表达嵌合性T细胞受体的肿瘤浸润淋巴细胞对KDR表达阳性细胞的选择性杀伤作用

目的 研究表达嵌合性T细胞受体VEGF 121-hinger-FcRγ的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)对血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR(kinase-domain insert containing receptor)表达阳性细胞的选择性杀伤作用。方法 应用分子克隆技术重组VEGF 121-hinger-FcRy(Vhγ),构建重组逆转录病毒质粒pMSCVneo-Vhγ,经PT67包装后筛选高滴度的病毒,体外感染分离于肝癌组织的TIL,获得MSCVneo-Vhγ-TIL。以空病毒感染TIL获得的MSCVneo-TIL作为对照。以MTT比色法分析不同的TIL细胞对4种靶细胞(不表达VEGF受体KDR的成纤维细胞系NIH3T3和肝癌细胞系HepG2,以及表达VEGF、受体KDR的人脐静脉血管内皮细胞系ECV304和恶性黑色素瘤细胞系A375)的杀伤活性。结果 未转染的TIL和MSCVneo-TIL对NIH3T3和ECV304无明显的杀伤作用,对HepG2和A375有一定杀伤作用,对4种靶细胞杀伤活性的差异无显著性;MSCVneo-Vhγ-TIL对NIH3T3无明显杀伤活性,对ECV304有明显杀伤活性,对HepG2的杀伤与TIL、MSCVneo-TIL相比差异无显著性,而对A375的杀伤明显增强。结论 嵌合性T细胞受体Vhγ经逆转录病毒载体介导,可在TIL细胞表面稳定表达,并获得选择性识别和溶解KDR阳性血管内皮细胞和肿瘤细胞的新效应功能。     

人胎胃粘膜NOS阳性细胞的免疫组化观察

目的:探讨人胎胃粘膜NOS阳性细胞发育规律。方法:用免疫组织化学法对人胎胃粘膜NOS阳性细胞的表达进行观察。结果:第3~6个月龄时,胃粘膜固有层内皆可见胞体较小的NOS阳性细胞分布,随着胎龄的增加,NOS阳性细胞数目逐渐增多,染色逐步加深。第7个月龄时,NOS阳性细胞增殖达到高峰,胞体增大,构成胃腺的一部分。第8~10个月龄时,胃腺中NOS阳性细胞数目显著减少,但细胞胞体大,胞质多,深染。结论:胃粘膜内NOS阳性细胞的发育与胃粘膜上皮细胞及胃腺的发育密切相关。     

IL-13和CD86对9HTE细胞株和哮喘患儿PBMC表达CD86水平的影响

目的 了解IL-13和CD86在哮喘发病中的作用及anti-CD86 McAb治疗哮喘的机理。方法 随机选择门诊哮喘急性发作期患儿30例，正常健康儿童30例作为健康对照组。分别用rhIL-13、TNF-α和rhIL-13 TNF-α干预9HTE人气道上皮细胞株和哮喘患儿外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，用直接免疫荧光流式细胞术(FCM)检测9HTE人气道上皮细胞株表达CD86的百分率、PBMC中CD14^*细胞表达CD86的平均荧光强度(MFI)及脂多糖(LPS)刺激后PBMC中CD19^ CD86^ 双阳性细胞百分率。结果 (1)分别用TNF-α、rhIL-13和TNF-α rhIL-13干预9HTE细胞株后CD86的表达，三组之间表达的百分率差异无统计学意义；rhIL-13 anti-CD86 McAb干预9HTE细胞株后，9HTE细胞表达CD86水平较其他组降低，差异有统计学意义。(2)哮喘组中的空白组、IL-13组、TNF-α组、TNF-α IL-13组及anti-CD86组的CD14^ CD86^ 的平均荧光强度和CD19^ CD86^ 百分率均较相应的对照组高，差异有统计学意义。(3)TNF-α IL-13干预后，CD14^ CD86^ 的平均荧光强度和CD19^ CD86^ 百分率较对应的空白组、IL-13组和TNF-α组明显增高，差异有统计学意义；(4)anti-CD86 McAb干预后，CD14^ CD86^ 的平均荧光强度和CD19^ CD86^ 百分率较对应的其他组明显减低，差异有统计学意义。结论 IL-13可诱导9HTE细胞株、PBMC中的CD14^ 细胞和CD19^ 细胞表达CD86；anti-CD86 McAb可阻断9HTE细胞株、PBMC中的CD14^ 细胞和CD19^ 细胞表达CD86。提示IL-13和CD86在哮喘发病中起重要作用，anti-CD86 McAb治疗哮喘具有一定的可行性。     

NHL中S-100β蛋白阳细胞的分布及其意义

采用抗S-100蛋白抗体双PAP法对85例非何杰金氏淋巴瘤中S-100β蛋白阳性(S100β~+)细胞的分布进行观察。结果,NHL中S100β~+细胞多呈较均匀地分布于肿瘤实质中与瘤细胞密切接触。低度恶性NHL中S100β~+细胞的数量明显多于高度恶性者(P<0.01);长生存组中S100β~+细胞亦明显多于短生存组(P<0.01)。提示,S100β~+细胞在机体抗肿瘤免疫中具有重要作用,是估计患者预后的有价值的指标。     

树突状细胞在再生障碍性贫血患者T细胞寡克隆增生中的作用

目的：探讨树突状细胞（Dendritic cell,DC）在再生障碍性贫血（AA）发病中的作用,尤其是对淋巴细胞异常活化的激发作用。方法：采用直接免疫荧光标记流式细胞术分析AA患者骨髓中I型DC的比例;在体外用重组人粒单细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）及白介素4（IL-4）诱导外周血单个核细胞成为DC,流式细胞仪检测DC表型,并观察经纯化人脐血CD34^＋细胞抗原,经可溶性人CD40配体（rhsCD40L）激发后对自体T细胞活化和扩增效应;实时定量PCR（RQ-PCR）定量测定DC载荷抗原前后T细胞TCRVβ基因谱的改变。结果：AA患者骨髓中CD1a^＋CD11c^＋细胞和CD11c^＋CD83^＋双阳性细胞比例增多,且以CD11c^＋CD83^＋双阳性的成熟DC为主;外周血来源的DC负载人脐血CD34^＋细胞后对自体淋巴细胞具有明显的刺激作用,并使T细胞TCRVβ基因谱发生取用偏移。结论：DC在AA淋巴细胞寡克隆增殖中起重要作用,但识别的何种抗原尚进一步研究。     

实验性肝癌中比较槐耳与IL-2对PTEN和IL-2R阳性细胞的影响

目的　比较槐耳清膏与IL - 2对抑癌基因PTEN表达和IL - 2R阳性细胞的影响。方法　应用二乙基亚硝胺 (DENA)制备 4 0只大鼠肝癌模型 ,分为 5组 ,对照组 (G1)、单纯诱癌组 (G2 )、诱癌加槐耳清膏组 (G3)、诱癌加 9周后槐耳清膏组 (G4 )和诱癌加 9周后IL - 2组(G5 )。于实验第 2 0周处死动物取肝组织 ,用RT -PCR检测PTEN表达 ,免疫组化检测IL - 2R阳性细胞 ,并通过计算机图像分析系统分别比较各组中PTEN的表达量和IL - 2R阳性细胞数。结果　G3,G4 ,G5肝癌的形成率明显降低 ,肝内IL - 2R阳性的活化T细胞数G3和G5显著高于其他各组 (P均 <0 .0 1)。在G5中 ,无癌形成的肝内IL - 2R阳性细胞数显著高于有癌形成者。PTEN相对表达量G3显著高于G2 (P <0 .0 1)。结论　槐耳清膏和IL - 2均能增加肝内IL - 2R阳性细胞数 ,增强体内细胞免疫功能 ,有效抑癌 ;槐耳清膏还能抑制抑癌基因PTEN的缺失而发挥抑癌作用 ,槐耳抗癌的应用前景将优于IL - 2。     

视神经不完全损伤后Long Evans大鼠视网膜神经元凋亡的实验研究

目的观察视神经不完全损伤后Long Evans大鼠视网膜神经元凋亡的情况，方法用大鼠视神经钳夹伤模型，于伤后1、3、5、7、14d通过未端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素化dUTP缺口未端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labllingTUNEL)检测视网膜神经元的凋亡，结果视神经钳夹伤后7d视网膜出现TUNEL阳性细胞，14d视网膜TUNEL阳性细胞明显增多。结论视神经不完全损伤后存在视网膜神经元的凋亡征象，是，导致视神经不完全损伤后视网膜神经节细胞及内、外核层视神经元死亡的重要方式之一。     

DAPK3和CDK8在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨死亡相关蛋白激酶3(DAPK3)和细胞周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)在宫颈癌组织中的表达及临床意义.方法 选取厦门市第五医院2018年1月至2021年1月进行宫颈癌手术治疗的患者86例,取手术过程中的宫颈癌组织与癌旁正常组织进行研究,探讨宫颈癌组织与癌旁正常组织中DAPK3与CDK8表达情况、宫颈癌组织中D...     

猿肾病毒40大T抗原基因永生化大鼠星形胶质细胞株的构建

目的 构建永生化大鼠星形胶质细胞，为转基因细胞移植镇痛提供细胞载体。方法 采用差速粘附法体外分离和培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞。利用脂质体将含有猿肾病毒40大T抗原(SV40Tag)基因的质粒pCMVSV40T／PUR转染培养的大鼠星形胶质细胞。经嘌呤霉素1．5μg／ml筛选后，挑选阳性细胞克隆扩大培养并连续传代。PCR、RT-PCR及免疫组化检测阳性细胞克隆中SV40Tag基因的整合情况及其表达，并对传代细胞的胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)进行检测。结果 成功获得体外培养的大鼠星形胶质细胞，GFAP阳性表达；筛选获得阳性细胞克隆，连续传代培养近50代；PCR、RT-PCR产物经1．5％琼脂糖凝胶电泳分析显示558bp处有一特异性扩增条带，与阳性对照条带相同，而未转染pCMVSV40T／PUR的细胞无扩增条带，回收片段经测序、比对与SV40Tag的基因序列一致(100％)；同时转染的阳性细胞克隆SV40Tag和GFAP免疫染色阳性。结论 成功地构建了SV40Tag基因永生化的大鼠星形胶质细胞株。