联合化疗的可行性。方法以反转录病毒为载体,将人双突变的DHFR和CD通过共培养转染人两只小鼠骨髓干细胞,观察共培养后的骨髓细胞经Ara-C、MTX、Ara-C＋MTX处理后,耐MTX及Ara-C粒-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）生成情况;转基因小鼠骨髓细胞提取的DNA,用聚合酶链反应（PCR）检测转基因小鼠骨髓细胞耐药基因的表达。结果含有耐药基因（SFG-F／S-CD）的骨髓细胞均有耐药克隆的形成,耐Ara-C、MTX、Ara-C＋MTX克隆分别为56％、22％和14％,并明显增加了对MTX和Ara-C的耐受（P〈0．005）;转基因小鼠骨髓细胞经PCR检测,显示有F／S、CD基因表达;耐药基因转染后小鼠骨髓细胞对MTX和Ara-C的耐受明显增加。结论双耐药基因可以导入小鼠骨髓细胞并且获得表达,提高了造血细胞对MTX和Aar-C的耐药性。     

辐射导致小鼠骨髓基质细胞衰老的机制研究

目的探讨辐射导致骨髓基质细胞损伤的机制。方法应用BALB/c小鼠骨髓基质细胞体外放射损伤模型,分别于照射后24h、72h、1周、2周用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖率;用Giemsa染色法观察细胞形态;用流式细胞仪检测细胞周期;用细胞化学法检测衰老相关β半乳糖苷(SA-β-gal)阳性细胞百分率;用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测周期蛋白激酶抑制因子p21Cip1/Waf1和p53的基因表达。结果8Gy60Co-γ射线照射后骨髓基质细胞增殖降低;流式细胞仪结果显示照射后骨髓基质细胞发生G0/G1期阻滞,照射后1周G0/G1期细胞百分率由正常的66·95%±0·36%增加至89·83%±0·05%(P<0·01);细胞体积增大变平;照射后24h、72h、1周、2周SA-β-gal染色阳性细胞百分率照射组(20·33%±0·03%,34·33%±0·03%,86·33%±0·02%,95·67%±0·02%)显著高于正常组(P<0·01);p53、p21Cip1/Waf1基因表达水平分别于照射后24h或72h即见升高,一直持续至照射后两周,与正常对照组相比差异均有统计学意义(P<0·01)。结论γ射线作用于小鼠骨髓基质细胞后,导致小鼠骨髓基质细胞早期衰老,p53-p21Cip1/Waf1通路在其中可能发挥重要的作用。     

Expression of triggering receptor on myeloid cell 1 and histocompatibility complex molecules in sepsis and major abdominal surgery

AIM: To evaluate the surface expression of triggering receptor on myeloid cell 1 (TREM-1), class Ⅱ major histocompatibility complex molecules (HLA-DR), and the expression of the splicing variant (svTREM-1) of TREM-1 in septic patients and those subjected to major abdominal surgery. METHODS: Using flow cytometry, we examined the surface expression of TREM-1 and HLA-DR in peripheral blood monocytes from 11 septic patients, 7 elective gastrointestinal surgical patients, and 10 healthy volunteers. svTREM-1 levels were analyzed by RT-PCR. RESULTS: Basal expression of TREM-1 and HLA-DR in healthy volunteers was 35.91±14.75 MFI and 75.8±18.3%, respectively. In septic patients, TREM-1 expression was 59.9±23.9 MFI and HLA-DR expression was 44.39±20.25%, with a significant difference between healthy and septic groups (P<0.05) for both molecules. In the surgical patients, TREM-1 and HLA-DR expressions were 56.8±20.85 MFI and 71±13.8% before surgery and 72.65±29.92 MFI and 72.82±22.55% after surgery. TREM-1 expression was significantly different (P = 0.0087) between the samples before and after surgery and svTREM-1 expression was 0.8590± 0.1451 MF1, 0.8820±0.1460 MF1, and 2.210±0.7873 MF1 in the healthy, surgical (after surgery) and septic groups, respectively. There was a significant difference (P = 0.048) in svTREM-1 expression between the healthy and surgical groups and the septic group. CONCLUSION: TREM-1 expression is increased during systemic inflammatory conditions such as sepsis and the postoperative phase. Simultaneous low expression of HLA-DR molecules correlates with the severity of illness and increases susceptibility to infection. Additionally, TREM-1 expression is distinctly different in surgical patients at different stages of the inflammatory response before and after surgery. Thus, surface TREM-1 appears to be an endogenous signal during the course of the inflammatory response. svTREM-1 expression is significantly increased during sepsis, appearing to be an indicator of severity of illness. Together, these data indicate that TREM-1 may play an important role in establishing and amplifying the systemic inflammatory response. TREM-1, HLA-DR, and svTREM-1 expression analysis can provide useful diagnostic and prognostic indicators during SIRS, CARS, and sepsis.     

大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及向脂肪细胞分化的实验研究

目的探讨体外大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的分离培养及向脂肪细胞的分化潜能。方法从大鼠骨髓中获得间充质干细胞,体外培养传代。通过地塞米松、胰岛素等诱导MSCs向脂肪细胞分化,采用苏丹Ⅳ染色鉴定。结果诱导培养4d后,细胞胞浆内开始出现细小脂滴,12 d后在可观察到大量细胞由长梭形变为圆形或多边形,胞浆内形成高折光性的脂滴,苏丹Ⅳ脂肪染色后显示克隆中心的细胞胞浆内大量的颗粒状红色脂滴形成。细胞爬片显示约有60%骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞。结论大鼠骨髓间充质干细胞能进行体外分离培养并能诱导分化为脂肪细胞。     

以适体（aotaners）侦测早期癌细胞

据美国BIOCOMPARE科技新闻网（2006／8／1）报道，佛罗里达大学（University of Florida简称UF）的科学家成功的研发血癌细胞的新检测技术，让医生能在癌症初期即可侦测到癌细胞的存在。研究人员已成功的设计一系列的aptamers，能从健康的骨髓细胞与血癌细胞的混合体中正确的辨识出血癌细胞，此外，aptamers也能从淋巴瘤B细胞中辨认出血癌T细胞。研究人员表示：aptamers侦测癌症的方法，能被用来鉴别不同型态的癌症，且在癌症初期即能发现癌细胞。目前，他们正以此法进行肺癌、肝癌细胞以及被病毒感染细胞的测试。     

生血丸对环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制的影响

目的:研究生血丸对小鼠骨髓造血功能的增强作用。方法:将小鼠分成4组:对照组、环磷酰胺模型组、生血丸低剂量组、生血丸高剂量组。模型组、生血丸组腹腔注射环磷酰胺造模, 同时生血丸组给不同剂量生血丸灌胃, 对照组、模型组生理盐水灌胃。结果:高、低剂量生血丸对环磷酰胺所致小鼠外周血像、骨髓有核细胞数的降低均有升高作用(P<0.01)。对骨髓微核细胞增加有明显的拮抗作用(P<0.05)。生血丸组小鼠骨髓细胞染色体畸变率显著低于模型组, 低剂量组和高剂量组抑制率分别为51.2%、61.5%。结论:生血丸可拮抗环磷酰胺诱发的小鼠造血功能损伤。     

“秘灵王”对骨髓受抑模型鼠的免疫调整作用

观察了应用适当浓度“秘灵王”（ＭＬＷ）在体外可诱导小鼠骨髓细胞（ＢＭＣ）增殖，促进其产生ＩＬ－３、ＩＬ－６样活性物质，其中水平与ＢＭＣ增殖能力呈高度正相关，在体内ＭＬＷ亦可促进正常鼠的骨髓细胞活性。在此基础倒ＭＬＷ对骨髓受抑制模型鼠骨髓干细胞增殖、粒－巨细胞集（ＧＭ－ＣＦＵ）形成能力皆有显著调整作用，对ＢＭＣ培养上清中ＩＬ－３、ＩＬ－６样活性物质水平也具有调整作用，其水平的增高与骨髓细胞增殖能力，     

血小板第4因子对急性放射损伤小鼠骨髓细胞凋亡的影响

目的：研究血小板第4因子（platekt factor 4．PF4）对用5．0 Gy ^60COγ 照射损伤小鼠骨髓细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：30只雄性BALB／c小鼠随机分为3组：正常对照组（6只）、PF4处理组（12只）和照射组（12只）。在照射前26、20h分别给PF4处理组小鼠腹腔注射40μg／kg的PF4，再用5．0Gy的^60COγ射线全身均匀照射。照射后4、20h应用流式细胞术（FCM）测定小鼠骨髓细胞的凋亡率；并用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax的表达。结果：照射后4、20hPF4处理组的小鼠骨髓细胞的凋亡率低于照射组，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。Western blot检测显示照射后4、20h照射组小鼠骨髓细胞Bax的表达要比正常对照组和PF4处理组的表达要高。结论：PF4可以抑制辐射所致小鼠骨髓细胞的凋亡。此保护机制可能与促凋亡蛋白Bax表达的下调有关。     

桥接整合因子1 通过c-MYC途径抑制非小细胞肺癌A549 细胞中PD-L1的表达

目的：研究人非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）A549 细胞中桥接整合因子-1（bridging intergrator-1,BIN1）对程序性死亡受体-配体1（programmed death-ligand 1,PD-L1）表达的影响及其机制。方法：采用qRT-PCR和Western blotting方法检测A549 细胞和正常人胚肺成纤维细胞2BS中BIN1 与PD-L1 基因和蛋白表达情况,通过基因转染技术、利用阳离子脂质体将含有人全长BIN1 基因序列的真核表达质粒CMV-MCS-GFP-SV40-Neomycin-BIN1 转染到A549 细胞中（BIN1+组）,构建过表达BIN1 的细胞株,采用RNA干扰技术将干扰骨髓细胞瘤病毒癌基因（cellular-myelocytomatosis viral oncogene ,c-MYC）的c-MYC-siRNA转染到A549 细胞中（c-MYC-siRNA组）以敲低c-MYC基因表达,通过qRT-PCR和Western blotting 方法验证转染效果及过表达BIN1 基因或敲低c-MYC基因对A549 细胞中c-MYC 和PD-L1 表达的影响。结果：与2BS 细胞相比,A549 细胞中BIN1 基因和蛋白均呈低表达状态,而PD-L1 呈高表达状态（均P<0.05）。将携带BIN1 基因的真核表达质粒转染到A549 细胞后,BIN1 基因和蛋白表达水平较对照组显著升高（P<0.05）,而PD-L1 表达显著降低（P<0.05）。c-MYC-siRNA 转染到A549 细胞后,细胞内c-MYC表达显著降低（P < 0.01）,PD-L1 表达明显下调（P<0.01）。结论：BIN1 过表达可以通过失活c-MYC通路降低PDL1表达,从而抑制A549细胞的免疫逃逸。     

非霍奇金淋巴瘤免疫分型与骨髓细胞形态学分析的临床意义

目的探讨非霍奇金淋巴瘤免疫分型与骨髓细胞学在临床上的应用价值。方法在本院2015年4月到2016年4月诊治的非霍奇金淋巴瘤患者中抽取55例作研究对象,进行骨髓细胞形态学检查,并取非霍奇金淋巴瘤病理标本,使用单克隆相关抗体进行免疫组织化学检验,评估骨髓细胞形态学与免疫组织化学分型检测在非霍奇金淋巴瘤中的诊断价值。结果 (1)免疫组织化学分型检测:T细胞淋巴瘤相关抗体CD45RO的阳性率是90%,CD3阳性率是85%,CD30的阳性率是67%;B细胞淋巴瘤相关抗体CD20阳性率是90%;(2)骨髓细胞形态学:淋巴细胞骨髓侵犯为18%,进展成淋巴瘤-白血病期为12%。结论免疫组织化学分型检测有助于明确非霍奇金淋巴瘤类型,而骨髓细胞形态学分析则可确定非霍奇金淋巴瘤患者临床分期,是非霍奇金淋巴瘤临床诊断的重要依据。