影响乳酶生片中肠链球菌存活率因素的探讨

本文用正交法对乳酶生片生产中影响肠链球菌存活率的因素进行了探讨,得出影响存活率前三位的因素是“培养基的成分,压片的压力,菌种的优劣”,并优选出各因素水平间的最优组合。     

链球菌CpG DNA对寻常型银屑病患者T细胞活化的影响

研究链球菌核酸成分对寻常型银屑病患者T细胞活化的影响。利用层析法去除A型β溶血型链球菌超声粉碎产物中的核酸成分,分别用链球菌全菌抗原(streptococcal antigen,SA)和去除核酸的链球菌抗原(nucleic acid depleted-streptococ-cal antigen,non-NASA)刺激寻常型银屑病患者(20例)和正常人(12例)外周血单个核细胞(PBMC);同时non-NASA联合人工合成的CpG ODN(CpG-A和CpG-B)以及单用CpG ODN刺激患者PBMC(12例),24 h后采用流式细胞术检测并比较总T细胞及皮肤淋巴细胞抗原阳性(CLA+)T细胞活化表达CD69+及患者B细胞活化表达CD86+的百分率的差异。结果显示,在银屑病患者中,SA刺激后总T细胞和CLA+T细胞活化表达CD69+的百分率均高于non-NASA(P=0.012和0.042),而在正常人中两者无统计学差异,且均不激活T细胞表达CD69+(P>0.05);同时non-NASA联合CpG-A刺激患者PBMCs后总T细胞及CLA+T细胞表达CD69+的百分率亦高于non-NASA单独刺激(P=0.031和0.022),但联合CpG-B未发现差异(P>0.05),且CpG-A和B单独刺激对T细胞活化表达CD69+的百分率无影响(P>0.05)。另一方面,SA、non-NASA以及后者联合CpG-A刺激患者B细胞活化表达CD86+的百分率无统计学差异(P>0.05),但non-NASA联合CpG-B刺激可显著增加B细胞CD86+的表达率(P<0.01),同时CpG-B可激活B细胞表达CD86+,CpG-A无此作用。研究表明,去除核酸的链球菌抗原降低银屑病患者总T细胞以及CLA+T细胞的活化,但对B细胞活化无影响,提示链球菌CpG DNA可协同菌体蛋白诱导病理性T细胞的活化,参与银屑病的发生。     

B族链球菌C5a肽酶蛋白表位的克隆、表达和免疫学分析

目的应用生物信息学方法预测B族链球菌C5a肽酶蛋白表位，结合基因工程手段进行表位重组、表达和免疫原性分析。方法用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测B族链球菌C5a肽酶蛋白的表位，应用PCR技术扩增出编码该表位基因片段，克隆PCR产物构建重组质粒，测序验证。在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达融合蛋白。表达的蛋白经质谱分析和Western blot鉴定。纯化该融合蛋白并免疫C57／BL小鼠，萃取GBS表面蛋白，双向琼脂扩散试验检测抗体水平。结果在SCPB中预测到1个既具有MHC结合肽特性又具有B细胞表位特征的肽段。重组和表达了这一肽段，质谱得出与SCPB蛋白的相似性分数为79，Western-blot证实能与抗SCPB的抗体反应，纯化后融合蛋白纯度〉90％。动物实验证实融合蛋白能产生特异性的抗GBS抗体。结论重组表位具有一定免疫原性。为相关蛋白的毒力机制研究和亚单位疫苗等方面的研究打下了良好的基础。     

发病前细菌感染抑制过敏性哮喘发作的实验研究

目的： 研究发病前细菌感染对过敏性哮喘发病的影响。 方法： 用豚鼠作动物模型，观察金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌、肺炎双球菌等4种呼吸道常见细菌感染之后哮喘发作时肺泡灌洗液中的白细胞总数、酸性粒细胞总数和百分比以及肺部的病理变化。 结果： 各细菌感染组肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞总数均明显低于对照组，金黄色葡萄球菌组和大肠杆菌组酸性粒细胞总数和百分比明显降低，病理结果表明各细菌感染组的病变程度都要明显轻于对照组。 结论： 部分细菌感染后能够抑制哮喘的发作。     

链球菌M6蛋白的纯化及其在银屑病患者血清检测中的应用

为了进一步研究A群化脓性链球菌M6蛋白和点滴型银屑病之间的关系 ,我们对银屑病患者咽部菌群进行分离培养〔1〕 并对培养分离的链球菌中的M6蛋白基因进行检测〔2〕,对检测具有M6蛋白的化脓链球菌菌株再进行增殖培养 ,然后采用分子筛和阴离子交换层析的方法对链球菌菌体中的M6蛋白进行纯化 ,现将结果报道如下 :材料和方法A群化脓性链球菌 :从点滴型银屑病患者咽部培养获得的化脓性链球菌 ,接种至 10 %羊血斜面上 ,37℃培养过夜后 ,接种于液体培养基 ,经 10 0 0 0r min离心 30min ,收集菌体。用 0 .0 2mol L ,pH7.4的PBS缓冲液将化脓性链…     

rIL-18对肺炎链球菌肺炎小鼠Th1/Th2免疫应答的影响

目的 研究重组白细胞介素18(rIL-18)对肺炎链球菌肺炎小鼠Th1/ Th2免疫应答的影响.方法 鼻腔接种肺炎链球菌建立小鼠肺炎链球菌肺炎模型,将Balb/c小鼠24只随机分为3组,分别为对照组,肺炎组和肺炎rIL-18干预组(n=8 ),RT-PCR法检测各组小鼠肺组织中IFN-γ、IL-4 mRNA 的表达,同时支气管肺泡灌洗液(BALB)进行活菌计数,有核细胞分类计数.结果 ①肺炎rIL-18干预组BA LF中性粒细胞和巨噬细胞计数显著高于肺炎组和对照组(P＜0.001);②肺炎rIL-18 干预组BALF活菌计数显著低于肺炎组(P＜0.001);③肺炎rIL-18干预组肺组织IFN- γ mRNA表达上调而IL-4 mRNA表达下调(P＜0.001).结论 在小鼠肺炎链球菌肺炎早期给予rIL-18可诱导IFN-γ的合成,促进Th1免疫应答,使Th1/ Th2免疫平衡向Th1免疫偏移、促进宿主对肺炎链球菌的防御.     

变异链球菌葡聚糖结合蛋白D基因失活菌株的构建和鉴定

目的利用基因打靶技术构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白D基因（gbpD）失活株,用于葡聚糖结合蛋白D基因功能的研究.方法体外培养变异链球菌UA159菌株并以其基因组为模板,对gbpD基因内部序列进行PCR扩增,连接自杀载体pVA8912,分别用酶切及PCR鉴定;转化变异链球菌UA159株,用PCR及Western blot鉴定.结果经鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符,且为所需目的基因片段,成功构建了自杀质粒pVA8912-gbpD;经PCR鉴定及Western blot鉴定,gbpD基因失活株基因组中gbpD基因内部成功插入目的片段,且该菌株不表达GbpD蛋白.结论成功构建了用于变异链球菌gbpD基因打靶的自杀质粒和gbpD基因失活株,为该基因功能的研究奠定了基础.     

2例化脓性链球菌感染导致毒素休克综合征及坏死性筋膜炎病例分析

目的 探讨化脓性链球菌导致毒素休克综合征及坏死性筋膜炎的治疗方法。方法 回顾性分析某院收治的 2例化脓性链球菌感染患者的临床资料,总结治疗方法。化脓性链球菌感染并发链球菌毒素休克综合征及坏死性筋膜炎,具有发病急,进展快的特点,治疗上可予液体复苏、维持血压、补充凝血因子、抗感染、连续血液净化、提高免疫力、彻底清创引流等治疗。结果 2例患者经治疗后感染得到控制,病情逐步好转,最后治愈出院。结论 对于化脓性链球菌感染导致毒素休克综合征及坏死性筋膜炎的治疗,早期彻底的手术清创、有效的抗感染、人血白蛋白的使用、连续血液净化治疗等手段, 具有良好的效果。     

免疫斑点法测定A族链球菌表面IgG Fc受体

本研究采用辣根过氧化物酶标记免疫球蛋白Ｇ，以免疫斑点法直接测定１４１各种４族链球菌感染性疾病临床分离株表面ＩｇＧ，Ｆｃ段受体含量。结果表明：１．这种方法敏感生高，重复性好，操作简便，结果判断直观且可定量。２．９８％的菌株可测到不同疾病，不同Ｍ型的混浊因子，阳性和阴性菌株之间其受体含量的差异无显著性意义，提示；酶标ＩｇＧ直接免疫斑点法是测定ＧＡＳ表面ＩｇＧ Ｆｃ受体的较好的实验方法；感染菌株Ｆｃ受体