重组逆转录病毒载体介导基因转移的现状及思考

目的在将目的基因导入靶细胞实现基因治疗的过程中，载体起着关键作用。令人遗憾的是至今仍未能。建立一种兼顾安全与高效的载体系统，即使研究应用最广的逆转录病毒载体也不例外，利用重组逆转录病毒介导基因转移弥补及克服传统载体的缺陷，实现安全而高效的基因治疗势在必行。     

大鼠心肌肌钙蛋白I基因Lys184缺失突变重组腺病毒载体的构建

目的:构建SD大鼠心肌肌钙蛋白I(cTnI)赖氨酸(Lys)184缺失突变重组腺病毒载体。方法:利用PCR定点突变方法给大鼠cTn I基因引入Lys184缺失突变,将扩增片段克隆至pMD18-T载体,在C末端用PCR法加6×组氨酸(His)标签序列后,再亚克隆至Adeno-X腺病毒DNA,转染HEK 293细胞,包装形成重组腺病毒(Ad-cTnILys184del)。结果:PCR及测序结果表明,重组腺病毒序列正确,Western blot证明有融合突变蛋白表达。结论:本研究成功地构建了大鼠cTnI Lys184缺失突变重组腺病毒载体,为后续的功能研究提供了有价值的研究材料。     

人重组γ－干扰素（hrIFN－γ）对人胎盘滋养层hCG分泌和蜕膜蛋白质合成的影响

研究证明人重组γ－干扰素（ｈｒＩＦＮ－γ）对人胎盘滋养层组织绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）和蜕膜组织蛋白质合成在体外实验中均有抑制作用。结果指出ｈｒＩＦＮ－γ在剂量为２５０Ｕ／ｍｌ培液和２５００Ｕ／ｍｌ培液时明显地抑制滋养层组织ｈＣＧ分泌，与对照组比较Ｐ值分别为０．０５和０．０１，并呈剂量相关反应，同时ｈｒＩＦＮ－γ在剂量范围为１０Ｕ～１０００Ｕ／ｍｌ培液时，明显抑制蜕膜蛋白质合成３Ｈ亮氨酸掺入的ｃｐｍ值，在对照组和实验组之间无论是细胞内或是分泌蛋白都有明显差别（Ｐ＜０．０５），而且抑制作用呈剂量相关反应，ＩＦＮ－γ抗血清能阻断其抑制作用，但ＩＦＮ－α对蜕膜组织蛋白质合成无作用。     

rhTNF和化疗药物对人卵巢癌3Ao细胞株杀伤活性的研究

目的研究重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）和化疗药物对人卵巢癌３Ａｏ细胞株的杀伤活性。方法应用ＭＨ法测定ｒｈＴＮＦ和顺铂（ＤＤＰ）、更生霉素（ＫＳＭ）、环磷酰胺（ＣＴＸ）、依托泊甙（ＶＰ１６）联合疗法对３Ａｏ细胞的杀伤活性。结果ｒｈＴＮＦ对３Ａｏ的细胞毒性作用随浓度增高而增强，４种化疗药物单用时，ＤＤＰ对３Ａｏ细胞的细胞毒性最高，而且呈现明显的剂量依赖关系，ＫＳＭ与ｒｈＴＮＦ联用对３Ａｏ细胞有较强的协同细胞毒性。结论ｒｈＴＮＦ与不同的化疗药物联用对人卵巢癌３Ａｏ细胞株有不同的杀伤活性。     

重组腺相关病毒对中枢神经系统特异性转染的基础研究

中枢神经系统(CNS)疾病的基因治疗研究中，基因转染载体的选择非常重要。在现有的病毒载体中，重组腺相关病毒(recombined adeno—associated virus，rAAV)安全性好，无致突变性和免疫原性，可以重复多次使用；同腺病毒相比，rAAV的弥散性更强；同单纯疱疹病毒相比，rAAV无神经毒性；rAAV     

重组人α_(2a)干扰素对肿瘤病人的NK细胞的增强作用

比较了国产γHIFN－α（2a）及美国Roche公司的roferon（IFN－α（2a））对鼻咽癌病人NK细胞活性的影响，结果表明两者产品浓度为102IU／ml时，均能明显增强NK（P＜0．5）细胞的活性，在103IU／ml时，国产γHIFN－α（2a）的作用（P＜0．01）比进口的（P＜0．05）作用更强；在10IU／ml时，国产者仍有明显的增强作用，而进口者则不明显（P＞0．05），进一步用较高浓度的国产γHIFN－α（2a）进行观察表明，当浓度为104IU／ml时亦有明显的增强NK细胞活性作用；当浓度为105IU／ml时，3／5病例NK细胞活性反而有所降低。此结果表明，浓度较高时有可能引起抑制作用。     

非甾体抗炎药研究的途径和一般方法

非甾体抗炎药是治疗骨性关节炎、类风湿性关节炎的主要药物。对该类药物的研究与开发 ,一直受到学术界的重视 ,随着多种相关学科的发展 ,从不同的途径进行研究 ,在理论上和新药开发方面都取得了不少进展。本文就非甾体抗炎药研究的途径和一般方法综述如下。1　基因重组技术的应用1.1　肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ)阻断剂　包括ＴＮＦ α和ＴＮＦ β,二者与同一受体结合。关节病变组织中检测到的多是ＴＮＦ α。 5 0 %类风湿性关节炎 (ＲＡ)患者的关节液中及骨关节炎(ＯＡ)患者都能检出ＴＮＦ ,在疾病活动期 ,ＴＮＦ呈高水平分泌 ,导致一系列临床症…     

基因敲除与肾脏

基因敲除技术是一门 2 0世纪 80年代后期兴起的分子生物学技术 ,已广泛用于生长发育机制、特定基因的功能、器官的功能、疾病的发病机制和药物的筛选的研究 ;肾脏方面的相关研究也已开展 ,在肾脏发育、功能和疾病方面的研究已取得进展 ,本文介绍基因敲除在肾脏方面的研究进展。     

重组α-干扰素治疗慢性乙型肝炎时干扰素中和抗体的产生及影响因素

OBJECTIVE: To investigate the generation of neutralizing anti-interferon-alpha antibodies (NA) in patients with chronic hepatitis B in the course of interferon-alpha treatment, and analyze the factors influencing the production of the antibodies. METHODS: A total of 181 patients with histologically confirmed chronic hepatitis B were enrolled in this study. Recombinant interferon-alpha 1b (rIFN-alpha 1b) was given subcutaneously 3 times a week (5 MU once) in a treatment course lasting for 6 to 37 months (median 10.0 months). In each case, serum NA was detected with antiviral neutralization bioassay, HBeAg with enzyme-linked immunoassay (EIA) and hepatitis B virus DNA with fluorescent quantitative PCR every 1 to 3 months starting from 3 months after the initiation of the treatment. RESULTS: Of the 181 patients, 61 were positive for NA during the treatment course, resulting in an overall NA occurrence rate of 33.7%. The overall incidence rate, as well as the overall prevalence rate, was significantly higher in male than in female patients (39.1% vs 20.8%, (2)=5.622, P=0.018), and no correlations of NA generation was observed with age, pretreatment serum ALT level, serum HBeAg, serum HBV DNA level, liver histological findings or treatment course. Binary logistic regression analysis showed that the only factor in relation with NA production was gender. The prevalence rates of NA varied significantly with the treatment courses ( (2)=98.051, P=0.000). Bivariate correlation analysis showed that the prevalence rate of NA, but not the incidence of NA, was strongly related with the treatment course (r=0.855, P<0.001). CONCLUSIONS: In chronic hepatitis B patients treated with rIFN-alpha 1b, the prevalence rate of NA, instead of the incidence of NA, is significantly related to the treatment course. NA was more likely to develop in male patients to contribute to their poorer antiviral response in comparison with the female patients.     

rhG—CSF改变大鼠局灶性脑缺血预后的初步研究

目的　 研究重组人粒细胞集落刺激因子 (recombinanthumangranulocytecolony stimulatingfactor,rhG CSF)对大鼠局灶性脑缺血预后的影响以及与微管相关蛋白 (macrotubule associatedprotein 2 ,MAP 2 )mRNA表达的关系。 方法　 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,观察rhG CSF对死亡率和神经功能评分的影响。用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,测定rhG CSF用药组和非用药组的MAP 2mRNA表达水平的改变。 结果　 比较rhG CSF治疗组与非用药组 :治疗组大鼠 ,局灶性脑缺血再灌注后死亡率显著降低 ,神经功能评分明显改善。治疗组缺血侧脑组织的MAP 2mRNA表达明显提前恢复正常。结论　一定剂量的rhG CSF可以减轻脑缺血再灌注损伤 ,保护神经元 ,改善功能预后。