肿瘤相关抗原p16的表达和纯化及其在癌症检测中的应用

肿瘤抑制蛋白p16是一个细胞cyclin依赖的细胞激酶抑制因子，具有调节细胞分裂周期的重要功能，p16基因的突变与肿瘤发生密切相关。以往的研究表明与细胞恶性转变有关联的一些蛋白如p53，c—mye，p62和survivin等可以诱发机体产生自身抗体，而这些自身抗体可以作为监测肿瘤发展的标志。是否血清中p16抗体也可作为一个肿瘤诊断的标志仍需要进行评价。本研究用GST融合蛋白纯化系统对体外表达的p16重组蛋白进行纯化，并进一步将其用做肿瘤抗原对癌症病人血清中存在的p16抗体进行检测。初步结果表明在多种肿瘤病人的血清中都可检测到p16抗体。由于本研究使用的样本数有限，是否p16抗体可以作为肿瘤的一个诊断标志仍需要做进一步的研究证实。     

基因转移FasL治疗人黑素瘤的实验研究

目的探讨体内外基因转移F as配体(F as-ligand,F asL)对恶性人黑素瘤细胞凋亡的影响。方法用携带人F asL cDNA的缺陷型重组腺病毒(A d-F asL),在体外转导两株黑素瘤细胞,并使其表达;通过流式细胞仪、RT-PCR法进行F as/F asL表达检测,TUNEL法及荧光显微镜相关凋亡检测、分析。建立人黑素瘤裸鼠模型,并对其进行体内疗效观察及病理学检查。结果流式细胞仪和RT-PCR检测两株黑素瘤细胞表面均表达F as,不表达F asL,而A d-F asL转导的两株黑素瘤细胞均能表达F asL;A d-F asL能显著诱导两株黑素瘤细胞在体外凋亡或抑制其生长。体内疗效观察黑素瘤荷瘤鼠模型治疗组瘤重(0.48±0.16)g与对照组瘤重(1.02±0.19)g相比,差异有显著性(P<0.05)。肿瘤组织形态学检查,治疗组可见肿瘤细胞凋亡坏死区及炎性细胞浸润。结论F asL基因重组腺病毒在体内外均具有显著诱导人黑素瘤细胞凋亡的效果。     

rhG-CSF对外周血T淋巴细胞影响的实验研究

临床实践表明 ,重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)动员的异基因外周血干细胞移植输入的成熟T淋巴细胞是骨髓移植的 10倍以上 ,但急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的发生率和严重程度并未明显增加[1 4 ] ,aGVHD是由于成熟供体T淋巴细胞识别受体抗原被激活产生的免疫病理反应。我们对体内和体外应用G CSF后T淋巴细胞是否发生了数量和质量的改变进行了探讨。材料和方法1　G CSF动员后的供者外周血单个核细胞 (PBMNC)分离　标本来自 2 0 0 1年 1月至 12月 2 1名HLA配型相合的同胞健康供者 (男 10名 ,女 11名 ,年龄在 13～ 6 4岁 ,平均…     

碱性成纤维细胞生长因子/重组异种骨临床应用研究的初步报告

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和重组异种骨(RBX)复合(bFGF/RBX)后的临床应用.方法:将bFGF/RBX用于脊柱后路融合2例、股骨骨不连2例、骨缺损修复5例、成骨不全弯曲畸形截骨矫形1例;于术前和术后10d、4、8、12周查静脉血Ca2 、P3-、AKP及摄片.结果:(1)除2例AKP值于术前、后变化显著外,其余8例病例的AKP值及全部病例的Ca2 、p3-值均正常;(2)X线平片显示:骨痂生长丰富、愈合时间提前;(3)无排异反应、感染,术后热均于术后4～5d至正常.结论:bFGF/RBX的成骨能力强,能缩短愈合时间,是组织相容性好、骨源丰富且安全的生物复合材料.     

重组人生长激素对老年人骨盆骨折蛋白质代谢及免疫功能的影响

目的 探讨应用重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)对接受常规肠内营养支持的老年骨盆骨折患者蛋白质代谢及免疫功能的调理作用.方法 选择多发性骨盆骨折(骨折3处以上),年龄＞70岁患者30例,随机分为2组: 治疗组15例,采用标准肠内营养 rhGH[rhGH 0.2U/(kg·d)皮下注射,共计8天];另外15例作为对照组,治疗前和治疗后的第8天,分别测定血清白蛋白、血清转铁蛋白、血清前白蛋白浓度、免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)、T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8),并统计医院获得性肺炎的发生情况.结果 治疗组患者在治疗后第8天的血清白蛋白、血清转铁蛋白和血清前白蛋白水平比对照组显著升高(P＜0.05), IgA、IgG、IgM、CD3、CD4、CD4/CD8与对照组相比有明显增高(P＜0.05);治疗组患者医院获得性肺炎的发生率也较对照组显著降低(P＜0.05).结论 在肠内营养支持下加用rhGH可以明显促进老年骨盆骨折患者的蛋白质合成代谢,并改善免疫功能,增加肌肉的收缩力,增强排痰力度,减少医院获得性肺炎的发生率.     

重组血红素加氧酶-2在大肠杆菌中表达与纯化方法的研究

目的　确定重组血红素加氧酶 2在大肠杆菌中表达与纯化方法。方法　将已构建的血红素加氧酶 2(HO 2 )的重组质粒pMW1 72a HO 2转入大肠杆菌BL 2 1 ,分析不同温度及摇床转速对HO 2表达的影响 ,确定可溶性表达最佳条件。使用超声波、超速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化HO 2。检测酶活性。结果　确定了HO 2可溶性表达最佳条件为 37℃ ,(85± 5 )r min ;确定了HO 2具体纯化路线。得到蛋白纯度为 95 .0 % ,纯化倍数为 2 .9倍 ,收得率为 4 0 .9%的活性HO 2蛋白。结论　获得了纯度高、具有活性的HO 2蛋白 ,为进一步进行HO 2结构与功能之间关系的研究提供了可行的纯化路线     

重组人白细胞介素10的融合表达及鉴定

目的 研究重组人白细胞介素10(rhIL—10)载体在大肠杆菌B121(DE3)pLyse细胞中的表达，为进一步研究IL-l0在动脉粥样硬化中的作用机制奠定基础。方法 用构建成功的IL-l0—PCRT7/NT-TOPO质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLyse细胞，并通过SDS-PAGE鉴定融合表达蛋白。结果 PCRT7/NT—TOPO质粒载体成功载入rhIL-l0基因；在异丙基硫代—β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下表达的蛋白质主要以包涵体形式存在。结论 在IPTG诱导下，重组的IL-l0—PCRT7/NT—TOPO质粒载体在大肠杆菌BL2l(DE3)pLyse细胞内成功表达。     

重组人表皮生长因子对促进Ⅱ度烧伤愈合的作用

目的 探讨重组人表皮生长因子(rhEGF)对促进Ⅱ度烧伤创面愈合的作用。方法 采用自身对照研究方法,选取46例Ⅱ度烧伤患者观察最适治疗浓度创面局部应用的治疗效果及不良反应。结果 在浅Ⅱ度烧伤创面,观察组的愈合时间为(8.7±2.1)天,对照组为(12.2±2.4)天,而深Ⅱ度烧伤创面观察组的愈合时间是(13.4±2.6)天,对照组为(19.2±3.2)天。与对照组相比,观察组创面愈合时间均有明显缩短(P<0.01),结论 rhEGF对Ⅱ度烧伤创面均可有效地促进组织修复,加快创面愈合速度,有良好的促进愈合作用,而药物反应极轻微。     

人工重组促红细胞生成素治疗肾性贫血时对血压的影响

ｒ -ＨｕＥＰＯ替代治疗能有效地纠正肾性贫血 ,然而ｒ -ＨｕＥＰＯ治疗过程中导致不同程度的高血压或使原有高血压加重 ,已严重地影响了ｒ -ＨｕＥＰＯ的进一步广泛应用[1] 。ｒ -ＨｕＥＰＯ引起高血压的机制尚不十分清楚。本实验运用放免法和比色法 ,测量应用ｒ -ＨｕＥＰＯ治疗贫血纠正后未出现高血压的患者和治疗后出现高血压的患者治疗前、后血浆ＮＯ、ＥＴ、ＰＧＩ2 、ＴＸＡ2 浓度的变化 ,探讨其对ｒ -ＨｕＥＰＯ引起高血压的影响 ,以期发现ｒ -ＨｕＥＰＯ引起高血压的机制 ,为临床预防和治疗提供依据。资料与方法1　研究对象　入选…