黄芪诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究

目的观察黄芪注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化的特点。方法使用稀释浓度为200mg／ml的黄芪注射液诱导BMSCs，分别在1、3、6d倒置显微镜观察细胞形态变化，免疫细胞化学方法观察巢蛋白（nestin）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、微管相关蛋白-2（MAP-2）的表达。结果诱导后可见细胞形态发生改变，自胞体长出突起，随诱导时间延长，长出突起的细胞数量增多，突起进一步伸长，部分突起末端呈分叉状，可见网络状连接。免疫细胞化学示：nestin阳性细胞、NSE阳性细胞和GFAP阳性细胞在诱导第3天较多，MAP-2阳性细胞在第6天较多。结论黄芪首先诱导BMSCs向神经干细胞分化，然后促进其向神经元或神经胶质细胞的非特异性分化，并促进已分化的细胞进一步成熟、老化。     

塞来昔布对大鼠癫痫持续状态海马神经元凋亡及Bcl-2表达的影响

目的探讨塞来昔布对大鼠癫痫持续状态（SE）后海马神经元凋亡的影响及其可能机制。方法采用氯化锂-匹罗卡品制作大鼠癫痫持续状态模型。Wistar大鼠54只，随机分为模型组、塞来昔布组和对照组。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）观察SE后12h、24h、72h和7d海马神经细胞凋亡的动态变化，免疫组化法观察各组海马Bcl-2的表达。结果对照组未见TUNEL阳性细胞；模型组SE后12h可见较多TUNEL阳性细胞，72h达高峰，7d减少；塞来昔布组各时间点凋亡细胞数均明显少于模型组（P〈0．01）。对照组Bcl-2有基础量的表达；模型组SE后12h观察到Bcl-2表达增多，24h减弱，72h后仅有少量表达；塞来昔布组24h后各时间点Bcl-2表达均高于模型组（P〈0．01）。结论塞来昔布可增加海马Bcl-2的表达，对癫痫发作后神经元凋亡具有保护作用。     

体外培养及其诱导分化人胚胰腺巢蛋白和神经元素3阳性细胞的实验

目的：观察从人胚胎胰腺体外分离培养的巢蛋白和神经元素3阳性细胞，分析其基因表达及诱导分化能力，探讨为胰腺组织工程移植提供种子细胞的可能性。方法：实验于2002—01／2004—05在北京大学干细胞中心完成。实验采用标本为北京市海淀妇产医院产科药物引产的人胚胎，引产药物为米索。使用的胚胎经孕妇同意，并签署同意书。选取18例胎龄为12～24周的人胚胰腺，用Ⅴ型胶原酶消化获得贴壁生长的人胚胰腺细胞，观察其原代培养、传代培养、增殖能力及体外诱导分化能力；胰腺干细胞标志巢蛋白和神经元素3阳性细胞及胰岛素表达应用免疫荧光染色及反转录聚合酶链反应检测；细胞总蛋白中胰岛素含量应用化学发光法检测。结果：18例胎龄为12～24周的人胚胰腺全部纳入实验。①人胚胎胰腺组织体外培养和诱导分化：人胚胎胰腺组织消化后可获得胰岛样结构，能贴壁生长，传代20代以上，然后进入凋亡期。汇合的细胞加入诱导分化培养基，24h后即可见大部分细胞聚集成团；周围散在贴壁细胞突起细长，立体感增强。随着诱导时间的延长，细胞增殖缓慢，个别细胞脱落、死亡。细胞团易于脱落漂浮，继而死亡。但仍有部分细胞及细胞团贴壁生长。②巢蛋白、胰岛素、胰高血糖素、广谱角蛋白及角蛋白19含量测定：无论是第2代还是第10代细胞中均无胰岛素、胰高血糖素CK-Pan和CK-19染色阳性的细胞。第2代细胞中，巢蛋白阳性细胞约占总细胞数的20％，个别细胞核神经元素3阳性，多数细胞为两者均阴性。第10代细胞中95％以上为巢蛋白强阳性细胞，约90％细胞神经元素3阳性且阳性部位同时存在于细胞核和细胞质中，并与巢蛋白共表达。但第18代细胞，荧光染色神经元素3染色转阴性（反转录聚合酶链反应可检测到少量mRNA的表达），而巢蛋白阳性无明显变化。③诱导前后巢蛋白和神经元素3阳性细胞及胰岛素表达：诱导前有巢蛋白、胰十二指肠同源盒基因-1、神经元素3的表达，无胰岛素表达。诱导后出现胰岛素表达，胰十二指肠同源盒基因-1表达增高，巢蛋白和神经元素3表达下降。④胰岛素含量测定结果：诱导分化后，巢蛋白和神经元素3阳性细胞的总蛋白质中含有胰岛素量为2．10IU／g总蛋白，作为阳性对照的人胚胎胰腺组织总蛋白中的含量为2．70IU/g总蛋白，而未诱导的细胞的总蛋白质中未检测到胰岛素。结论：从人胚胎胰腺可以体外分离获得巢蛋白和神经元素3阳性人胚胎胰腺干细胞，为未分化细胞，能在体外大量扩增，可长期培养。总蛋白中有胰岛素表达，有分化为胰岛素阳性细胞的潜能，有望为胰腺组织工程移植提供足够的种子细胞。     

PI3K在BCR／ABL阳性细胞中促进细胞周期进程和抗凋亡的作用

BCR／ABL阳性细胞中，磷酯酰肌醇-3-激酶（P13K）途径是BCR／ABL激活的一条重要途径，它对于BCR／ABL阳性细胞恶性表型的维持是必不可少的。现对PI3K在BCR／ABL阳性细胞中促进细胞周期进程和抗凋亡的作用和机制作一综述。     

实验性肝硬化大鼠CD34阳性细胞Fas抗原表达及其意义

目前肝硬化外周血细胞减少的发生机制仍不明确。近几年大量研究表明,造血干细胞的Fas抗原表达变化与多种造血与非造血疾病有关,我们推测在肝硬化时骨髓CD34＋细胞通过Fas／FasL系统参与而诱导其凋亡,引起造血干／祖细胞减少。本研究以四氯化碳、酒精等复合因素诱导肝硬化大鼠为实验模型,观察药物诱导的肝硬化形成过程中骨髓CD34＋细胞Fas表达的动态变化,探讨Fas介导的骨髓CD34＋细胞凋亡在肝硬化外周血细胞减少中的作用。     

Lewis鼠视网膜脉络膜巨噬细胞、MHC－Ⅱ类抗原阳性细胞的免疫组织化学研究

在视网膜平片、脉络膜－巩膜复合体平片及眼组织切片上进行了免疫组织化学研究，在平片上发现，视网膜和脉络膜内均有网状分介的巨噬细胞，脉络膜内尚有网状分布的ＭＨＣ－Ⅱ类抗原阳性细胞，细胞的形态、密度容易辨认和计算。切片则未能显示组织中细胞的分布、确切的形态特征及密度。说明在组织平片上进行免疫组化研究具有重要价值。本研究结果并提示：巨噬细胞、ＭＨＣ－Ⅱ类抗原阳性细胞在维持视网膜和脉络膜免疫环境的稳定性和防御感染等方面可能起重要作用．     

Expression of Hsp70 and Caspase-3 in rabbits after severe traumatic brain injury

ObjectiveTo investigate the expression of Caspase-3 and Hsp70 in rabbits after severe traumatic brain injury (TBI) and to explore the feasibility of its application in estimation of injury time in forensic medicine.MethodsA rabbit model of heavy TBI was developed by high velocity impact on the parietal bone with an iron stick. Totally 8 healthy adult New Zealand white rabbits were randomly divided into control group (n=2) and injury group (n=6). Four hours after injury, tissue specimens from the parietal lobe, temporal lobe, occipital lobe, cerebellum and brainstem were harvested to detect the expression of Hsp70 and Caspase-3 by immunohistochemistry. Besides, the gray values of cells positive for Hsp70 and Caspase-3 were analyzed with an image analyzer.ResultsImmunohistochemistry staining demonstrated a low level of Caspase-3 and Hsp70 expression in normal control group. While in injury group, both the Caspase-3 and Hsp70 expression was significantly elevated (P<0.05). Positive cells gathered around the lesion focus. Occipital lobe and cerebellum had fewer positive cells while temporal and brainstem had the fewest.ConclusionThe expression of Caspase-3 and Hsp70 at an early stage following severe TBI is characteristic and can be applied to estimate the time of injury.     

SLE患者外周血Tc1/Tc2与CD4/CD25双阳性细胞关联性分析

目的分析SLE患者外周血CD8淋巴细胞分泌的细胞因子与CD4/CD25双阳性细胞反应格局与疾病的关联性.方法用三色免疫荧光单细胞染色法检测了11例SLE患者外周血CD8T细胞分泌的细胞因子与CD4/CD5双阳性细胞的表达.结果所检测11例SLE患者中有3例表现为Tc0,即同时分泌IFN-γ和IL-4的Tc细胞.4例以分泌IFN-γ为主,为Tc1,4例以分泌IL-4为主,为Tc2.同时测定了SLE病人与正常对照组CD4/CD25双阳性细胞群发现CD4/CD25双阳性细胞群在活动期SLE中显著低下[(17.54±4.11%)%,而对照组为(35.42±3.30)%].结论SLE患者外周血中CD8亚群表现为异质性,且与CD4/CD25双阳性细胞有关.至于其在SLE发病中的意义正在进一步研究中.