近交系小鼠H-2基因的PCR检测方法

目的建立快速、灵敏、简便的H-2基因检测方法。方法针对近交系小鼠的H-2D区和H-2K区序列,设计两对特异性引物,分别进行DNA扩增,扩增产物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,确定H-2基因型。结果通过PCR反应扩增小鼠H-2D区和H-2K区的基因产物,可以区分不同的近交系小鼠的H-2基因型,进而可以区分出不同品系的近交系小鼠。结论利用分子生物学方法进行近交系小鼠遗传学检测,弥补了过去各种方法的不足,并且PCR方法还具备快速、简便、成本低廉、便于普遍推广并易于和国际接轨等优点。所以通过PCR方法可以进行小鼠H-2基因型检测。     

干扰素γ基因内含子1+874位点多态性与乙型肝炎病毒感染关系的研究

目的 研究干扰素γ（IFN-γ）基因内含子1＋874位点多态性与乙型肝炎病毒（HBV）感染、转归的关系,探讨慢性HBV感染的遗传易感因素.方法 采用序列特异性引物-聚合酶链反应（PCR-SSP）技术检测231例慢性HBV携带患者、165例自限性HBV感染者和135名正常对照者IFN-γ基因内含子1＋874位点T/A单核苷酸多态性.结果 慢性HBV感染组IFN-γ基因＋874位点AA基因型频率（TT、TA、AA频率分别为9.1%、12.1%、78.8%）高于正常对照组（TT、TA、AA频率分别为12.6%、23.0%、64.4%）（x2=9.60,P=0.008）;而自限性HBV感染组（TT、TA、AA频率分别为13.9%、23.7%、62.4%）和对照组之间差异无显著性（x2=0.16,P=0.92）.结论 IFN-γ基因内含子1＋874位点多态性与慢性HBV感染有关,该位点多态性可能在决定个体HBV感染遗传易感性方面有一定意义.     

人类群体遗传结构的图论主成分分析方法

目的 提出基因频率矩阵的图论主成分分析方法，探讨该法在人类群体遗传结构研究中的应用。方法 从分析基因频率矩阵的结构特征入手，将主成分分析与图论中的最小生成树有机结合，构建人类群体遗传结构的图论主成分模型，并以中国26个汉族人群HLA-A基因座遗传结构分析为例，验证图论主成分分析的科学性和适用性。结果 图论主成分分析的基本步骤可概括为：①对中心化基因频率的协方差矩阵进行主成分分析；②按图论原理求过”t维空间”个点的最小生成树；③利用求“颈”法分割最小生成树；④将最小生成树整合到二维主成分散点图中构建图论主成分分类图。根据此步骤，对中国26个汉族人群HLA-A基因座遗传结构进行了图论主成分分析，分析结果符合中华民族源与流的客观规律。结论 图论主成分分类图既可显示各群体的遗传结构特性，又可利用最小生成树的链接关系揭示各群体间的内在联系；图论主成分分析是分析人类群体遗传结构的一种较好方法。     

人类群体遗传空间结构对应分析中的"蹄型效应"及其校正方法

目的探讨人类群体遗传结构对应分析中“蹄型效应”的产生机制、遗传学解释及其校正方法.方法从分析基因频率矩阵的结构特点入手,以实例分析展示对应分析散点图中的“蹄型效应”,解释其原因,用除趋势对应分析对其进行校正,观察校正效果.结果当基因频率矩阵中存在稀有基因时,其对应分析的散点图常呈现明显的“蹄型效应”.“蹄型效应”经常会歪曲潜在遗传结构的真实形态,其产生的主要原因是对应分析中的χ^2距离不相似测度高估了稀有基因的作用,除趋势对应分析对“蹄型效应”有明显的校正作用.结论在人类群体遗传结构对应分析中,当出现“蹄型效应”时,需认真分析基因频率矩阵的结构,寻找“蹄型效应”产生原因并给出合理的遗传学解释,以免做出错误结论,并可用除趋势对应分析方法校正“蹄型效应”.     

苏拉明联合阿霉素对肺腺癌小鼠移植瘤组织中HIF-1α和VEGF表达的调控及意义

目的研究苏拉明联合阿霉素对肺腺癌小鼠移植瘤组织中缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的调控及对移植瘤增殖的影响。方法复制肺腺癌LA795细胞的T739小鼠异体移植瘤模型。40只实验小鼠皮下移植处均成瘤,接种后4d随机分为4组,10只/组。对照组:生理盐水0.2 m l/只,于接种后第4天开始腹腔注射,1次/d,共16次;阿霉素组:阿霉素(2 mg.kg-1.d-1)溶于0.2 m l生理盐水中,于接种后第4,11,18天各腹腔注射1次;苏拉明组:苏拉明(10 mg.kg-1.d-1)溶于0.2 m l生理盐水中,余同对照组;联合组(阿霉素 苏拉明):按阿霉素组和苏拉明组用药。肿瘤接种后24 d,测量小鼠皮下肿瘤最大长径(a)和横径(b),计算肿瘤体积;处死后剥离皮下肿瘤称湿重,收集肿瘤标本固定,用免疫组化和图像分析系统定量检测肿瘤组织H IF-1α、VEGF、微血管密度(MVD)和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果各治疗组肿瘤体积和湿重均低于对照组,其中以联合组最低,差异有统计学意义。苏拉明组和联合组:肿瘤组织中H IF-1α和VEGF的灰度值均高于对照组,MVD的灰度值和PCNA增殖指数均低于对照组;H IF-1α和VEGF的灰度值以联合组最高,MVD和PCNA增殖指数以联合组最低,差异有统计学意义。阿霉素组:H IF-1α和VEGF的灰度值均高于对照组,但差异无统计学意义;低于联合组,差异有统计学意义;MVD低于对照组,但差异无统计学意义;高于联合组,差异有统计学意义;而PCNA增殖指数低于对照组,高于联合组,差异有统计学意义;各组间H IF-1α和VEGF的灰度值与MVD和PCNA增殖指数呈反向变化,直线相关分析显示均呈负相关。结论阿霉素可能协同苏拉明通过抑制H IF-1α和VEGF的表达,从而抑制肿瘤组织新生血管形成和肿瘤细胞增殖。     

三羟异黄酮保护内毒素诱导急性肺损伤实验研究

目的探讨三羟异黄酮对内毒素(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)的保护作用及作用机制。方法将32只大鼠随机分为4组(每组8只):生理盐水组(S组)、三羟异黄酮组(G组)、LPS组(L组)和三羟异黄酮预处理组(G L组)。LPS刺激后,观察6 h。以肺湿干重比(W/D)和支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量作为肺损伤的指标。通过检测髓过氧化物酶(MPO)活性及BALF中细胞学分析来评估中性粒细胞的聚集和活性。采用RT-PCR,检测ICAM-1mRNA在肺组织表达的变化。肺组织经HE染色后,观察组织病理学上的改变。结果L组大鼠BALF总蛋白和W/D都较对照组明显升高(P<0.01);同S组比较,在G L组LPS导致了BALF、肺组织匀浆MPO活性及BALF中PMN数目显著增加(P<0.01);L组大鼠肺组织中ICAM-1mRNA表达水平显著高于S组(P<0.01)。预先给予三羟异黄酮可以非常显著抑制LPS引起这些指标的改变(P<0.05或0.01)。三羟异黄酮预处理也改善了LPS所致肺组织形态学上严重的损伤。上述所有参数在G组与S组间差异无统计学意义。结论三羟异黄酮预处理能够减轻LPS诱导的大鼠急性肺损伤。这种效果可能与其下调ICAM-1的表达而抑制PMN在肺组织的聚集、激活有关。     

研究生作为PBL指导教师在药理学教改中的探索

药理系首次进行聘用研究生作为PBL指导教师的教改尝试,深刻体会到其重要性所在。研究生具有知识面宽、概念清楚、基础知识扎实等诸多优势,有利于提高本科生的教学质量。药理系组织研究生参加教学培训、开展讨论、吸纳有益的建议;提高研究生对PBL教学的重视程度、消除研究生顾虑;争取研究生导师的大力支持;并由教授亲自检查并督促研究生教学工作。作为PBL教学指导教师,研究生是学生与任课教授、讲师之间的中介人和桥梁,有利于提高学生的综合素质、教师教学水平。     

全反式视黄酸对体外培养的人体大隐静脉内膜平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的研究全反式视黄酸(atRA)对体外培养的人体大隐静脉内膜增厚、平滑肌细胞增生与凋亡的影响。方法30小段(1 cm长)人体大隐静脉(HSV),随机分成HSV组、atRA组和对照组(n=10),atRA组和对照组均体外培养14 d。atRA组:培养液中含atRA100μM;对照组:培养液中含同等量无水酒精(atRA溶剂)。对HSV组及培养后的atRA组、对照组标本进行取材固定,M asson染色,免疫组化测定增殖细胞核抗原(PCNA)及TUNEL法检测平滑肌细胞凋亡,计算机图象分析仪测量血管内膜厚度、计算内膜增生指数及细胞增殖和凋亡百分比。结果体外培养人体大隐静脉能产生明显的内膜增生和平滑肌细胞增殖(P<0.05);atRA组内膜厚度、增生指数及PCNA阳性细胞百分数均明显低于对照组(P<0.05)。而凋亡细胞百分数则明显高于对照组(P<0.05)。结论atRA可以抑制体外培养人体大隐静脉内膜增厚及平滑肌细胞增生,促进平滑肌细胞凋亡。     

GSTP1第5外显子多态性与COPD关系研究

目的研究谷胱甘肽S转移酶P1基因(GSTP1)第5外显子遗传多态(A/G)与中国西南汉族人群慢性阻塞性肺疾病(COPD)的相关性.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态分析法(PCR-RFLP),检测91例COPD患者与87例健康对照者GSTP1第5外显子各种基因型和等位基因频率,并分析其与COPD两种临床表型、肺损伤CT改变的关系.结果GSTP1第5外显子各种基因型频率及等位基因频率在COPD组与对照组间的分布差异无显著性(P>0.05),Ile105的频率在肺气肿型(红喘型)中显著高于支气管炎型(紫肿型)(P<0.05),携有Ile105的患者,其CT肺气肿损伤评分显著高于携有Ile105的患者(P<0.05).结论GSTP1第5外显子遗传多态(A/G)可能与中国西南汉族人群COPD易感性无关,但可能与COPD的临床表型、肺实质损伤有关.     

新一代三唑类抗真菌药伏立康唑的药理学性质及临床应用

近20年来,临床上广谱抗生素、化疗药物和免疫抑制剂大量应用,爱滋病的流行以及放射治疗和器官移植的广泛进行,真菌病尤其是深部真菌病发病率大幅上升[1].同时,耐药菌株的出现也使对一些有生命危险的侵袭性真菌感染病人的治疗难度加大.在常规治疗中,两性霉素B是抗真菌感染的标准药物,但由于其毒性大且没有口服剂型,严重限制其应用.而三唑类药物氟康唑和伊曲康唑虽具有安全性良好的优点,但抗菌谱又相对较窄[2].