Short-term environmental enrichment exposure induces proliferation and maturation of doublecortin-positive cells in the prefrontal cortex

Previous studies have demonstrated that doublecortin-positive immature neurons exist pre- dominantly in the superficial layer of the cerebral cortex of adult mammals such as guinea pigs, and these neurons exhibit very weak properties of self-proliferation during adulthood under physiological conditions. To verify whether environmental enrichment has an impact on the proliferation and maturation of these immature neurons in the prefrontal cortex of adult guinea pigs, healthy adult guinea pigs were subjected to short-term environmental enrichment. Animals were allowed to play with various cognitive and physical stimulating objects over a period of 2 weeks, twice per day, for 60 minutes each. Immunofluorescence staining results indicated that the number of doublecortin-positive cells in layer II of the prefrontal cortex was significantly increased after short-term environmental enrichment exposure. In addition, these doublecortin-positive cells co-expressed 5-bromo-2-deoxyuridine （a marker of cell prolifera- tion）, c-Fos （a marker of cell viability） and NeuN （a marker of mature neurons）. Experimental findings showed that short-term environmental enrichment can induce proliferation, activation and maturation of doublecortin-positive cells in layer II of the prefrontal cortex of adult guinea pigs.     

SDF-1基因修饰的真皮多能干细胞移植修复脊髓损伤

目的探索基质源性因子-1(SDF-1)基因修饰的真皮多能干细胞(dMSCs)移植后可否启动Nestin阳性细胞修复脊髓损伤(SCI)。方法采用贴壁法分离培养大鼠dMSCs,并将pAdEasy腺病毒表达载体系统构建的Adv-SDF-1加入至dMSCs共同培养,获得表达SDF-1的dMSCs。用改良Allen重物打击法将36只大鼠制作SCI并均分为3组,在SCI处用显微注射的方法每组分别加入表达SDF-1的dMSCs、dMSCs、生理盐水。伤后3、7d检测损伤处脊髓神经干细胞功能状况,采用BBB评分法评价大鼠的神经功能恢复情况。结果 Adv-SDF-1感染的dMSCs SDF-1表达增加,将SDF-1修饰的dMSCs移植后还可明显增加室管膜Nestin阳性细胞数量(P<0.05),并迁移至SCI部位,BBB评分显示SDF-1修饰的dMSCs移植后评分更高(P<0.05)。结论 SDF-1基因修饰的dMSCs移植后可启动脊髓Nestin阳性细胞参与损伤修复,更好地促进神经功能恢复。     

鼻用皮质类固醇对鼻息肉中白细胞介素5 mRNA表达的影响

OBJECTIVE: To investigate the effect of intranasal glucosteroid treatment on the expression of interleukin (IL)-5 gene in nasal polyps. METHODS: Nasal polyps from topical steroid treated patients (n = 20) and untreated patients (n = 20) were investigated with the technique of mRNA in situ hybridization. RESULTS: The majority of IL-5 mRNA positive cells in nasal polyps were lymphocytes or eosinophils. No statistical significance was found in the densities of IL-5 mRNA positive cells between allergic patients [(12.6 +/- 4.6)/0.25mm2] and nonallergic patients [(14.3 +/- 4.1)/0.25mm2] (t = -0.775, P > 0.05). Compared with the control group [(13.9 +/- 4.2)/0.25mm2], the density of IL-5 mRNA positive cells was decreased in the steroid-treated group [(10. 2 +/- 3.1)/0.25mm2], and the difference reached statistical significance (t = 3.114, P < 0.01). CONCLUSIONS: These findings indicate that topical steroid treatment may suppress the IL-5 gene expression, and steroids may inhibit eosinophil functions.     

三七总皂甙对大鼠脑出血后脑血流及细胞凋亡的影响

目的 探讨大鼠实验性脑出血后脑组织局部脑血流的变化及神经细胞凋亡发生的规律，观察三七总皂甙对出血性脑损伤的保护作用。方法 采用Nath改良法建立大鼠脑出血模型，氢清除法测定其局部脑血流，用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡。结果 出血后1h全脑的血流量均下降，4h恢复至对照组水平，并维持至出血后24h，出血后48h再次出现脑血流下降。而干预组脑血流下降不明显，但较脑出血组有统计学意义（P〈0．05）。大鼠脑出血24h后脑组织TUNEL阳性细胞数表达显著增高，与脑出血模型组比较，干预组TUNEL阳性细胞数显著减少（P〈0．01）。结论 三七总皂甙可减轻脑出血后继发性的缺血性损害，并有抑制细胞凋亡的作用。     

年龄相关的循环内皮祖细胞变化与动脉弹性关系的研究

目的　研究年龄对循环内皮祖细胞及动脉弹性的影响,探讨循环内皮祖细胞水平与动脉弹性损伤的关系。方法　56例健康男性志愿者分成青年组(n=26)和老年组(n=30)。采用桡动脉脉搏分析法无创性评价健康志愿者大动脉弹性指数(C1 )和小动脉弹性指数(C2 ), 流式细胞仪测定外周血中CD34+单个核细胞的水平,单个核细胞体外培养2周,荧光显微镜鉴定FITC UEA I和DiI acLDL双染色阳性细胞为内皮祖细胞。结果　老年组与青年组相比较,C1 和C2 明显降低[C1(11. 73±1 .45)比(16 .89±1 .69)ml/mmHg×10, P<0. 001; C2 (8 .40±1 45)比(10. 58±1 .18)ml/mmHg×100, P<0 .001 ];循环内皮祖细胞数目明显减少[ ( 0 .13±0. 02 )比( 0 .17±0. 04 )%,P<0 .05];循环内皮祖细胞水平与动脉弹性指数变化呈正相关(r=0. 47, P<0. 01;r=0 .4, P<0. 01),荧光显微镜鉴定贴壁细胞FITC UEA I和DiI acLDL双染色阳性。结论　增龄导致循环内皮祖细胞数量减少,提示血管内皮修复能力下降和功能障碍,损伤动脉弹性,循环内皮祖细胞水平有可能作为评价血管功能的替代指标。     

穴位移植同种异体骨髓间充质干细胞对梗死区心肌再生的影响

背景:在"实验家兔经穴标"准通过国家认证的基础上,许多现代研究表明穴位注射疗法具有药效与穴效整合、药效强、药效长的优点.目的:将中医传统医学穴位注射与现代医学干细胞治疗相结合,观察骨髓间充质干细胞穴位移植对家兔急性心肌梗死模型缺血心肌细胞的修复重建能力.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-06/08在辽宁中医药大学针灸系电生理实验室完成.材料:选用健康同本大耳白兔,用于制备急性心肌梗死模型.方法:将造模成功的30只心肌梗死家兔按随机数字表法分为3组(n=10),模型对照组不做其他处置;穴位注射干细胞组于造模1周后经穴位注射已经分离、培养、扩增、标记的家兔骨髓间充质干细胞悬液;穴位注射生理盐水组经穴位注射等量的生理盐水.主要观察指标:对各组家兔心肌梗死区进行Brdu免疫组织化学染色以观察穴位移植骨髓间充质干细胞是否迁移至梗死区;对Brdu染色阳性的细胞复染心肌特异性肌钙蛋白I以观察迁移的细胞是否分化及分化的性质.结果:穴位注射干细胞组梗死区心肌组织免疫组织化学Brdu染色阳性,心肌特异性肌钙蛋白I染色阳性:模型对照组及穴位注射生理盐水组梗死区心肌组织未见Brdu标记阳性细胞.结论:家兔急性心肌梗死模型经穴位移植的骨髓间充质干细胞,可迁移至心肌梗死区,并可以在梗死区分化为心肌细胞.     

器官移植受者术后巨细胞病毒感染的监测

目的:评价外周血巨细胞病毒pp65抗原检测在器官移植受者移植术后巨细胞病毒感染监测中的价值,并与巨细胞病毒抗体检测进行对比.方法:选择2005-05/2006-08解放军总医院第二附属医院器官移植中心器官移植受者43例,于移植术后两三个月取外周血检测巨细胞病毒抗原和抗体.①巨细胞病毒早期抗原pp65检测:取5～7 mL外周血加入EDTA抗凝,采用间接免疫荧光方法进行,以每2×105个白细胞中发现1个或以上阳性细胞定为阳性.②巨细胞病毒特异性IgG,IgM抗体检测:取3 mL外周血,不抗凝,以间接ELISA法检测.结果:43例受试者均进入结果分析,无脱落.①43例中术后外周血巨细胞病毒早期抗原pp65阳性9例,均在检测同时或2～10d后出现明显的巨细胞病毒感染症状.②巨细胞病毒抗体IgG均为阳性,仅能说明受试者有过巨细胞病毒感染史.③巨细胞病毒抗体IgM阳性2例,检出率低于pp65抗原阳性者.结论:应用间接免疫荧光方法检测巨细胞病毒pp65抗原具有快速、特异、更易于接受的优点,适用于器官移植术后巨细胞病毒感染的监测,而巨细胞病毒抗体的检测仅能作为辅助参考.     

内皮前体细胞与平滑肌细胞联合培养构建组织工程血管:最适比例验证

目的:由内皮前体细胞分化的内皮细胞与成熟平滑肌细胞联合培养可以为组织工程血管的形成提供更接近天然的条件.实验拟进一步证明两种细胞联合培养可促进血管内皮细胞生长,以及两种细胞的最适比例.方法:实验于2006-01/2007-05在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成.①实验材料:新鲜脐带取自国际第一妇婴保健医院,产妇知情同意.②实验方法及评估:从人脐动脉中用组织块培养法分离并原代培养血管平滑肌细胞,免疫荧光方法鉴定其平滑肌肌动蛋白表达情况;采用密度梯度离心法分离脐血中的内皮前体细胞,经体外定向诱导分化和免疫荧光方法鉴定其表型;无菌条件下制作Ⅰ型胶原凝胶,在其上以3:1～4:1的比例混匀联合培养内皮前体细胞与平滑肌细胞,并观察两种细胞联合培养时的形态,分析两种细胞最合适的种植比例;免疫荧光方法观察在Ⅰ型胶原凝胶联合培养中CD31、vWF的表达以及内皮细胞的生长情况.结果:①原代培养的平滑肌细胞呈典型"波峰谷"形态,荧光染色平滑肌肌动蛋白呈阳性.②脐血来源的内皮前体细胞定向诱导分化为内皮细胞后,呈现出"铺路石"样形态,表达CD31、vWF,结合荆豆凝集素,提示具备成熟内皮细胞特性.③在Ⅰ型胶原凝胶上两种细胞增殖力均旺盛,与平滑肌细胞以3:1～4:1的比例种植在I型胶原凝胶培养一段时间后,内皮前体细胞可从平滑肌细胞处得到支持,形成血管样网络结构.④共培养1周后,CD31与vWF阳性细胞即内皮前体细胞分化而来的内皮细胞互相连接,形成环形结构.结论:内皮前体细胞和平滑肌细胞以3:1～4:1共培养的模式可以促进微血管样结构的形成.     

骨髓基质细胞向神经样细胞的分化

目的:有研究表明,在诱导剂β-巯基乙醇或二甲基亚砜与丁羟茴醚的作用下,80%骨髓基质细胞可诱导分化成神经样细胞,并表达神经元特异性蛋白,一些神经营养因子也能诱导骨髓基质细胞分化为神经样细胞.实验拟以三磷酸胞苷二钠为诱导剂,验证其诱导骨髓基质细胞分化为神经样细胞的可行性.方法:实验于2006-03/12在白求恩国际和平医院实验室完成.[1]实验材料:SD大鼠,体质量50～60g,雌雄不限,由河北医科大学实验动物中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.[2]实验方法:分离大鼠骨髓基质细胞进行体外培养,传代至第3代时实验组加入三磷酸胞苷二钠诱导剂诱导,对照组不加诱导剂.[3]实验评估:观察细胞分化为神经样细胞的形态变化,并进行免疫组织化学染色鉴定,计算阳性细胞百分比.结果:刚分离的骨髓基质细胞呈圆形,胞体透亮.接种24h后,少量细胞贴壁,72h后大部分细胞贴壁,形态为梭形、圆形、多角形,8～10d细胞达到90%融合,细胞呈长梭形排列呈栅栏状,传代后的细胞约24h完全贴壁,3～7d基本铺满瓶底.诱导后的骨髓基质细胞胞体变圆,突起逐渐伸长,并互相连接成网状,10d后免疫组织化学染色鉴定实验组表达神经元特异性烯醇化酶、神经胶质纤维酸性蛋白阳性细胞百分比明显高于对照组.结论:三磷酸胞苷二钠在体外可诱导骨髓基质细胞分化为神经样细胞.     

人神经干细胞移植到缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内的存活及分布

目的:新生儿缺氧缺血性脑病是导致脑性瘫痪的重要原因,至今缺乏有效疗法.将体外培养的人神经干细胞经脑室移植入缺氧缺血性脑损伤新生鼠,观察植入细胞在宿主脑内的存活、迁移及分化.方法:实验于2005-01/09在解放军海军总医院儿科实验室完成.①对象:神经干细胞来源于孕12周流产的人胎儿脑组织,孕妇签署知情同意书,符合医院伦理委员会规定.清洁级SD新生鼠80只,随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组,40只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:取人胚胎脑组织,机械分散法分离单个核细胞,接种于添加表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中,获取生长旺盛的人神经干细胞球,制成单细胞悬液,浓度约为5.0×1011L-1,培养6 d后行PKH标记用于植入后示踪.两组新生鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型,造模后3 d,细胞移植组损伤侧脑室缓慢注入5 μL人神经干细胞悬液,模型对照组于相同部位注入等量生理盐水.③实验评估:取未经PKH标记的细胞球, 通过免疫细胞化学染色鉴定巢蛋白的表达及其向神经元、星形胶质细胞的分化情况.分别于细胞移植后1,2,4周及3个月,常规取脑组织,行免疫组织化学和荧光分析,观察植入后细胞存活及分布情况.结果:在造模及细胞移植过程中,因麻醉、出血细胞移植组新生鼠死亡5只,模型对照组死亡7只,存活率85%～90%.①神经干细胞的鉴定及分化:80%活细胞巢蛋白呈阳性表达,并可分化为神经元、星形胶质细胞.②神经干细胞植入后存活及分布情况:植入后1周,神经丝蛋白阳性细胞多位于损伤侧皮质及海马处,纹状体、脑干、小脑、嗅球也有少量分布.植入后2周,海马和皮质可见神经丝蛋白阳性细胞,胞体伸出的神经微丝更长,细胞数量与1周时基本相似.植入后4周及3个月时PKH阳性细胞数量明显减少.结论:在含有表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中形成的人神经干细胞球,具有良好的增殖能力,可分化为神经元,移植至缺血缺氧新生鼠脑中能够向损伤区迁移,分布范围广.